肺癌組織中Kiss-1蛋白的表達變化及意義

王嘉，孫佳瑋，韓雙雙，孫武裝，王鵬羽，王麗紅

(河北醫科大學第一醫院，石家莊050031)

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肺癌組織中Kiss-1蛋白的表達變化及意義

王嘉，孫佳瑋，韓雙雙，孫武裝，王鵬羽，王麗紅

(河北醫科大學第一醫院，石家莊050031)

摘要：目的 探討Kiss-1蛋白在肺癌組織中的表達變化及意義。方法 選取肺癌患者60例,其中肺鱗癌3例(鱗癌組)、腺癌27例(腺癌組)，另擇肺癌同側距腫瘤邊緣5 cm以上的肺泡(25例)(肺泡組)及支氣管正常組織(29例)(支管組)。采用免疫組化SP法檢測Kiss-1蛋白的表達，并分析其與臨床病理參數的關系。結果Kiss-1蛋白在肺鱗癌和肺腺癌組中的表達均顯著低于肺泡組或支氣管組(P均<0.01)；Kiss-1蛋白表達與肺癌淋巴結轉移、TNM分期明顯相關(P均<0.05),與肺癌患者性別、年齡及腫瘤大小、分化程度、組織學類型無明顯相關(P均>0.05)。結論 Kiss-1蛋白在肺癌組織中表達降低，其在肺癌的發生和轉移過程中發揮抑癌作用。

關鍵詞：肺腫瘤；Kiss-1蛋白；免疫組織化學

肺癌是人類常見的呼吸系統惡性腫瘤，其發病率和病死率均居惡性腫瘤首位[1,2]，嚴重威脅人類生命健康。肺癌的病理組織學分型主要包括鱗癌、腺癌、腺鱗癌、未分化癌等，其中以鱗癌和腺癌常見，約占全部上皮來源肺惡性腫瘤的70%左右[3]。其發病機制未明，目前認為是由癌基因和抑癌基因共同參與調節的復雜過程。研究表明，Kiss-1基因作為腫瘤轉移抑制基因與多種惡性腫瘤相關，其蛋白產物對腫瘤的浸潤和轉移發揮抑制作用[4]。2010年6月～2013年6月，本研究觀察了Kiss-1蛋白在肺鱗癌、肺腺癌及正常支氣管和肺泡組織中的表達情況，分析其與臨床病理參數的關系，探討其在肺癌發病過程中的作用。

1資料與方法

1.1臨床資料肺癌患者60例(肺癌組)，均符合2004版WHO肺腫瘤分類診斷標準，經病理檢查確診。男41 例、女19 例，年齡42～81(63.57±9.06)歲。肺鱗癌33例(鱗癌組)，腺癌27例(腺癌組)；低分化17例，中高分化43例；伴有周圍淋巴結轉移26例，無周圍淋巴結轉移34例。對照組標本選取肺癌同側距腫瘤邊緣5 cm以上的肺泡(25例)(肺泡組)及支氣管正常組織(29例)(支氣管組)。入選者術前均未進行化療或放療。各組年齡、性別有可比性。本研究獲得河北醫科大學第一醫院倫理委員會的批準。

1.2組織Kiss-1蛋白的檢測采用免疫組化SP法。所有標本均經甲醛溶液固定，常規石蠟包埋切片，將待檢測切片放入恒溫烤箱，60~65 ℃過夜，檸檬酸緩沖液煮沸修復，嚴格按照免疫組化試劑盒說明書步驟進行，DAB顯色，蘇木素復染，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察結果。以已知Kiss-1蛋白陽性切片作陽性對照，以PBS液代替一抗作陰性對照。兔抗人Kiss-1蛋白(FL-145)sc-15400單克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，免疫組化試劑盒、濃縮型DAB試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

結果判定：采用雙盲法顯微鏡下觀察結果，Kiss-1蛋白為細胞質染色，胞質棕黃色為陽性，不著色為陰性。以陽性細胞數及染色強度綜合判定[5]。按視野內陽性細胞所占總細胞數的比例計分，≤5%為0分，6%~25%為1分，26%~50%為2分，≥51%為3分；染色強度:不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。每張切片隨機取5個400倍視野，二者相加，≤4分為陰性，>4分為陽性。

