前列腺癌組織中ERG蛋白的表達(dá)變化及意義

景志亮 ，陳永華，曹軍，趙穎海，柳建軍

(1廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，廣東湛江 524001；2廣東醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室)

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前列腺癌組織中ERG蛋白的表達(dá)變化及意義

景志亮1，陳永華1，曹軍1，趙穎海2，柳建軍1

(1廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，廣東湛江 524001；2廣東醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室)

摘要：目的觀察前列腺癌(PCa)組織中ERG 蛋白的表達(dá)變化并探討意義。方法 選擇144例PCa和100例良性前列腺增生(BPH)患者，取其前列腺組織，采用免疫組化MaxVision法檢測ERG 蛋白，并分析其與相關(guān)臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果PCa及BPH組織中ERG蛋白的陽性表達(dá)率分別為25.0%和0，兩者比較，P<0.01；PCa組織中ERG蛋白表達(dá)與患者的年齡、術(shù)前前列腺特異性抗原值及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P均>0.05)，與Gleason 評分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.175,P<0.05)，Gleason 評分≤7分組ERG蛋白表達(dá)率高于Gleason 評分>7分組(P<0. 05)。結(jié)論 PCa患者前列腺癌組織中ERG蛋白表達(dá)升高，ERG蛋白的檢測可能有助于PCa患者的鑒別診斷及病理分級。

關(guān)鍵詞：前列腺腫瘤；ERG蛋白；前列腺增生；Gleason 評分

前列腺癌(PCa)是歐美國家最常見的男性惡性腫瘤[1]。早期診斷和早期治療PCa可改善臨床預(yù)后，降低病死率。傳統(tǒng)早期診斷是通過檢測血清中前列腺特異性抗原(PSA)來實(shí)現(xiàn)，但該檢測方法的特異性不強(qiáng)。Tomlins等[2]發(fā)現(xiàn)受雄激素調(diào)節(jié)的跨膜絲氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)可與多個(gè)ETS轉(zhuǎn)錄因子融合，進(jìn)而誘導(dǎo)后者在蛋白質(zhì)水平上的過度表達(dá)。TMPRSS2在前列腺原發(fā)癌及轉(zhuǎn)移癌中高表達(dá)，且與腫瘤細(xì)胞的分化程度相關(guān)[3]。ETS基因是一系列擁有與鳥類白血病病毒E26高度保守的同源序列的轉(zhuǎn)錄因子，通過參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移，對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響[4]。人類ETS轉(zhuǎn)錄因子家族共有27種基因，根據(jù)結(jié)構(gòu)不同分為11個(gè)亞型，包括ETS、ERG、ELG、ELF等。在全部ETS 基因融合中，TMPRSS2-ERG最常見[5]。而ERG蛋白的表達(dá)與TMPRSS2-ERG融合基因的狀態(tài)有顯著相關(guān)性，可以精確反映TMPRSS2-ERG的狀態(tài)[6]。本實(shí)驗(yàn)旨在通過研究PCa組織中ERG 蛋白的表達(dá)情況及其與相關(guān)臨床病理特征的關(guān)系，初步評估其臨床應(yīng)用價(jià)值。

1資料與方法

1.1臨床資料144份PCa穿刺活檢標(biāo)本及100份良性前列腺增生(BPH)標(biāo)本取自廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科2010年10月~2014年7月存檔蠟塊，均經(jīng)兩名以上資深病理醫(yī)師確診。患者均為男性，年齡50～92歲；術(shù)前血PSA水平1.11～4 164 μg/L；Gleason評分4～10分；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶者11例。

1.2組織中ERG蛋白的檢測標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋, 5 μm厚度切片。采用免疫組化MaxVision法檢測, 按試劑盒操作說明進(jìn)行。兔抗人ERG 單克隆抗體為北京中杉金橋公司產(chǎn)品。即用型快速免疫組化MaxVisionTM檢測試劑盒(兔)為福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司產(chǎn)品。DAB顯色試劑盒為北京中杉公司產(chǎn)品。每一批實(shí)驗(yàn)均設(shè)置陽性和陰性對照, 以血管內(nèi)皮細(xì)胞為陽性內(nèi)對照, 陰性對照用PBS代替一抗。

1.3免疫組化結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)ERG蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞核，為淡黃色至棕褐色顆粒狀。綜合染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)量積分，每張切片隨機(jī)選取至少5個(gè)高倍視野，采用半定量計(jì)分方法。①按著色深淺評分: 未著色為0 分，淺黃色為1分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分；②按顯色細(xì)胞比例評分：陽性細(xì)胞數(shù)≤5%為0分，6%～25% 為1分， 26%～50% 為2 分，51%～75% 為3 分，>75%為4 分; 根據(jù)兩項(xiàng)指標(biāo)的積分?jǐn)?shù)進(jìn)行最終判定:0分為-，1～ 4分為+，5～8分為++，9～12分為+++。將+和++定義為低表達(dá)，+++定義為高表達(dá)。對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行雙盲法評估。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1PCa及BPH組織中ERG蛋白的表達(dá)144份PCa組織與100份BPH組織中ERG蛋白陽性表達(dá)率分別為25.0%(36/144)和0(0/100)，兩種組織比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=29.327，P=0.000)。

2.2PCa組織中ERG蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系見表1。

2.3相關(guān)性分析Gleason 評分與ERG蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0. 05)見表2。

