二氧化鈦馬來酸氯苯那敏乳膏劑的制備和抗過敏作用初探

初　陽,李　蕾,丁一航，姜明燕*

1.中國醫科大學附屬第一醫院藥學部,沈陽 1100-01;2.中國醫科大學藥學院,沈陽 110001;3.沈陽藥科大學藥學院,沈陽 110016;4.大連醫科大學藥學院,大連 116044

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二氧化鈦馬來酸氯苯那敏乳膏劑的制備和抗過敏作用初探

初陽1,2,李蕾3,丁一航4，姜明燕1,2*

1.中國醫科大學附屬第一醫院藥學部,沈陽 1100-01;2.中國醫科大學藥學院,沈陽 110001;3.沈陽藥科大學藥學院,沈陽 110016;4.大連醫科大學藥學院,大連 116044

[摘要]目的優選二氧化鈦馬來酸氯苯那敏乳膏劑的最優處方，并初步考察其抗過敏作用。方法以乳膏劑色澤光澤度考察、穩定性考察及顯微鏡法觀察作為考察指標，采用單因素考察和正交試驗優選最優處方。并將該制劑涂抹于被紫外線照射的小鼠皮膚上。結果制備40 g乳膏中二氧化鈦的投藥量為3 g、撲爾敏的投藥量為0.2 g、乳化時間為30 min、乳化溫度為70 ℃時，乳膏效果較好。小鼠背部皮膚HE染色觀察顯示其有明顯的抗過敏作用。結論二氧化鈦馬來酸氯苯那敏乳膏可有效抗紫外線過敏。

[關鍵詞]馬來酸氯苯那敏；二氧化鈦；正交試驗；乳膏；HE染色

0引言

目前，全球臭氧層以每年3.5%遞減，使地面紫外線水平大幅度增加，導致過敏反應甚至各種皮膚疾病，如：紅斑狼瘡、白癜風、毛細血管擴張癥的發生[1-3]。紫外線過敏影響患者的生活質量，臨床治療一般采用口服馬來酸氯苯那敏片，并外涂防曬劑(嚴重時加涂激素類藥膏)。本實驗擬將馬來酸氯苯那敏和二氧化鈦組成復方制劑，通過優化處方，工藝研制可隔離紫外線且抗過敏的馬來酸氯苯那敏乳膏，發揮治療與防止復發的雙重功效。

1材料

1.1儀器恒溫加熱磁力攪拌器(DF-101S，鞏義市予華儀器有限責任公司)；分析天平[Mettler AE200，梅特勒-托利多國際貿易(上海)有限公司]；高速臺式離心機(TGL-16B，上海安亭)；恒溫水浴鍋(BCFCO，余姚電訊儀表實業公司)；生物顯微鏡(XSP-10C，上海光學儀器廠)。

1.2試劑馬來酸氯苯那敏(河南九勢制藥有限公司，批號：131214)；二氧化鈦(上海晶純生化科技股份有限公司，批號：T104937)；液體石蠟(南昌白云醫藥化工有限公司，批號：20140201)；蓖麻油(湖北科田藥業有限公司，批號：Z42020991)；硬脂酸(湖南爾康制藥有限公司，批號：1018201209)；甘油(沈陽紅旗制藥有限公司，批號：140421)；三乙醇胺(江西阿爾法高科技有限公司，批號：20131102)；羥苯甲酯(西安惠安纖維素化工有限公司，批號：20130301)；羥苯乙酯(湖南爾康制藥有限公司，批號：1036201304)。

1.3動物昆明種小鼠，雄性，健康適齡，體重18~22 g，購自遼寧長生生物科技有限公司，合格證號：SCXK(遼)2010-0001。

2方法

2.1馬來酸氯苯那敏乳膏基礎處方工藝分別稱取油相(硬脂酸4.96 g、蓖麻油5.24 mL、液體石蠟5.62 mL)、水相(馬來酸氯苯那敏0.2 g、三乙醇胺0.38 mL、甘油1.96 mL、羥苯甲酯0.04 g、羥苯乙酯0.04 g、水適量)，使油相、水相達70 ℃，充分攪拌使其融化，再將水相緩緩加入油相中進行乳化，乳化時保持一定溫度并不斷攪拌成乳膏狀。

2.2考察指標

2.2.1色澤、光澤度考察[4]挑取乳膏1 g，在下襯白紙的玻璃板上用軟膏刀鋪開，目測觀察。

2.2.2穩定性考察采用耐熱試驗、耐寒試驗、離心試驗作為考察指標。耐熱試驗[4]：將乳膏置于具塞試管中(約1/3高度)，放置40 ℃恒溫箱中6 h，觀察有無油水分離、變色等異常現象。耐寒試驗[4]：將乳膏置于具塞試管中(約1/3高度)，放置-15 ℃冰箱中24 h，觀察有無油水分離、膏體變粗、出水等異常現象。離心試驗[5]：將乳劑置10 cm離心管中，以3 750 r/min速度離心5 h，相當于放置1年的自然分層效果，此法可用于對乳劑的穩定性考察。

