抗癲癇藥物濃度分析方法的研究進(jìn)展*

江　波，楊　潔

(遵義醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州　遵義　563003)

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抗癲癇藥物濃度分析方法的研究進(jìn)展*

江波，楊潔

(遵義醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州遵義563003)

多數(shù)抗癲癇藥物都具有治療窗窄、毒性較強(qiáng)，不同患者服藥后的個(gè)體差異大等特點(diǎn)。本文綜述了近幾年常用抗癲癇藥物的血藥濃度分析方法，主要有色譜、光譜、免疫分析等，不同分析方法在操作簡便、選擇性、靈敏度、準(zhǔn)確度、檢測(cè)成本等方面各有其優(yōu)缺點(diǎn)。臨床治療中應(yīng)根據(jù)醫(yī)院自身的條件、患者的具體情況等綜合考慮，選用適宜的分析方法，明確患者的量效關(guān)系，制定最佳的個(gè)體化給藥方案，確保患者用藥安全、有效、經(jīng)濟(jì)。

抗癲癇藥物；分析方法；研究進(jìn)展

癲癇是一種慢性神經(jīng)系統(tǒng)類疾病，主要是大腦神經(jīng)元異常放電引起的短暫性中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)，具有突發(fā)性和反復(fù)發(fā)作等特點(diǎn)，目前國內(nèi)有近千萬癲癇患者，其中大部分的患者得不到科學(xué)、規(guī)范、有效的診治[1]。臨床上治療癲癇的常用藥物有丙戊酸鈉、卡馬西平、苯妥英鈉，以及近幾年開發(fā)的左乙拉西坦、奧卡西平、拉莫三嗪、托吡酯等新藥，它們的治療效果好，但需長期服藥。有些藥物的毒性強(qiáng)、治療窗窄，如苯巴比妥、卡馬西平、丙戊酸鈉、苯妥英的有效血藥濃度分別為15～40 mg/L、4.0～10 mg/L、50～100 mg/L、10～20 mg/L[2]。因患者個(gè)體差異很大，即便是經(jīng)同一途徑使用相同劑量藥物，也會(huì)出現(xiàn)各不相同的治療反應(yīng)。為了確保患者用藥的安全、有效、經(jīng)濟(jì)，臨床治療中需要開展及時(shí)、準(zhǔn)確的治療藥物監(jiān)測(cè)(therapeutic drug monitoring，TDM)，為制定最佳的個(gè)體化給藥方案提供依據(jù)[3]，指導(dǎo)臨床合理用藥。目前，抗癲癇藥物血藥濃度主要采用色譜分析、光譜分析、免疫分析、電化學(xué)分析等方法。

1　色譜法

1.1液相色譜法

高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)是現(xiàn)代藥物分析中常用的一種分析技術(shù)，具有選擇性、重現(xiàn)性好，靈敏度高，可同時(shí)測(cè)定多種藥物，以及藥物代謝產(chǎn)物，特別適合新藥藥動(dòng)學(xué)的研究。Yoshiaki Yamamoto等[4]已用于新型抗癲癇藥物拉莫三嗪的研究。HPLC法分析時(shí)間較長，試劑消耗多，操作繁瑣，對(duì)操作者的技術(shù)要求較高，在臨床應(yīng)用中的生物樣品成分復(fù)雜，干擾因素較多，流動(dòng)相中的無機(jī)鹽不利于色譜柱保護(hù)，色譜柱也不宜頻繁更換。隨著色譜技術(shù)的不斷發(fā)展，在傳統(tǒng)HPCL的基礎(chǔ)上，經(jīng)不斷從樣品處理、內(nèi)標(biāo)物的選擇、鍵合相和流動(dòng)相等方面加以改進(jìn)，使得HPCL的應(yīng)用有了進(jìn)一步的擴(kuò)展。陽利龍等人以環(huán)己烷羧酸為內(nèi)標(biāo)、2-溴-對(duì)硝基苯乙酮為衍生化試劑、Hypersil BDS C18柱、甲醇-水(79:21)為流動(dòng)相，建立了一種柱前衍生RP-HPLC測(cè)定丙戊酸鈉血藥濃度的新方法[5]。10066 例次癲癇患兒監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，患兒應(yīng)用丙戊酸鈉個(gè)體差異大，在治療濃度50～100 mg/L內(nèi)的占50.7%，低于50 mg/L占42.8%，高于100 mg/L的占6.5%。因此，對(duì)患兒進(jìn)行及時(shí)、有效的血藥濃度監(jiān)測(cè)，能夠指導(dǎo)臨床合理用藥。劉義釗等人以Shim-pack VP-ODS為分析柱，流動(dòng)相為乙腈-甲醇，以SPE 預(yù)處理血漿樣品后進(jìn)樣分析，建立了一種SPE-HPLC同時(shí)測(cè)定苯巴比妥、苯妥英、卡馬西平、硝西泮、地西泮5種抗癲癇藥的血藥濃度的方法[6]。