1.3統計學方法采用SPSS16.0統計軟件，計數資料以頻數或百分比表示，比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1各組Kiss-1蛋白的表達Kiss-1蛋白在肺癌細胞質呈淡黃色，弱陽性表達；肺泡細胞及支氣管黏膜上皮細胞質呈棕黃色，強陽性表達。Kiss-1蛋白陽性表達率在肺癌組為30.00%(18/60)，鱗癌組為30.30%(10/33)，腺癌組為29.63%(8/27)，肺泡組為80.00%(20/25)，支氣管組為89.66%(26/29)，Kiss-1蛋白陽性表達率在肺癌組、鱗癌組和腺癌組中均顯著低于肺泡組和支氣管組(χ2分別為35.660、27.445、25.563,P均<0.01)。Kiss-1蛋白表達在肺泡組與支氣管組之間比較差異無統計學意義(χ2=0.374，P=0.541)。

2.2Kiss-1蛋白表達與肺癌臨床病理參數的關系見表1。

表1　肺癌Kiss-1蛋白表達與臨床病理參數之間的關系

3討論

Kiss-1是最早在黑色素瘤中發現的腫瘤轉移抑制基因，基因定位于1號染色體短臂3區2帶，編碼一個由145個氨基酸組成的親水性蛋白質。研究發現，Kiss-1基因在多種惡性腫瘤的發病過程中起抑癌作用。Masui等[6]通過檢測30份胰腺癌組織及癌旁胰腺組織中Kiss-1 mRNA表達情況，發現Kiss-1在胰腺癌組織中的表達明顯低于癌旁正常組織。Mitchell等[7]通過研究Kiss-1在胃癌和癌旁組織中的表達情況及與臨床病理參數的關系，提出Kiss-1的低表達在胃癌的浸潤、淋巴結轉移、遠處轉移過程中發揮著重要作用。張洪蘭等[8]研究發現，Kiss-1蛋白表達在非小細胞肺癌組明顯低于正常對照組，參與非小細胞肺癌的發生發展過程。Mooez等[9]采用半定量逆轉錄聚合酶鏈反應檢測乳腺癌及正常乳腺組織中Kiss-1 mRNA的表達，發現Kiss-1在乳腺癌組織中表達明顯低于乳腺正常組織。嚴寶國等[10]檢測食管鱗癌及癌旁正常組織中Kiss-1的表達，提示Kiss-1表達缺失參與了食管鱗癌的發生。這些研究結果進一步提示，Kiss-1在多種組織類型的惡性腫瘤中發揮抑癌作用。本文重點探討Kiss-1在肺鱗癌和肺腺癌發生發展過程中的作用。

通常將原發于支氣管-肺的癌統稱為肺癌，是指主要發生于支氣管黏膜上皮細胞、少數發生于肺泡上皮細胞的惡性腫瘤。本組研究對象包括肺鱗癌33例和肺腺癌27例，是肺癌中最常見的兩種病理組織類型。由于不同的起源，肺鱗癌和腺癌可能存在著不同的癌變機制。為了減少偏倚，本研究特設立支氣管和肺泡雙正常對照組，分析Kiss-1蛋白在組間的表達情況，以提高研究數據的可靠性。研究結果顯示，Kiss-1蛋白在肺癌組中表達顯著低于支氣管組和肺泡組，提示Kiss-1發揮類抑癌基因作用，通過蛋白表達下調參與肺癌發病過程。Kiss-1蛋白表達在肺鱗癌組、腺癌組中均顯著低于肺泡組或支氣管組，其在雙對照組間比較差異無統計學意義，進一步提示Kiss-1蛋白作為抑癌因子，在兩種組織類型肺癌的發病中可能存在相同或相似的作用機制，需進一步研究。

本研究中，將60例肺癌患者按照臨床病理特征(性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、組織學類型)進行分組，比較各組間Kiss-1蛋白表達情況，差異無統計學意義，說明Kiss-1蛋白表達與肺癌患者的性別、年齡及腫瘤大小、分化程度、組織學類型均無關。Kiss-1蛋白表達在早期(Ⅰ期+Ⅱ期)肺癌組明顯高于晚期(Ⅲ期+Ⅳ期)肺癌組，表明Kiss-1蛋白表達與肺癌的病程進展密切相關；Kiss-1蛋白表達在肺癌無淋巴結轉移組明顯高于有淋巴結轉移組，提示Kiss-1蛋白表達下調或缺失可作為肺癌發生淋巴結轉移的一個指標，有潛力成為判斷肺癌預后的預警指標。以上結果與Zheng等[11]研究結果相一致。目前認為，Kiss-1可能的作用機制是通過與其受體GPR54結合激活細胞內磷脂酶C促進鈣離子釋放，抑制腫瘤細胞趨化、增殖及轉移等[12,13]。

綜上，Kiss-1在肺鱗癌和肺腺癌的發生與進展過程中發揮相似的抑癌和抑制腫瘤轉移作用，有潛力成為判斷肺癌預后的生物學指標。進一步深入研究，可為制訂肺癌個體化治療方案和選擇基因治療靶點提供新思路。

參考文獻：

[1] 姚孟飛.腫瘤轉移抑制基因Kiss-1在惡性腫瘤轉移的研究進展[J].山西醫藥雜志(下半月版),2013,42(14):771-773.