2.2.3顯微鏡法測定[5]用10×10倍數的光學顯微鏡觀察粒子狀態，考察乳劑是否均勻。

2.3單因素考察

2.3.1二氧化鈦加入方式的考察所用藥品量為基礎處方量，二氧化鈦加入方式分別為水相、油相兩相，外觀觀察結果見表1。由表1可見，二氧化鈦的加入方式對乳膏外觀影響顯著，且前3種加入方式得到的樣品外觀均較差，二氧化鈦用適量甘油潤濕，置乳缽中用冷卻基質與之研勻，得到的乳膏膏體均勻，易于涂布且無顆粒感。

表1　二氧化鈦加入方式的考察

2.3.2攪拌速度的考察所用藥品量為基礎處方量，攪拌速度分別定為500 r/min、1 000 r/min和變速(乳化時以1 000 r/min速度攪拌，待停止乳化時調為500 r/min)，外觀觀察結果見表2。由表2看出，攪拌速度對膏體的外觀產生顯著影響。

2.3.3乳化溫度的考察所用藥品量為基礎處方量，攪拌速度定為變速，乳化溫度分別定為60、70、80、90 ℃，外觀觀察結果見表3。由表3看出，乳化溫度對膏體的外觀產生較大影響。

表2　攪拌速度的考察

表3　乳化溫度的考察

2.3.4二氧化鈦加入量的考察攪拌速度定為變速，乳化溫度定為70 ℃，據復方鈦白防曬乳膏的制備研究表明，二氧化鈦含量為5%的復方鈦白防曬乳膏取得了很好的療效，在預實驗中發現當二氧化鈦量達到15%時，乳膏發黃顆粒感明顯，且放置后極易出現油水分離，所以將乳膏基礎處方中二氧化鈦量定于2、3、4、6 g，其他藥品量為基礎處方中藥品量[6]，外觀考察結果見表4。由表4看出，二氧化鈦加入量的不同對乳膏的外觀有較大影響。

表4　二氧化鈦加入量的考察

2.3.5馬來酸氯苯那敏加入量的考察攪拌速度定位變速，乳化溫度為70 ℃，據復方馬來酸氯苯那敏乳膏的研制及臨床應用表明[7-8]，將馬來酸氯苯那敏的量定至0.5%~0.8%，即基礎處方中氯苯那敏量定于0.20、0.24、0.28、0.32 g，其他藥品量為基礎處方中藥品量，外觀考察結果見表5。由表5看出，氯苯那敏加入量的不同對乳膏的外觀有比較大的影響。

2.3.6乳化時間的考察攪拌速度定為變速，乳化溫度為70 ℃，藥品量為基礎處方中藥品量，乳化時間分別定為10、20、30 min,外觀考察結果見表6。由表6看出，乳化時間對膏體外觀產生一定影響。

表5　氯苯那敏加入量的考察

表6　乳化時間的考察

2.4正交試驗通過上述實驗結果分析，攪拌速度對乳膏的外觀產生顯著影響，將攪拌速度定為變速，在正交試驗中不再考察。主藥的加入量、乳化時間和乳化溫度對乳膏外觀產生較大影響，所以將主藥加入量、乳化時間和乳化溫度作為正交試驗的4個因素，選用L9(34)正交表進行試驗，見表7、表8。

表7　正交試驗因素水平表

表8　L9(34)正交試驗

評分標準：①均勻程度、光澤度評價，分值由0.5分開始，按每隔0.1分升序打分。②離心實驗評價，15 min為離心界限，設定15 min及以下分層均為0.5分；15 min以上分層，每增加5 min加0.5分。③耐熱與耐寒評價，若不分層，則加1分。④顯微鏡法觀察評價，10×10的倍數下，視野范圍內粒子均勻度小者為1，粒子不均勻粒度較大者為0.5。

通過正交試驗直觀分析結果顯示，影響外觀和穩定性的主次因素順序為C>A>D>B，根據正交試驗結果，選擇有較好的穩定性和外觀的處方配比和工藝條件是A2B3C2D1。

2.5藥效學研究

2.5.1實驗分組與給藥昆明組小鼠隨機分為4組：A組(空白對照組)，B組(UVB照射組)，C組(UVB照射+二氧化鈦乳膏組)，D組(UVB照射+二氧化鈦馬來酸氯苯那敏乳膏組)。C組、D組于致敏即日起開始給藥，1次/d，A組和B組涂抹等重量的空白乳膏。