1.2氣相色譜法

氣相色譜法(Gas Chromatography，GC)是以氣體為流動(dòng)相的色譜方法，適用于易揮發(fā)的物質(zhì)，具有高效能、高選擇性和靈敏度，操作簡便等特點(diǎn)。在常用抗癲癇藥物中，丙戊酸沸點(diǎn)較低，是較早使用GC進(jìn)行血藥濃度監(jiān)測(cè)的藥物之一。湯芳萍等人建立了一種GC法同時(shí)測(cè)定丙戊酸鈉和托吡酯的血藥濃度，其線性范圍分別為10～250 mg/L、10～1000 mg/L[7]。GC法可以不用衍生化直接測(cè)定丙戊酸鈉，比HPLC法簡便、快速，檢測(cè)成本低。開展抗癲癇藥物監(jiān)測(cè)，GC法中尋找合適的內(nèi)標(biāo)物是關(guān)鍵，如巴比妥婁、苯妥英等通常需要將血樣烷基化處理，可以用甲基苯妥英為內(nèi)標(biāo)。

1.3色譜聯(lián)用技術(shù)

高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS)，是以集HPLC的高效分離手段，MS分析方法的高靈敏度和高專屬性為一體的新技術(shù)。Ghada F等人已將HPLC-MS用于卡馬西平、托吡酯等血藥濃度的分析應(yīng)用[8]。在托吡酯的研究中，其分析效率較高，每個(gè)樣品所需少于2 min，在0.5～50 mg/L范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系，最低定量限為0.5 mg/L。陳琴華等人采用HPLC-MS技術(shù)，以地西泮作為內(nèi)標(biāo)同時(shí)測(cè)定卡馬西平、氯硝西泮、阿普唑侖、艾司唑侖和苯妥英鈉5 種抗癲癇的血藥濃度，檢測(cè)限(LOD)分別為0.5、1.0、5.0、0.5、1.0 μg/L，靈敏度高[9]。該方法進(jìn)樣量小，理化性質(zhì)差異較大時(shí)可以同時(shí)分析多個(gè)組分，靈敏度也高。但色譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)接口裝置要求嚴(yán)格，儀器操作復(fù)雜，技術(shù)難度大[10]。

1.4電泳分析法

高效毛細(xì)管電泳法(High Performance capillary electrophoresis,HPCE)是利用高電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，在毛細(xì)管內(nèi)帶電荷粒子按其淌度或分配系數(shù)的不同而進(jìn)行分離的一種電泳分析新技術(shù)，在選擇性上與HPLC法互為補(bǔ)充。F.Jabbaribar等[11]將毛細(xì)管電泳法與色譜法相結(jié)合，建立了一種膠速電動(dòng)毛細(xì)管色譜法(micellar electrokinetic capillary chromatographic，MEKC)測(cè)定人血清中苯妥英鈉濃度。劉陽等[12]用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法(CZE)等測(cè)定血漿中苯妥英鈉濃度。HPCE 法對(duì)樣品的預(yù)處理的要求較色譜法低，但樣品仍需預(yù)處理后進(jìn)行分析。樣品的預(yù)處理通常采用萃取法和直接進(jìn)樣法。直接進(jìn)樣法是HPCE法的特點(diǎn)之一，生物樣品一般為經(jīng)過蛋白沉淀、離心過濾后進(jìn)樣。萃取法主要有液相萃取和固相萃取法，適用于基質(zhì)干擾較大，待測(cè)組分?jǐn)?shù)量較多，尤其是含脂溶性成分較多的樣品，但精密度和靈敏度不夠高。當(dāng)用HPLC 分析色譜柱易受污染且難以再生時(shí)，HPCE 可以作為補(bǔ)充。因?yàn)槊?xì)管極易清洗，尤其適合于復(fù)雜生物樣品分析。

