甲胎蛋白異質(zhì)體和甲胎蛋白信使核糖核酸用于診斷肝細胞癌

邱大鵬　韓風　賀濤

【摘要】 目的：探討聯(lián)合檢測2種血清腫瘤標志物甲胎蛋白（AFP）異質(zhì)體（AFP-L3）和甲胎蛋白信使核糖核酸（AFPmRNA）診斷肝細胞癌價值及評估肝癌預(yù)后的意義。方法：對2005年4-7月收治的82例肝細胞癌（HCC）、11例慢性乙型肝炎肝硬化合并門脈高壓和19例肝臟良性腫瘤患者應(yīng)用酶聯(lián)吸附法及熒光定量PCR聯(lián)合檢測AFP-L3和AFPmRNA水平，對比其陽性率；并對術(shù)后1個月的肝癌患者檢測AFP-L3和AFPmRNA水平，統(tǒng)計作出生存曲線。結(jié)果：術(shù)前不同腫瘤指標的檢測結(jié)果：AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA檢測陽性率為64.3%，明顯高于AFP、AFP-mRNA單獨檢測的陽性率（50.9%、40.2%），差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；術(shù)前、術(shù)后AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA檢測均陽性的患者術(shù)后3年生存率較低。結(jié)論：術(shù)前聯(lián)合檢測APF-L3和AFPmRNA兩項指標可提高HCC、尤其是AFP陰性HCC的診斷率，而術(shù)后聯(lián)合檢測又對評估HCC的預(yù)后有一定的指導意義。

【關(guān)鍵詞】 原發(fā)性肝癌； 甲胎蛋白異質(zhì)體； 甲胎蛋白信使核糖核酸； 診斷； 預(yù)后

肝細胞癌（HCC）是臨床常見惡性腫瘤，疾病進展快，病情危重，侵襲性較強，預(yù)后較差，患者生活質(zhì)量受到明顯下降。近年來我國發(fā)病率明顯升高，肝細胞癌由多種方式因素引起，乙型肝炎病毒感染、肝硬變等均是導致疾病發(fā)生的重要原因。甲胎蛋白（AFP）作為診斷HCC的重要指標，在臨床廣泛使用，然而對肝癌的特異性及敏感性均較低，因此探討更為有效的診斷方法，研究更為敏感、特異的腫瘤標志物對于提高診斷率，提高患者生存率有著重要作用[1]。臨床研究顯示，多種腫瘤標志物聯(lián)合檢測效果明顯優(yōu)于單獨檢測，特異性及敏感性更高，筆者對2005年4-7月收治的82例HCC患者進行AFPmRNA聯(lián)合甲胎蛋白（AFP）異質(zhì)體（AFP-L3）檢測，對其與HCC的診斷及預(yù)后關(guān)系進行探討，具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2005年4-7月本院部分住院患者血清資料庫中的112份血清標本，其中男76例，女36例，年齡30～73歲；平均（45.62±6.2）歲；肝臟良性病變19例（其中2例炎性假瘤，3例血管平滑肌脂肪瘤，2例灶性結(jié)節(jié)性增生，12例血管瘤），肝硬化合并門脈高壓（LC）11例，HCC82例。患者均經(jīng)術(shù)后病理學診斷確診，為了排除其他因素對肝癌預(yù)后分析的影響，將HCC患者的入選標準定為：單發(fā)腫瘤<5 cm，或多發(fā)腫瘤直徑之和<5 cm，無癌栓，肝功能在Child B級以上。

1.2 試劑與儀器 采用武漢中美科技有限公司生產(chǎn)的USCNLIFE SCIENCE人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3（AFP-L3）酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，鄭州久是生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的探針及引物，BIO-RAD M680酶標儀，HH-42三用恒溫水箱，Himac CR 21G低溫高速離心機，Biometra TGRADIENT梯度PCR儀，MS1 Minishkaer IKA 渦旋混合器，LightCycler 1.5 ROCHE熒光定量PCR儀；寶生物工程（大連）有限公司生產(chǎn)的AFP酶連試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 檢測方法 分別在患者入院前、后1個月晨起空腹狀態(tài)下抽取靜脈血5 mL，迅速分離血清，血細胞備用，放置在-80 ℃環(huán)境內(nèi)備測，在測定前將標本取出，自然復融后對血清中AFP-L3、AFP水平進行檢測。采用人小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3（AFP-L3）酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒測定AFP、AFP-L3的含量，并計算AFP-L3占AFP總量的百分比，以AFP-L3大于15%作為AFP-L3異常升高標準。

