心絞痛患者血清內脂素水平變化與激活蛋白-1、基質金屬蛋白酶-2的關系

王婷，夏大勝，何強，葉緒英，梁景一，王麗

(1天津醫科大學一中心臨床學院，天津 300192；2 天津市第一中心醫院)

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·論著·

心絞痛患者血清內脂素水平變化與激活蛋白-1、基質金屬蛋白酶-2的關系

王婷1，夏大勝2，何強2，葉緒英2，梁景一2，王麗2

(1天津醫科大學一中心臨床學院，天津 300192；2 天津市第一中心醫院)

摘要：目的探討心絞痛患者血清內脂素與激活蛋白-1(AP-1)和基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)的關系。方法選擇不穩定型心絞痛患者(UAP組)75例、穩定型心絞痛患者(SAP組)65例和健康對照組60例，采用ELISA法檢測其血清內脂素、磷酸化c-Jun(反映活性AP-1數量)、MMP-2及組織金屬蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)的水平。結果UAP組血清內脂素、磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2均高于SAP組(P均<0.01)；SAP組上述指標均高于對照組(P均<0.01)；Pearson相關分析顯示心絞痛患者血清內脂素水平與磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2呈正相關(r分別為0.662、0.657、0.456、0.273，P均<0.01)；磷酸化c-Jun與MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2呈正相關(r分別為0.588、0.433、0.184，P均<0.05)。結論心絞痛患者的血清內脂素水平明顯升高，其可能通過促進AP-1活化、增加MMP-2分泌而降低冠脈粥樣硬化斑塊的穩定性。

關鍵詞：心絞痛；內脂素；激活蛋白-1；基質金屬蛋白酶-2

炎癥反應貫穿動脈粥樣硬化病變發展始終，也是造成斑塊不穩定的重要因素。內脂素是一種由內臟脂肪組織合成與分泌的細胞因子，具有與前B細胞克隆增強因子相同的結構，與冠心病關系密切[1]。轉錄因子激活蛋白-1(AP-1)可通過對多種動脈粥樣硬化炎癥因子的調控，參與調節動脈粥樣硬化的發生和發展。基質金屬蛋白酶(MMPs)是一類鈣、鋅依賴的中性蛋白酶家族，通過對細胞外基質的降解及重構參與動脈粥樣硬化的病理過程，影響斑塊的穩定性[2]。本文旨在探討心絞痛患者血清內脂素與磷酸化c-Jun(反映活性AP-1數量)、MMP-2的關系及其在冠狀動脈粥樣硬化性病變進展中的作用。

1資料與方法

1.1臨床資料選取2014年6月~2015年6月因胸悶、胸痛就診于天津市第一中心醫院并行冠狀動脈造影患者200例，其中不穩定型心絞痛(UAP)75例，穩定型心絞痛(SAP)65例，均符合中華醫學會2007年冠心病診斷標準。UAP組男64例、女11例，年齡(56.16±5.93)歲，BMI(26.31±2.85)kg/m2，腰臀比0.96±0.10；其中高血壓44例，糖尿病40例，有吸煙史47例。SAP組男50例、女15例，年齡(58.37±7.32)歲，BMI(25.01±2.52)kg/m2，腰臀比0.91±0.07；其中高血壓29例，糖尿病28例，有吸煙史22例。另外冠狀動脈造影正常、運動平板試驗陰性者60例為對照組，男47例、女13例，年齡(55.98±7.46)歲，BMI(24.43±3.24)kg/m2，腰臀比0.96±0.06；其中高血壓20例，糖尿病7例，有吸煙史17例。三組均排除合并嚴重感染性疾病、急性心肌梗死、重度心力衰竭、惡性腫瘤、慢性肝腎功能不全、結締組織疾病者，三組年齡、性別比較無統計學差異(P均>0.05)。