2　免疫法

2.1熒光偏振免疫法

熒光偏振免疫法(Fluorescence polarization immunoassay，F(xiàn)PIA)是利用熒光標(biāo)記的藥物與體內(nèi)藥物共同競(jìng)爭(zhēng)抗體的原理進(jìn)行分析，是20世紀(jì)80年代初發(fā)展起來的，具有快捷、靈敏、準(zhǔn)確、穩(wěn)定，操作簡便易于掌握，自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，適用于急診和大樣本量的分析，是臨床上最常用的方法之一，較早實(shí)現(xiàn)了丙戊酸鈉、苯妥英鈉等抗癲癇藥物TDM自動(dòng)化[13]。美國雅培公司的TDx血藥濃度監(jiān)測(cè)儀是國內(nèi)醫(yī)院應(yīng)用最廣泛的分析儀器，常用的配套試劑盒有丙戊酸、苯巴比妥、卡馬西平、苯妥英鈉等。FPIA法需定制特定的儀器與其配套的試劑盒，試劑盒價(jià)格昂貴，有一定保質(zhì)期，不能同時(shí)測(cè)定多種藥物。受藥物抗體種類的限制，某些需進(jìn)行TDM的藥物，因?yàn)檫€沒有相應(yīng)免疫試劑盒供應(yīng)，不能進(jìn)行監(jiān)測(cè)，不能滿足對(duì)新藥研究的要求。

2.2酶免疫分析法

均相酶免疫分析法(enzyme-multiplied immunoassay technique，EMIT)主要是利用酶標(biāo)記的藥物與樣品中游離藥物分子競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合抗體的原理進(jìn)行監(jiān)測(cè)，應(yīng)用于小分子藥物的定量分析，具有精密度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)[14-15]。抗體與樣品中游離藥物分子競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合的同時(shí)，可能還會(huì)與其它相似于藥物的結(jié)合，所以對(duì)抗體的選擇性要求較高，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。此外，EMIT法對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求嚴(yán)格，每次樣本測(cè)定前都需要進(jìn)行定標(biāo)，以保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性 。

2.3放射免疫分析法

放射免疫分析法(radioimmunoassay，RIA)是將放射性同位素的高敏感性與抗原抗體的特異性反應(yīng)相結(jié)合的一種分析方法。放射性同位素示蹤技術(shù)由于具有放射性，免疫標(biāo)記物容易制備，其靈敏度更高，對(duì)儀器要求不高，操作方便快捷。但其只能監(jiān)測(cè)藥物的免疫活性，且可能會(huì)產(chǎn)生放射性污染，故在臨床應(yīng)用較少。

3　光譜分析法

紫外光度法(ultraviolet spectrophotometry，UV)在抗癲癇藥物的監(jiān)測(cè)中，儀器操作簡便、快速，容易推廣普及，尤其適用于基層醫(yī)院開展血藥濃度監(jiān)測(cè)[16]，是我國最早在臨床上開展苯妥英鈉和苯巴比妥血藥濃度監(jiān)測(cè)的方法。但該方法樣本用量大、靈敏度和選擇性不高，樣品中一些內(nèi)源性雜質(zhì)干擾大，對(duì)多組分混合樣品測(cè)定前需要進(jìn)行分離提純。

熒光光度法具有較高的靈敏度、選擇性，樣品消耗少，儀器操作簡便快捷，但檢測(cè)時(shí)背景干擾較大，還可能存在代謝物的干擾。又因許多藥物自身因不具有或只有較弱熒光特性，極大的限制了熒光分析法的應(yīng)用。

4　結(jié)　語

準(zhǔn)確、可靠的血藥濃度測(cè)定方法的建立是TDM的關(guān)鍵。目前，傳統(tǒng)的抗癲癇藥TDM技術(shù)已成熟，在抗癲癇TDM實(shí)踐中，需要結(jié)合醫(yī)院自身?xiàng)l件、患者的個(gè)體差異，以及藥物本身的特性等多種因素，綜合考慮選擇適宜的監(jiān)測(cè)方法。色譜分析法準(zhǔn)確性和靈敏度高、選擇性好，可以同時(shí)測(cè)定多個(gè)藥物或代謝產(chǎn)物，但儀器昂貴。對(duì)不適合免疫分析或無商品試劑盒供應(yīng)時(shí)，可用于臨床常規(guī)監(jiān)測(cè)，尤其適合新藥的研究；光譜分析法操作簡便快捷，但準(zhǔn)確性、靈敏度不夠高；免疫分析法快速簡便，選擇性好，易自動(dòng)化，適用于大樣本量的檢測(cè)，但需要配套儀器和試劑，檢測(cè)藥物品種要受有限試劑盒的種類，試劑成本較高。

隨著現(xiàn)代分離分析技術(shù)的快速發(fā)展，抗癲癇新藥不斷進(jìn)入臨床實(shí)踐，一些新藥的監(jiān)測(cè)方法還尚未完全建立，藥學(xué)工作者們需要與時(shí)懼進(jìn)，利用現(xiàn)代新技術(shù)及時(shí)創(chuàng)新和改進(jìn)藥物監(jiān)測(cè)方法，不斷提高TDM的能力，促進(jìn)臨床藥學(xué)服務(wù)水平的快速提升。在確保有效治療的基礎(chǔ)上，盡可能減少藥物毒副作用，降低患者的治療成本，最大限度保護(hù)患者的利益，滿足臨床用藥個(gè)體化發(fā)展的需求。

[1]秦兵,廖衛(wèi)平,井上有史,等.癲癇:全球重點(diǎn)防治的神經(jīng)精神疾病[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(13):2109-2111.