1.3.2 熒光定量RT-PCR 用常規(guī)密度梯度離心法分離外周血有核細胞。總RNA提取試劑盒提取細胞總RNA，于紫外分光光度計上定量，用Primescript試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，取細胞總RNA，紫外分光光度計定量。引物及探針為上游引物：5'-GTAAACCCTGGTCTTGGCC-3'；下游引物：下游引物：5'-TCAGAGAATGCAGGAGGGAC-3'，擴增最終片段長282 bp；熒光探針：5'-TTCATATGCCAACAGGAGGCCATGC-3'。內(nèi)參為GADPH，上游引物：5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3'，下游引物：5'-CCACCACCCTGTTGCTGTAG-3'，產(chǎn)物為450 bp。第1輪PCR，反應(yīng)體系為50 μL。取cDNA 5.0 μL，10×PCR buffer 5.0 μL，25 mmol/L MgCl2 3.0 μL，10 mmol/L dNTP 1.0 μL，第1輪PCR上、下游外引物各7.5 pmol，Taq DNA聚合酶2.0 U，加滅菌水至50 μL。反應(yīng)參數(shù)：94 ℃ 5 min預(yù)變性；94 ℃ 45 s；55 ℃ 45 s；72 ℃ 45 s；30個循環(huán)；72 ℃ 5 min延伸。第2輪PCR取第1輪PCR產(chǎn)物作模板，加入7.5 pmol上下游內(nèi)引物，余反應(yīng)體系及反應(yīng)條件同前。同時進行內(nèi)參GAPDH擴增。最后繪制熒光定量PCR標準曲線，根據(jù)標準曲線計算樣品和內(nèi)參的Ct值，兩者相比即得相對量的表達。每次RT-PCR實驗均以分泌AFP的肝癌細胞系HepG2為陽性對照，陰性對照則以水取代cDNA。

1.4 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，計量資料以（x±s）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用 字2檢驗，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 術(shù)前不同腫瘤指標的檢測結(jié)果 AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA檢測陽性率為64.3%，明顯高于AFP、AFP-mRNA單獨檢測的陽性率（50.9%、40.2%），差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與AFP-L3單獨檢測陽性率相比，雖聯(lián)合檢測陽性率升高，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

表1 術(shù)前不同腫瘤指標的檢測結(jié)果 例（%）

指標 陽性 陰性

AFP（a） 57（50.9） 55（49.1）

AFP-L3（b） 67（59.8） 45（40.2）

AFPmRNA（c） 45（40.2） 67（59.8）

AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA（d） 72（64.3） 40（35.7）

字2值 d與a比較 8.173 6.321

d與b比較 1.371 1.578

d與c比較 45.746 32.744

P值 d與a比較 0.0040 0.0043

d與b比較 0.2308 0.2341

d與c比較 0.002 0.001

2.2 AFP-L3、AFPmRNA術(shù)后單獨檢測與聯(lián)合檢測陽性患者生存率 術(shù)前、術(shù)后聯(lián)合檢測AFP-L3和AFPmRNA均陽性的患者術(shù)后3年生存率較低。見圖1、圖2。

3 討論

AFP是臨床診斷肝細胞癌的腫瘤標志物已經(jīng)使用較長時間，然而其特異性及敏感性較低[2-3]，臨床診斷仍然存在較大的誤診漏診率，新的符合需要的標志物又尚未發(fā)現(xiàn)，為了提高對肝癌診斷，聯(lián)合檢測腫瘤標志物就成為新的思路。