2.5.2試驗方法剔除小鼠背部絨毛，進行UVB照射致敏，觀察小鼠背部皮膚變化，直至出現皮膚損傷。實驗結束后處死小鼠。

2.5.3試驗結果取小鼠背部照射區部分皮膚組織(0.8 cm×0.8 cm)，制片后進行HE染色，在顯微鏡下觀察小鼠皮膚組織形態學的改變及真皮內膠原纖維的變化。見圖1。

從圖1可見，空白對照組背部皮膚組織表皮為鱗狀上皮細胞，真皮層膠原纖維分布均勻，真皮及皮下組織未見病變；紫外線照射后，小鼠背部表皮厚度不一，乳頭層變平，部分脫落，表皮細胞排列紊亂，深染。真皮層膠原纖維染色變淡，排列紊亂、稀疏，部分扭曲、斷裂；涂抹二氧化鈦乳膏后，真皮內膠原纖維淡染，排列紊亂，扭曲、局部斷裂，有大量嗜酸性粒細胞浸潤，皮脂腺不規則增生；涂抹二氧化鈦馬來酸氯苯那敏乳膏后，膠原纖維排列稍顯紊亂，但無嗜酸性粒細胞浸潤，皮脂腺輕度增生。

3討論

通過正交試驗，該處方的最優配方及工藝為硬脂酸4.96 g、蓖麻油5.24 mL、液體石蠟5.62 mL，水相中馬來酸氯苯那敏0.2 g、三乙醇胺0.38 mL、甘油1.96 mL、羥苯甲酯0.04 g、羥苯乙酯0.04 g、水適量，使油相、水相達70 ℃，充分攪拌使其融化，再將水相緩緩加入油相中進行乳化，乳化時間為30 min，保持乳化溫度為70 ℃，乳化時以1 000 r/min的速度攪拌，待停止乳化時調為500 r/min，直至冷凝得膏體。稱取二氧化鈦3 g，用適量甘油潤濕，將少量基質和二氧化鈦在研缽中混勻，逐漸添加至全量，即得。經優化處方制備的二氧化鈦馬來酸氯苯那敏乳膏對于小鼠可起到有效的抗紫外線過敏作用。

圖1　小鼠皮膚組織HE染色結果

二氧化鈦為親水性藥物，在水中溶解度較低，如果將二氧化鈦直接加入到基質中，由于顆粒間粘附性較強，易聚集成比較大的顆粒，所制得的乳膏的顆粒感較強，影響了乳膏的外觀和治療效果。因此將其粉末加甘油研磨，阻止微粒間的聚集，產生的分散度較大，得到的膏體不僅美觀細膩，而且在皮膚上易于涂布，沒有顆粒感[9]。

可屏蔽紫外線的馬來酸氯苯那敏乳膏的優勢在于：①馬來酸氯苯那敏制成乳膏劑，較溶液劑在皮膚上作用時間更長，達到長效作用；②抗敏同時遮光，防止治療過程中紫外線對皮膚的二次傷害；③降低化學防曬劑引起的接觸性皮炎。后續試驗中將進一步比較不同組間皮膚中超氧岐化酶(SOD)、過氧化丙二醛(MDA)的活性和含量。

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Preparation of titanium dioxide chlorphenamine cream and the preliminary study on the anti-allergic effectsCHU Yang1,2,LI Lei3,DING Yi-hang4,JIANG Ming-yan1,2*(1.Department of Pharmacy,The First Hospital of China Medical University,Shenyang 110001,China;2.School of Pharmacy,China Medical University,Shenyang 110001,China;3. College of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110016,China;4. School of Pharmacy,Dalian Medical University,Dalian 116044,China)

[Abstract]ObjectiveTo optimize the prescription of titanium dioxide chlorphenamine maleate cream,and to investigate its anti-allergic effect.MethodsThe single factor and orthogonal test was used to optimize the prescription with the cream color and gloss investigation,inspection and microscopy observation of stability as the marker.The anti-allergic effect on mice’s back skin was observed by HE staining.ResultsThe effect of the preparation was good when the dosage of titanium dioxide cream and chlorpheniramine was 3 g and 0.2 g respectively,along with the emulsification time was 30 min and emulsifying temperature was 70 ℃.ConclusionTitanium dioxide chlorphenamine cream can effectively resist ultraviolet allergy.

Key words：Chlorphenamine maleate；Titanium dioxide；Orthogonal test；Cream;Hematoxylin and eosin staining

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201601018

*通信作者

收稿日期：2015-05-27