HIV抗體初篩試驗陽性結(jié)果分析

周以華

(江蘇省鹽城市大豐人民醫(yī)院檢驗科　224100)

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·臨床研究·

HIV抗體初篩試驗陽性結(jié)果分析

周以華

(江蘇省鹽城市大豐人民醫(yī)院檢驗科224100)

目的通過對獲得性免疫缺陷病毒(HIV)抗體初篩試驗陽性結(jié)果分析,探討其影響因素，以提高檢測結(jié)果的準確性。方法對56例HIV抗體初篩試驗陽性血清標本,分別使用廈門新創(chuàng)試劑和上海科華試劑進行檢測,如兩種試劑均呈陽性或一陰一陽，需送艾滋病確認實驗室進行確認。結(jié)果56例初篩陽性血清標本,經(jīng)兩種試劑復檢,均為陰性2例,均為陽性52例。廈門新創(chuàng)試劑與上海科華試劑陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.51,P>0.05)。54例復檢陽性標本經(jīng)送上級確認實驗室最終確認,陽性49例,陰性5例。結(jié)論HIV抗體初篩試驗陽性結(jié)果影響因素較多,主要與試劑的敏感度和特異度有關(guān),操作中應嚴格執(zhí)行質(zhì)量控制,才能把HIV檢測工作做得更好。

HIV抗體;敏感度;特異度

艾滋病是由獲得性免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一種嚴重傳染性疾病，迄今仍無有效治療方法,除了行為干預等社會手段外，對住院就診患者進行HIV抗體篩查，及時發(fā)現(xiàn)HIV感染者是目前控制疫情的重要技術(shù)手段[1]。本文對2013年1月至2015年12月本院住院患者56例HIV抗體初篩陽性結(jié)果進行分析，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料56例HIV抗體初篩陽性結(jié)果標本均來自2013年1月至2015年12月本院住院患者，在輸血前四項常規(guī)例行檢查中發(fā)現(xiàn)，其中男44例，女12例，年齡18～63歲，中位年齡40.5歲。

1.2儀器與試劑廈門新創(chuàng)試劑和上海科華試劑均經(jīng)過國家藥品監(jiān)督管理局注冊批準，批檢合格，且在有效期內(nèi)，儀器為伯樂酶標儀及上海新波生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的EFFICUTA全自動樣本前處理系統(tǒng)。

1.3方法根據(jù)《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范(2009年修訂版)》要求，對初篩呈陽性反應的標本，應使用原有試劑和另外一種不同原理(或廠家)的試劑重復檢測，陰性標本可以不復檢。初篩試驗采用廈門新創(chuàng)試劑檢測,對初篩試驗陽性血清標本用廈門新創(chuàng)試劑和上海科華試劑重復檢測。如兩種試劑復檢均為陰性,則報告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應,或一陰一陽,則需送上級確認實驗室進行確認[2]。

1.4統(tǒng)計學處理采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)　　果

56例初篩陽性血清標本,經(jīng)兩種試劑復檢,均為陰性2例,均為陽性52例，廈門新創(chuàng)試劑陽性且上海科華試劑陰性2例，廈門新創(chuàng)試劑陰性且上海科華試劑陽性0例。廈門新創(chuàng)試劑與上海科華試劑陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.51,P>0.05)，見表1。54例復檢陽性標本經(jīng)送上級確認實驗室做免疫印跡法最終確認，陽性49例,陽性率為90.7%,陰性5例,陰性率為9.3%。