1970年，有學者首次采用淀粉凝膠電泳方法將AFP異質(zhì)體由人體內(nèi)分離[4]，AFP-L3則是肝癌細胞特異合成，與學AFP的濃度并無直接明顯關(guān)系，隨著臨床研究的不斷深入發(fā)現(xiàn)，在HCC的臨床診斷、判定治療效果及預(yù)測復發(fā)方面均有顯著效果，且相較AFP具有更高的敏感性。

AFP-L3作為AFP的異質(zhì)體提高了肝癌診斷的特異性和敏感性，但它不能直接證實肝癌發(fā)生轉(zhuǎn)移。1994年Matsumua等[2]首先運用巢式RT-PCR法檢測出AFP mRNA存在于肝外轉(zhuǎn)移的HCC患者外周血中，AFPmRNA是否能作為HCC復發(fā)轉(zhuǎn)移標志物的研究成為熱點。正常人體的訓循環(huán)細胞中未出現(xiàn)AFPmRNA表達，而脫落進入血循環(huán)的正常肝細胞則失去了對AFPmRNA的表達能力，當腫瘤細胞破碎后，需將中大量的RNA酶會將mRNA迅速講解，本次研究中，筆者檢測出的AFPmRNA即是從癌變病灶脫落入血的完整肝癌細胞，因此可作為肝癌細胞血液播散標志，提示即使臨床上未見有轉(zhuǎn)移灶，但外周血中已存在循環(huán)的癌細胞，繼而易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移[5-6]。雖然有一部分學者的研究并不支持這種觀點[7-8]，但從理論上看及大部分的研究認為，AFPmRNA作為肝癌細胞血液播散標志物是可行的。

通過手術(shù)治療能夠有效抑制肝癌病情，促進患者康復，術(shù)前患者血循環(huán)內(nèi)可能已經(jīng)存在少量的癌細胞，當機體免疫功能受到破壞時，血內(nèi)癌細胞繁殖并擴散，導致肝癌術(shù)后存在較高的復發(fā)率，因此在臨床檢測中，通過觀察血液循環(huán)中是否出現(xiàn)癌細胞，動態(tài)觀察癌細胞變化，能夠有效的指導臨床治療及對預(yù)后狀況進行判斷評估[9-11]。

本次研究結(jié)果顯示，AFPmRNA聯(lián)合AFP-L3檢測陽性率為64.3%，相較AFP（59.8%）、AFP-mRNA（40.2%）單獨檢測陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與AFP-L3單獨檢測陽性率相較，雖聯(lián)合檢測陽性率明顯升高，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），可能是筆者試驗收納的樣本量過小所致，需以后作大批量試驗進一步研究。術(shù)后聯(lián)合檢測AFP-L3和AFPmRNA的水平與肝癌預(yù)后有關(guān)，兩者皆為陽性的病例復發(fā)率較高；3年生存率下降，兩者皆陽性者的生存率（32.7%）與單獨陽性者得生存率（49.2%）比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示AFPmRNA，AFP-L3對診斷肝細胞癌的殘留復發(fā)更加敏感。由于外周血AFPmRNA水平與血AFP濃度之間并無明確直接關(guān)聯(lián)，因此在HCC的診斷中具有較高的靈敏性及特異性，陽性檢出率較高，兩者之間可進行互補，同時可對AFP濃度無法準確反映HCC是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的缺陷進行彌補，從而為預(yù)后做出評估，還可早期診斷HCC，尤其對AFP陰性肝癌的診斷具有重要的臨床應(yīng)用價值。

本研究表明，AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA檢測能夠及時準確診斷HCC，同時可對治療效果判斷及復發(fā)進行預(yù)測，能夠為臨床治療方案的制定進行科學指導，具有顯著臨床意義。

參考文獻

[1] Yoshida S，Kurokohchi K，Arima K，et al.Clinical significance of Lens culinaris agglutinin-reactive fraction of serum alpha-fetoprotein in patients with hepatocellular carcinoma[J].Int J Oncol，2002，20（2）：305-309.

[2] Matsumura M，Niwa Y，Kato N，et al.Detection of a-fetoprotein mRNA .an indicator of hematogenous spreading hepatocellular carcinoma， in the circulation： a possible predictor of metastatic hepatocellular carcinoma[J].Hepatology，1994，20（11）：1418-1425.