[2]陳新謙,金有豫,湯光．新編藥物學(xué).17版[M]．北京:人民衛(wèi)生出版社,2011:215-218．

[3]肖花明,王毅.癲癇的藥物治療研究進(jìn)展[J].世界臨床藥物,2012,33(1):22-24,29.

[4]Yoshiaki Y,Yushi I,Kazumi M,et al.Influence of Concomitant Antiepileptic Drugs on Plasma Lamotrigine Concentration in Adult Japanese Epilepsy Patients [J].Biol.Pharm.Bull,2012,35(4):487-493.

[5]陽利龍,銀雪花,祝文兵,等.柱前衍生RP-HPLC法測(cè)定丙戊酸鈉的血藥濃度及監(jiān)測(cè)結(jié)果分析[J].兒科醫(yī)學(xué)雜志,2012,18(1):27-30.

[6]劉義釗,周述香,曾玲.SPE-HPLC法同時(shí)測(cè)定5種抗癲癇藥的血藥濃度[J].中南藥學(xué),2008,6(6)：686-690.

[7]湯芳萍,王偉嬌,李艷飛.氣相色譜法同時(shí)測(cè)定丙戊酸鈉和托吡酯血藥濃度[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2010,30(8):674-675.

[8]Ghada F Ahmed,M S,Richard C.Brundage,et al.Population Pharmacokinetics of Unbound and Total Drug Concentrations Following Intravenously Administered Carbamazepine in Elderly and Younger Adult Patients with Epilepsy[J].Clinical Pharmacology,2013,53(3):276-284.

[9]陳琴華,Stefanie Wei?ig,羅尚文,等.HPLC-MS 法同時(shí)測(cè)定5 種抗癲癇藥的血藥濃度[J].中國科學(xué)：化學(xué),2010,40(6):762-767.

[10]李發(fā)美.分析化學(xué).6版[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2007:442.

[11]F Jabbaribar,S A Mortazavi,A Jouyban.Determination of Phenytoin and its Major Metabolite in Human Serum by MEKC[J].Journal of Chromatographic Science,2009,47:877-880.

[12]劉陽,張穎冬,石靜平.毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定血漿中的苯妥英鈉[J].色譜,2002,20(1):94-95.

[13]王曉華,溫懷凱,邵素倩,等.熒光偏振免疫分析法監(jiān)測(cè)丙戊酸血藥濃度的結(jié)果分析 [J].放射免疫學(xué)雜志,2012,25(2):230-231.

[14]李美珠,陳棪焜.均相酶增強(qiáng)免疫法監(jiān)測(cè)丙戊酸濃度及臨床應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2011,8(24):2959-2960.

[15]王金文,陳美才,李冬,等.均相酶免疫分析苯巴比妥方法的建立[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,35(3):257-259.

[16]印曉星.治療藥物監(jiān)測(cè)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2011:173-174.

Research Progress on Analytical Methods for Therapeutic Drugs Monitoring of Antiepileptic Drugs

JIANG Bo，YANG Jie

(Pharmacy School of Zunyi Medical University,Guizhou Zunyi 563003 China)

Most of antiepileptic drugs have narrow therapeutic windows and serious adverse effects.Meanwhile,the therapeutic effects of antiepileptic drugs are variable according to the individual differences of patients.A comprehensive introduction was given on the application and development of modern analytic techniques for measuring the serum concentrations of conventional drugs against epilepsy.The analytic methods involved in TDM,such as chromatography,spectrometry and immunoassay,were differentiated in multiple aspects including feasibility,selectivity,sensitivity,reliability and as well as detecting costs.An appropriate analytical method of TDM should be benefit for investigating the dose-effect relationship,providing individual drug administration,and most importantly,satisfying the clinic requirements of safety,effectivity and availability in pharmaceutical treatment of epilepsy,based on the conditions of hospitals and the personal situations of patients.

antiepileptic drugs; analytical methods; research progress

貴州省科技廳項(xiàng)目[黔科合J字LKZ(2011)49號(hào)]；貴州省衛(wèi)生廳項(xiàng)目[黔衛(wèi)發(fā)(2011)140號(hào)]。

江波(1963-)，女，教授，主要從事藥物分析方法學(xué)的研究。

R917

A

1001-9677(2016)06-0015-03