1.2血糖、血脂及胰島素水平檢測三組均隔夜禁食12 h，于次日清晨7：00采集空腹肘靜脈血5 mL送至醫院檢驗中心。使用羅氏P800全自動生化儀檢測甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)；采用葡萄糖氧化酶法測量空腹血糖(FPG)，電化學發光法測量空腹胰島素(FINS)。

1.3血清內脂素、磷酸化c-Jun、MMP-2及組織金屬蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)水平檢測三組均隔夜禁食12 h，于次日清晨7：00采集空腹肘靜脈血5 mL，以3 000 r/min離心15 min后分離血清，存于-80 ℃冰箱中待檢。采用ELISA法檢測內脂素、磷酸化c-Jun、MMP-2及TIMP-2，嚴格按照說明書操作，內脂素試劑盒購自美國ADL公司，磷酸化c-Jun試劑盒購自美國CST公司，MMP-2、TIMP-2試劑盒購自美國R&D System 公司。

2結果

2.1三組FPG、FINS、血脂比較見表1。

表1　三組FPG、FINS、血脂比較

注：與對照組比較，aP<0.01 ；與SAP組比較，bP<0.01。

2.2三組血清內脂素、磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2水平比較見表2。

表2　三組血清內脂素、磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2水平比較

注：與對照組比較，aP<0.01；與SAP組比較，bP<0.01。

2.3Pearson相關分析結果心絞痛患者血清內脂素與磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2均呈正相關(r分別為0.662、0.657、0.456、0.273，P均<0.01)；磷酸化c-Jun與MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2均呈正相關(r分別為0.588、0.433、0.184，P均<0.05)。

3討論

作為一種新的脂肪因子，內脂素不僅能促進脂肪的積聚和合成，還是一種重要的促炎癥因子，可促進IL-6、IL-8及MCP-1等炎癥因子的分泌和釋放，誘導轉錄因子NF-κB的活化而參與機體炎癥反應[3~5]。此外，內脂素可通過促進血管平滑肌細胞增殖與變性，造成血管內皮細胞功能紊亂以及促進斑塊形成和破裂等促進動脈粥樣硬化病變的發生、發展[6]。AP-1是一種重要的轉錄調控因子，參與多種細胞信號轉導過程，在體內主要以c-Jun和c-Fos組成的異源二聚體形式存在，其活化形式主要為c-Jun的磷酸化。研究表明AP-1可誘導內皮細胞黏附分子產生、增加趨化因子表達，并通過上調巨噬細胞表面LOX-1的表達增加泡沫細胞生成，進而促進動脈粥樣硬化形成與發展[7~9]。本文心絞痛患者血清內脂素和AP-1水平均較冠脈造影正常者明顯增高，且UAP組高于SAP組，提示內脂素和AP-1參與冠狀動脈粥樣硬化斑塊形成并和斑塊穩定性相關。

MMP-2主要由動脈壁中膜和外膜的平滑肌細胞、巨噬細胞、成纖維細胞等合成與分泌，是降解細胞外基質(ECM)骨架蛋白Ⅳ型膠原的主要酶之一。MMPs組織抑制物(TIMPs)是MMPs的天然抑制劑之一，在生理狀態下，MMPs與TIMPs之間保持著動態平衡，共同協調ECM的降解與重建，在維持動脈粥樣硬化斑塊穩定性方面發揮重要作用。研究發現MMP-2主要通過以下方面影響粥樣硬化斑塊的形成和破裂:①通過降解ECM，促進血管平滑肌細胞的移行和增殖并促進其分泌更多的ECM而形成粥樣硬化斑塊；②破壞斑塊纖維帽成分，降低其穩定性，導致病變進展惡化；③破壞細胞與基質間的相互作用，促進可溶性Fas配體和膜結合型腫瘤壞死因子-α的釋放，誘導血管平滑肌細胞凋亡，加速粥樣硬化的發展[10,11]。本文心絞痛患者血清MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2均較對照組明顯增高，且UAP組高于SAP組，表明MMP-2和TIMP-2與斑塊穩定性密切相關。