[3] Hillaire S，Barbs V，Boucher E，et al.Albumin messenger RNA as a marker of circulating hepatocytes in hepatocellular carcinoma[J].Gastroenterol，1994，106（1）：239.

[4] Lemoine A，LeBricon T，Salvucci M，et al.Prospective evaluation of circulating hepatocytes by alpha-fetoprotein mRNA in humans during liver surgery[J].Ann Surg，1997，226（15）：43-50.

[5]趙鴻，陳孝平，趙西平，等.AFP-mRNA作為血中肝癌細胞的標志缺乏特異性[J].中華肝膽外科雜志，2002，8（11）：683-686.

[6] Cillo U，Navaglia F，Vitale A，et al.Clinical significance of alpha-fetoprotein mRNA in blood of patients with hepatocellular carcinoma[J].Clin Chim Acta，2004 ，347（1-2）：129-138.

[7]趙冬梅，韓福剛.肝細胞癌TACE術(shù)后療效的影像學評價[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2011，20（15）：321-322.

[8]于麗波.肝局灶性結(jié)節(jié)性增生與肝細胞癌MRI特征對比分析[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2013，31（14）：18-20.

[9]張慶輝，劉鵬程.C-arm CT在肝腫瘤TACE治療中的應(yīng)用[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2012，15（19）：119-121.

[10]吳鋒，李元.64排螺旋CT三維血管成像在肝細胞癌診治中的應(yīng)用[J].中外醫(yī)學研究，2012，21（23）：201-202.

[11]苑進凱，祝葆華，魏娟，等.TIMP-3基因在肝細胞肝癌中的表達及其意義[J].中外醫(yī)學研究，2012，31（3）：249-250.

（收稿日期：2013-08-07） （本文編輯：蔡元元）

表1 術(shù)前不同腫瘤指標的檢測結(jié)果 例（%）

指標 陽性 陰性

AFP（a） 57（50.9） 55（49.1）

AFP-L3（b） 67（59.8） 45（40.2）

AFPmRNA（c） 45（40.2） 67（59.8）

AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA（d） 72（64.3） 40（35.7）

字2值 d與a比較 8.173 6.321

d與b比較 1.371 1.578

d與c比較 45.746 32.744

P值 d與a比較 0.0040 0.0043

d與b比較 0.2308 0.2341

d與c比較 0.002 0.001

2.2 AFP-L3、AFPmRNA術(shù)后單獨檢測與聯(lián)合檢測陽性患者生存率 術(shù)前、術(shù)后聯(lián)合檢測AFP-L3和AFPmRNA均陽性的患者術(shù)后3年生存率較低。見圖1、圖2。

3 討論

AFP是臨床診斷肝細胞癌的腫瘤標志物已經(jīng)使用較長時間，然而其特異性及敏感性較低[2-3]，臨床診斷仍然存在較大的誤診漏診率，新的符合需要的標志物又尚未發(fā)現(xiàn)，為了提高對肝癌診斷，聯(lián)合檢測腫瘤標志物就成為新的思路。

1970年，有學者首次采用淀粉凝膠電泳方法將AFP異質(zhì)體由人體內(nèi)分離[4]，AFP-L3則是肝癌細胞特異合成，與學AFP的濃度并無直接明顯關(guān)系，隨著臨床研究的不斷深入發(fā)現(xiàn)，在HCC的臨床診斷、判定治療效果及預(yù)測復發(fā)方面均有顯著效果，且相較AFP具有更高的敏感性。

AFP-L3作為AFP的異質(zhì)體提高了肝癌診斷的特異性和敏感性，但它不能直接證實肝癌發(fā)生轉(zhuǎn)移。1994年Matsumua等[2]首先運用巢式RT-PCR法檢測出AFP mRNA存在于肝外轉(zhuǎn)移的HCC患者外周血中，AFPmRNA是否能作為HCC復發(fā)轉(zhuǎn)移標志物的研究成為熱點。正常人體的訓循環(huán)細胞中未出現(xiàn)AFPmRNA表達，而脫落進入血循環(huán)的正常肝細胞則失去了對AFPmRNA的表達能力，當腫瘤細胞破碎后，需將中大量的RNA酶會將mRNA迅速講解，本次研究中，筆者檢測出的AFPmRNA即是從癌變病灶脫落入血的完整肝癌細胞，因此可作為肝癌細胞血液播散標志，提示即使臨床上未見有轉(zhuǎn)移灶，但外周血中已存在循環(huán)的癌細胞，繼而易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移[5-6]。雖然有一部分學者的研究并不支持這種觀點[7-8]，但從理論上看及大部分的研究認為，AFPmRNA作為肝癌細胞血液播散標志物是可行的。