表1　PCa組織中ERG蛋白表達(dá)與臨床病理

表2　PCa組織中ERG蛋白表達(dá)與Gleason 評分的

3討論

本研究選用較大樣本量PCa患者(n>100)，并設(shè)置BPH組作為對照，采用高靈敏度的免疫組化MaxVision法檢測ERG蛋白在中國PCa人群中發(fā)生的頻率和臨床病理特征。結(jié)果顯示，ERG蛋白在PCa組織中特異性表達(dá)，但在BPH標(biāo)本中卻未發(fā)現(xiàn)該蛋白，提示ERG可能是一種高度特異的PCa標(biāo)志物，與Tomlins等[2]的研究結(jié)果一致。目前病理穿刺活檢診斷PCa主要依據(jù)組織學(xué)形態(tài)。當(dāng)一些PCa與非癌的穿刺活檢標(biāo)本鑒別困難時(shí)，除了應(yīng)用基底細(xì)胞標(biāo)記抗體如CK5/6、p63等，還可聯(lián)合 ERG抗體進(jìn)行輔助鑒別診斷。

雖然ERG蛋白診斷PCa的特異性很高, 但靈敏度偏低，本實(shí)驗(yàn)中檢出率只有25%。戚美等[7]的研究也發(fā)現(xiàn)ERG融合在PCa人群中發(fā)生率僅為23%。許多研究[5,8，9]表明，約50%PCa患者癌組織過度表達(dá)ERG蛋白，TMPRSS2基因與ERG 基因融合的發(fā)生率為46%～56%。對比發(fā)現(xiàn)，TMPRSS2-ERG 基因融合在我國PCa患者中的發(fā)生頻率較西方國家低。Farrell等[10]的研究發(fā)現(xiàn)，與白種美國男性相比，非洲裔美國PCa患者中ERG 融合基因的檢測率顯著低下，白人中的檢出率約為黑人的3倍。最新研究表明，馬來西亞印度裔PCa患者中ERG蛋白檢出率與華裔患者相比，翻了一番[11]。雖然造成 ERG融合基因陽性率差異的機(jī)制還沒有闡明，但目前的研究揭示可能與種族和地域性的差異有關(guān)。

TMPRSS2和ERG 基因均位于21 號染色體長臂上，相距3 Mb 堿基單位，通過易位或基因間片段的缺失而發(fā)生融合[2]。目前對于ERG 基因融合的臨床意義尚有爭論。 H?ggl?f 等[12]研究表明，ERG的表達(dá)與高臨床分期、高Gleason評分及轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)有關(guān)。Qi等[13]使用多重變量分析發(fā)現(xiàn) ERG基因融合是一項(xiàng)獨(dú)立的預(yù)后因素，ERG融合狀態(tài)有助于識別那些預(yù)后不良的患者。與之相反，Winnes等[14]的研究顯示，ERG蛋白陽性PCa患者比陰性的患者Gleason 評分低且有更高的生存率。Steurer等[15]研究表明，ERG融合基因的活化與PCa患者的年齡輕和級別低密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究了PCa組織中ERG蛋白表達(dá)與相關(guān)臨床病理參數(shù)的關(guān)系，包括患者的年齡、術(shù)前PSA值、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及Gleason 評分(組織學(xué)分級)。結(jié)果顯示PCa組織中ERG蛋白表達(dá)與患者的年齡、術(shù)前PSA值及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)，Gleason 評分≤7分(低-中級別)組ERG蛋白表達(dá)率明顯高于Gleason 評分>7分(高級別)組，并且ERG蛋白表達(dá)與Gleason 評分呈負(fù)相關(guān)。提示ERG蛋白可能是一種高度特異的PCa標(biāo)志物，ERG蛋白的檢測可能為PCa患者的鑒別診斷及病理分級提供參考。

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Expression changes and significance of ERG protein in prostate cancer

JINGZhiliang1,CHENYonghua,CAOJun,ZHAOYinghai,LIUJianjun

(1TheAffiliatedHospitalofGuangdongMedicalCollege,Zhanjiang524001,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression changes and significance of ERG protein in the prostate cancer (PCa) tissues. MethodsThe prostate tissues from 144 patients with PCa and 100 patients with benign prostatic hyperplasia (BPH) were selected. The expression of ERG protein was detected by immunohistochemical MaxVision method, and their relationships with clinicopathological parameters were analyzed. ResultsThe positive expression rates of ERG protein in the PCa and BPH tissues were 25.0% and 0, respectively (P<0. 01). The ERG protein expression in the PCa tissues was not related with age of patient, preoperative PSA value and distant metastasis (all P>0. 05), and was negatively correlated with Gleason score (r=-0.175, P<0. 05). The ERG protein expression rate in the Gleason score≤7 group was significantly higher than that of the Gleason score >7 group (P<0. 05). ConclusionThe expression of ERG protein in the prostate cancer tissues of PCa patients is increased, and the ERG protein detection may provide a reference for the differential diagnosis and pathological grading.

Key words:prostatic neoplasms; ERG protein; prostatic hyperplasia; Gleason score

(收稿日期：2015-09-20)

中圖分類號：R737.25

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-266X(2016)01-0012-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.01.004

通信作者簡介：柳建軍(1961-)，男，教授，主任醫(yī)師，主要研究方向?yàn)槊谀蚣澳行陨诚到y(tǒng)腫瘤。E-mail:zj-liujj@163.com

作者簡介：第一景志亮(1981-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要研究方向?yàn)槟[瘤病理。E-mail:150079294@qq.com

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81272833)；廣東醫(yī)學(xué)院青年基金項(xiàng)目(XQ1326)。