研究表明，內脂素可通過激活NF-κB途徑上調人單核細胞中MMP-2和MMP-9的表達及活性[12]。此外，在MMPs家族的許多成員如MMP-2、MMP-3、MMP-9等啟動子區域均含有一個或多個AP-1結合位點，且AP-1的活化是促使其高表達的關鍵轉錄因子。但目前關于內脂素、AP-1及MMPs之間相互作用的研究較少。本文發現，心絞痛患者血清內脂素分別與磷酸化c-Jun、MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2呈正相關，且磷酸化c-Jun分別與MMP-2、TIMP-2及MMP-2/TIMP-2呈正相關，推測內脂素可能通過促進AP-1的活化而增加MMP-2的分泌，在MMP-2升高的同時，TIMP-2也代償性增高，但不足以抵消MMP-2的炎性作用，最終導致MMP-2/TIMP-2的動態平衡被打破，進而促進冠狀動脈粥樣硬化斑塊由穩定向不穩定方向發展。其可能機制為內脂素通過誘導氧化應激反應，提高內皮細胞活性氧化物水平，從而促進c-Jun的活化[13]；其次，內脂素通過刺激血管緊張素原生成、增加血管緊張素轉換酶活性而促進血管緊張素Ⅱ產生，后者與AT1受體特異性結合并通過MAPK、JNK等細胞內信號傳導通路實現c-Jun磷酸化[14,15]。

綜上所述，心絞痛患者體內高水平的內脂素可能通過促進轉錄因子AP-1的活化增加MMP-2的分泌，從而促進冠狀動脈粥樣硬化斑塊由穩定向不穩定方向發展。內脂素可作為判斷冠心病患者斑塊穩定性的有用指標。

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Changes in levels of serum visfatin and the relationships with activator protein-1 and MMP-2 in patients with angina pectoris

WANGTing1,XIADasheng,HEQiang,YEXuying,LIANGJingyi,WANGLi

(1TheFirstCenterClinicalCollegeofTianjinMedicalUniversity,Tianjin300192,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the relationships between serum visfatin and activator protein-1 (AP-1), matrix metalloproteinase 2 (MMP-2) in patients with angina pectoris.MethodsThe serum visfatin, phosphorylated c-Jun, MMP-2 and TIMP-2 were detected in 75 cases of patients with unstable angina pectoris (UAP group), 65 cases of stable angina pectoris (SAP group) and 60 cases of healthy controls (control group) by using ELISA.ResultsThe serum levels of visfatin, phosphorylated c-Jun, MMP-2, TIMP-2 and the ratio of MMP-2/TIMP-2 in the UAP group were significantly higher than those in the SAP group (all P<0.01). All the parameters mentioned above were higher in the SAP group than those of the control group (all P<0.01). Pearson correlation analysis showed that the serum visfatin level was positively correlated with phosphorylated c-Jun, MMP-2, TIMP-2 and MMP-2/TIMP-2 (r=0.662, 0.657, 0.456 and 0.273, respectively; all P<0.01), while phosphorylated c-Jun was positively correlated with MMP-2, TIMP-2 and MMP-2/TIMP-2 (r=0.588, 0.433 and 0.184, respectively; all P<0.05).ConclusionThe serum levels of visfatin in patients with angina pectoris are significantly increased, and it may lead to the unstability of atherosclerotic plaque through the regulation of MMP-2′s secretion by activating AP-1.

Key words:angina pectoris; visfatin; activator protein-1; matrix metalloproteinase 2

(收稿日期：2015-12-01)

中圖分類號：R541.4

文獻標志碼：A

文章編號：1002-266X(2016)05-0001-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.05.001

通信作者簡介：夏大勝(1962-)，男，主任醫師，教授，博士，主要從事冠心病和高血壓病的基礎研究為與臨床診治。E-mail: xiadasheng@vip.163.com

作者簡介：第一王婷(1988-)，女，在讀碩士，主要研究方向為冠心病的診斷及治療。E-mail:TingW_tjmu@outlook.com

基金項目：天津市衛生局科技基金資助項目(2010KY06)。