通過手術(shù)治療能夠有效抑制肝癌病情，促進患者康復，術(shù)前患者血循環(huán)內(nèi)可能已經(jīng)存在少量的癌細胞，當機體免疫功能受到破壞時，血內(nèi)癌細胞繁殖并擴散，導致肝癌術(shù)后存在較高的復發(fā)率，因此在臨床檢測中，通過觀察血液循環(huán)中是否出現(xiàn)癌細胞，動態(tài)觀察癌細胞變化，能夠有效的指導臨床治療及對預(yù)后狀況進行判斷評估[9-11]。

本次研究結(jié)果顯示，AFPmRNA聯(lián)合AFP-L3檢測陽性率為64.3%，相較AFP（59.8%）、AFP-mRNA（40.2%）單獨檢測陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與AFP-L3單獨檢測陽性率相較，雖聯(lián)合檢測陽性率明顯升高，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），可能是筆者試驗收納的樣本量過小所致，需以后作大批量試驗進一步研究。術(shù)后聯(lián)合檢測AFP-L3和AFPmRNA的水平與肝癌預(yù)后有關(guān)，兩者皆為陽性的病例復發(fā)率較高；3年生存率下降，兩者皆陽性者的生存率（32.7%）與單獨陽性者得生存率（49.2%）比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示AFPmRNA，AFP-L3對診斷肝細胞癌的殘留復發(fā)更加敏感。由于外周血AFPmRNA水平與血AFP濃度之間并無明確直接關(guān)聯(lián)，因此在HCC的診斷中具有較高的靈敏性及特異性，陽性檢出率較高，兩者之間可進行互補，同時可對AFP濃度無法準確反映HCC是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的缺陷進行彌補，從而為預(yù)后做出評估，還可早期診斷HCC，尤其對AFP陰性肝癌的診斷具有重要的臨床應(yīng)用價值。

本研究表明，AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA檢測能夠及時準確診斷HCC，同時可對治療效果判斷及復發(fā)進行預(yù)測，能夠為臨床治療方案的制定進行科學指導，具有顯著臨床意義。

參考文獻

[1] Yoshida S，Kurokohchi K，Arima K，et al.Clinical significance of Lens culinaris agglutinin-reactive fraction of serum alpha-fetoprotein in patients with hepatocellular carcinoma[J].Int J Oncol，2002，20（2）：305-309.

[2] Matsumura M，Niwa Y，Kato N，et al.Detection of a-fetoprotein mRNA .an indicator of hematogenous spreading hepatocellular carcinoma， in the circulation： a possible predictor of metastatic hepatocellular carcinoma[J].Hepatology，1994，20（11）：1418-1425.

[3] Hillaire S，Barbs V，Boucher E，et al.Albumin messenger RNA as a marker of circulating hepatocytes in hepatocellular carcinoma[J].Gastroenterol，1994，106（1）：239.

[4] Lemoine A，LeBricon T，Salvucci M，et al.Prospective evaluation of circulating hepatocytes by alpha-fetoprotein mRNA in humans during liver surgery[J].Ann Surg，1997，226（15）：43-50.

[5]趙鴻，陳孝平，趙西平，等.AFP-mRNA作為血中肝癌細胞的標志缺乏特異性[J].中華肝膽外科雜志，2002，8（11）：683-686.

[6] Cillo U，Navaglia F，Vitale A，et al.Clinical significance of alpha-fetoprotein mRNA in blood of patients with hepatocellular carcinoma[J].Clin Chim Acta，2004 ，347（1-2）：129-138.