[2] 吳在德，吳肇漢.外科學[M].7版.北京：人民衛生出版社，2008：338-339.

[3] 邢傳平,劉斌,董亮.免疫組織化學標記結果的判斷方法[J].中華病理學雜志,2001,30(4):318.

[4] Welch DR, Chen P, Miele ME, et al. Microcell-mediated transfer of chromosome 6 into metastatic human C8161 melanoma cells suppresses metastasis but does not inhibit tumorigenicity[J]. Oncogene, 1994,9(1):255-262.

[5] 龍孝斌,李漢賢.KiSS-1基因在腫瘤中的研究進展[J].實用癌癥雜志,2008,23(3):316-318,321.

[6] Masui T, Doi R, Mori T, et al. Metastin and its variant forms suppress migration of pancreatic cancer cells[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2004,315(1):85-92.

[7] Mitchell DC, Abdelrahim M, Weng J, et al. Regulation of KiSS-1 metastasis suppressor gene expression in breast cancer cells by direct interaction of transcription factors activator protein-2alpha and specificity protein-1[J]. J Biol Chem, 2006,281(1):51-58.

[8] 張洪蘭,舒紅,趙曉東,等.非小細胞肺癌組織中KiSS-1的表達及意義[J].山東醫藥,2009,49(43):37-38.

[9] Mooez S, Malik FA, Kayani MA, et al. Expressional alterations and transcript isoforms of metastasis suppressor genes (KAI1 and KiSS1) in breast cancer patients[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2011,12(10):2785-2791.

[10] 嚴寶國,董小川,向正凱.食管鱗狀細胞癌組織中KiSS-1的表達及其臨床意義[J].腫瘤防治研究,2014,41(9):990-992.

[11] Zheng S, Chang Y, Hodges KB, et al. Expression of KISS1 and MMP-9 in non-small cell lung cancer and their relations to metastasis and survival[J]. Anticancer Res, 2010,30(3):713-718.

[12] Mead EJ, Maguire JJ, Kuc RE, et al. Kisspeptins: a multifunctional peptide system with a role in reproduction, cancer and the cardiovascular system[J]. Br J Pharmacol, 2007,151(8):1143-1153.

[13] Kuohung W, Kaiser UB. GPR54 and KiSS-1: role in the regulation of puberty and reproduction[J]. Rev Endocr Metab Disord, 2006,7(4):257-263.

Expression changes of Kiss-1 protein in lung cancer and the clinical significance

WANGJia,SUNJiawei,HANShuangshuang,SUNWuzhuang,WANGPengyu,WANGLihong

(TheFirstHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050031,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression changes of Kiss-1 protein in the lung cancer tissues and its clinical significance. MethodsThe expression of Kiss-1 in 60 cases of patients with lung cancer including 33 cases of patients with lung squamous cell carcinoma (squamous cancer group) and 27 cases of patients with lung adenocarcinoma (adenocarcinoma group), 25 cases of normal alveolar tissues which were taken from 5 cm above the edge of the lung cancer tissues (alveolar group) and 29 cases of normal bronchial tissues (bronchial group) was measured by immunohistochemistry and we analyzed their relationships with the clinical and pathological data. ResultsThe expression of Kiss-1 protein in the squamous carcinoma group and adenocarcinoma group was both significantly lower than that in the alveolar group and bronchial group (all P<0.01). The expression of Kiss-1 protein of lung cancer was significantly related with lymph node metastasis and TNM stage (all P<0.05). The expression of Kiss-1 protein of lung cancer was not significantly related with gender, age, tumor size, the degree of differentiation and histological type (all P>0.05). ConclusionKiss-1 expression was decreased in the lung cancer tissues, which played a tumor suppressor role in the occurrence and metastasis of lung cancer.

Key words:lung neoplasms; bronchi; Kiss-1 protein; immunohistochemistry

(收稿日期：2015-09-20)

中圖分類號：R734.2

文獻標志碼：A

文章編號：1002-266X(2016)01-0018-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.01.006

作者簡介：第一王嘉(1971-)，女，副教授，主要研究方向為呼吸系統疾病診治。E-mail:Tim32@126.com

基金項目：河北省醫學科學研究重點課題計劃(20090333)。