[7]趙冬梅，韓福剛.肝細胞癌TACE術(shù)后療效的影像學評價[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2011，20（15）：321-322.

[8]于麗波.肝局灶性結(jié)節(jié)性增生與肝細胞癌MRI特征對比分析[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2013，31（14）：18-20.

[9]張慶輝，劉鵬程.C-arm CT在肝腫瘤TACE治療中的應(yīng)用[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2012，15（19）：119-121.

[10]吳鋒，李元.64排螺旋CT三維血管成像在肝細胞癌診治中的應(yīng)用[J].中外醫(yī)學研究，2012，21（23）：201-202.

[11]苑進凱，祝葆華，魏娟，等.TIMP-3基因在肝細胞肝癌中的表達及其意義[J].中外醫(yī)學研究，2012，31（3）：249-250.

（收稿日期：2013-08-07） （本文編輯：蔡元元）

表1 術(shù)前不同腫瘤指標的檢測結(jié)果 例（%）

指標 陽性 陰性

AFP（a） 57（50.9） 55（49.1）

AFP-L3（b） 67（59.8） 45（40.2）

AFPmRNA（c） 45（40.2） 67（59.8）

AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA（d） 72（64.3） 40（35.7）

字2值 d與a比較 8.173 6.321

d與b比較 1.371 1.578

d與c比較 45.746 32.744

P值 d與a比較 0.0040 0.0043

d與b比較 0.2308 0.2341

d與c比較 0.002 0.001

2.2 AFP-L3、AFPmRNA術(shù)后單獨檢測與聯(lián)合檢測陽性患者生存率 術(shù)前、術(shù)后聯(lián)合檢測AFP-L3和AFPmRNA均陽性的患者術(shù)后3年生存率較低。見圖1、圖2。

3 討論

AFP是臨床診斷肝細胞癌的腫瘤標志物已經(jīng)使用較長時間，然而其特異性及敏感性較低[2-3]，臨床診斷仍然存在較大的誤診漏診率，新的符合需要的標志物又尚未發(fā)現(xiàn)，為了提高對肝癌診斷，聯(lián)合檢測腫瘤標志物就成為新的思路。

1970年，有學者首次采用淀粉凝膠電泳方法將AFP異質(zhì)體由人體內(nèi)分離[4]，AFP-L3則是肝癌細胞特異合成，與學AFP的濃度并無直接明顯關(guān)系，隨著臨床研究的不斷深入發(fā)現(xiàn)，在HCC的臨床診斷、判定治療效果及預(yù)測復發(fā)方面均有顯著效果，且相較AFP具有更高的敏感性。

AFP-L3作為AFP的異質(zhì)體提高了肝癌診斷的特異性和敏感性，但它不能直接證實肝癌發(fā)生轉(zhuǎn)移。1994年Matsumua等[2]首先運用巢式RT-PCR法檢測出AFP mRNA存在于肝外轉(zhuǎn)移的HCC患者外周血中，AFPmRNA是否能作為HCC復發(fā)轉(zhuǎn)移標志物的研究成為熱點。正常人體的訓循環(huán)細胞中未出現(xiàn)AFPmRNA表達，而脫落進入血循環(huán)的正常肝細胞則失去了對AFPmRNA的表達能力，當腫瘤細胞破碎后，需將中大量的RNA酶會將mRNA迅速講解，本次研究中，筆者檢測出的AFPmRNA即是從癌變病灶脫落入血的完整肝癌細胞，因此可作為肝癌細胞血液播散標志，提示即使臨床上未見有轉(zhuǎn)移灶，但外周血中已存在循環(huán)的癌細胞，繼而易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移[5-6]。雖然有一部分學者的研究并不支持這種觀點[7-8]，但從理論上看及大部分的研究認為，AFPmRNA作為肝癌細胞血液播散標志物是可行的。

通過手術(shù)治療能夠有效抑制肝癌病情，促進患者康復，術(shù)前患者血循環(huán)內(nèi)可能已經(jīng)存在少量的癌細胞，當機體免疫功能受到破壞時，血內(nèi)癌細胞繁殖并擴散，導致肝癌術(shù)后存在較高的復發(fā)率，因此在臨床檢測中，通過觀察血液循環(huán)中是否出現(xiàn)癌細胞，動態(tài)觀察癌細胞變化，能夠有效的指導臨床治療及對預(yù)后狀況進行判斷評估[9-11]。

本次研究結(jié)果顯示，AFPmRNA聯(lián)合AFP-L3檢測陽性率為64.3%，相較AFP（59.8%）、AFP-mRNA（40.2%）單獨檢測陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與AFP-L3單獨檢測陽性率相較，雖聯(lián)合檢測陽性率明顯升高，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），可能是筆者試驗收納的樣本量過小所致，需以后作大批量試驗進一步研究。術(shù)后聯(lián)合檢測AFP-L3和AFPmRNA的水平與肝癌預(yù)后有關(guān)，兩者皆為陽性的病例復發(fā)率較高；3年生存率下降，兩者皆陽性者的生存率（32.7%）與單獨陽性者得生存率（49.2%）比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示AFPmRNA，AFP-L3對診斷肝細胞癌的殘留復發(fā)更加敏感。由于外周血AFPmRNA水平與血AFP濃度之間并無明確直接關(guān)聯(lián)，因此在HCC的診斷中具有較高的靈敏性及特異性，陽性檢出率較高，兩者之間可進行互補，同時可對AFP濃度無法準確反映HCC是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的缺陷進行彌補，從而為預(yù)后做出評估，還可早期診斷HCC，尤其對AFP陰性肝癌的診斷具有重要的臨床應(yīng)用價值。

本研究表明，AFP-L3聯(lián)合AFPmRNA檢測能夠及時準確診斷HCC，同時可對治療效果判斷及復發(fā)進行預(yù)測，能夠為臨床治療方案的制定進行科學指導，具有顯著臨床意義。

參考文獻

[1] Yoshida S，Kurokohchi K，Arima K，et al.Clinical significance of Lens culinaris agglutinin-reactive fraction of serum alpha-fetoprotein in patients with hepatocellular carcinoma[J].Int J Oncol，2002，20（2）：305-309.

[2] Matsumura M，Niwa Y，Kato N，et al.Detection of a-fetoprotein mRNA .an indicator of hematogenous spreading hepatocellular carcinoma， in the circulation： a possible predictor of metastatic hepatocellular carcinoma[J].Hepatology，1994，20（11）：1418-1425.

[3] Hillaire S，Barbs V，Boucher E，et al.Albumin messenger RNA as a marker of circulating hepatocytes in hepatocellular carcinoma[J].Gastroenterol，1994，106（1）：239.

[4] Lemoine A，LeBricon T，Salvucci M，et al.Prospective evaluation of circulating hepatocytes by alpha-fetoprotein mRNA in humans during liver surgery[J].Ann Surg，1997，226（15）：43-50.

[5]趙鴻，陳孝平，趙西平，等.AFP-mRNA作為血中肝癌細胞的標志缺乏特異性[J].中華肝膽外科雜志，2002，8（11）：683-686.

[6] Cillo U，Navaglia F，Vitale A，et al.Clinical significance of alpha-fetoprotein mRNA in blood of patients with hepatocellular carcinoma[J].Clin Chim Acta，2004 ，347（1-2）：129-138.

[7]趙冬梅，韓福剛.肝細胞癌TACE術(shù)后療效的影像學評價[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2011，20（15）：321-322.

[8]于麗波.肝局灶性結(jié)節(jié)性增生與肝細胞癌MRI特征對比分析[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2013，31（14）：18-20.

[9]張慶輝，劉鵬程.C-arm CT在肝腫瘤TACE治療中的應(yīng)用[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2012，15（19）：119-121.

[10]吳鋒，李元.64排螺旋CT三維血管成像在肝細胞癌診治中的應(yīng)用[J].中外醫(yī)學研究，2012，21（23）：201-202.

[11]苑進凱，祝葆華，魏娟，等.TIMP-3基因在肝細胞肝癌中的表達及其意義[J].中外醫(yī)學研究，2012，31（3）：249-250.

（收稿日期：2013-08-07） （本文編輯：蔡元元）