3　討　　論

目前，國內(nèi)艾滋病初篩試驗室HIV抗體的檢測方法主要是酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，此法具有敏感度高、特異度強、重復性好的特點，其試劑性能穩(wěn)定、易保存、操作簡便、結(jié)果易判斷，可以適用于大規(guī)模篩查試驗，但試驗過程中影響因素較多[3]。表1結(jié)果顯示，56例初篩陽性血清標本,用兩種試劑重復檢測，均為陰性有2例。后經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，1例假陽性結(jié)果是由于血清標本溶血引起。溶血對ELISA的檢測結(jié)果有直接影響，溶血標本的血清中含有血紅素基團，具有過氧化物的活性，在以HRP為標記酶的ELISA測定中，如果血清中的血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色[4]，臨床工作中，標本采集操作不規(guī)范、送檢時間延遲、強力振蕩和分離血細胞操作不慎等易造成溶血現(xiàn)象，當血漿游離血紅蛋白≥10 g/L時會出現(xiàn)HIV抗體假陽性[5]。因此，在日常工作中，對于溶血標本，應加強與臨床科室聯(lián)系，分析溶血原因，必要時建議重新采集標本送檢，或在報告單上注明溶血程度，以防止不必要的糾紛，同時對采血人員加強技能培訓，對送檢人員進行崗前培訓，以避免溶血。另1例是由于洗板不徹底導致非特異蛋白物質(zhì)吸附于微孔內(nèi)而造成假陽性結(jié)果。標本采集后應在室溫下放置1～2 h，待血液凝固后以3 000 r/min離心10 min，使血清中纖維蛋白原充分分離，因為纖維蛋白原對微反應板孔有一定的吸附作用，易造成假陽性結(jié)果。分離后的血清標本應及時測定，對于無法立即測定的標本，需在2～8 ℃保存，超過1周以上，血清標本需保存在-20 ℃，以防止細菌污染(因細菌分泌的過氧化物酶可導致假陽性結(jié)果)。

ELISA操作中，洗板是最主要的關(guān)鍵技術(shù)，血清中殘留的纖蛋白原，或洗滌液析出的結(jié)晶使洗板機兩排針孔全阻塞或半阻塞狀態(tài)，造成未結(jié)合標記酶洗脫不徹底，易產(chǎn)生假陽性[6-7]。本室使用的是上海新波生物技術(shù)有限公司EFFICUTA全自動樣本前處理系統(tǒng)，它使血清標本的加樣、孵育及顯色等一系列操作因素得以自動化，降低了差錯率。在日常工作中，每天應保持儀器的洗板頭清潔，管道通暢，清洗液定時更換，才能保證儀器的正常運行。因此，實驗室必須具有完善的質(zhì)量控制程序，對影響實驗結(jié)果的諸多因素進行控制，才能獲得準確的檢測報告[8]。

隨著國家對艾滋病的監(jiān)測越來越重視，對艾滋病初篩實驗室檢測HIV抗體的敏感度和特異度的要求也越來越高[9]，HIV抗體檢測適用于HIV感染窗口期后至艾滋病患者死亡的整個過程，ELISA檢測HIV抗體是最常用的實驗室診斷方法。自從1985年第一代ELISA試劑使用純化的裂解HIV作為包被抗原，存在較多的假陽性，其敏感性和特異性分別為97.2%和70.0%，窗口期為6～12周[10]。1990年第二代試劑產(chǎn)生，采用基因工程的重組或人工合成肽為包被抗原，主要包被gp24、gp36、gp41、gp120,能同時檢測HIV-1和HIV-2，特異性明顯提高。1994年，美國研制出使用雙抗原夾心法的第三代試劑，由于能同時檢測IgM抗體，因此可以縮短檢測窗口期4～5 d，同時敏感性也有所提高[11]。第四代試劑則在第三代的基礎(chǔ)上增加了P24抗原的檢測，用HIV抗原和抗P24抗體同時包被反應板，檢測血清中的HIV抗體和P24抗原，進一步縮短了窗口期，時間為4～5 d，但由于同時把抗原和抗體包被在反應板上，存在互相干擾的可能，出現(xiàn)了第二窗口期[12]。

目前，由于試劑檢測成本原因，本室所用兩種不同廠家的ELISA檢測試劑均屬于雙抗原夾心法(第三代試劑)，不同廠家生產(chǎn)的試劑之間存在一定的差異，選擇時主要考慮它的敏感度和特異度，在更換試劑廠家時必須對新試劑進行評估，更換試劑批號時需重新制作質(zhì)控圖。表1結(jié)果顯示,兩組試劑陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，說明二者在檢測HIV抗體方面程度一致性好，故廈門新創(chuàng)試劑和上海科華試劑均可作為初篩試劑，由于廈門新創(chuàng)試劑比上海科華試劑檢測的HIV抗體陽性數(shù)多2例，故選擇廈門新創(chuàng)試劑作為初篩試劑比選上海科華試劑更合適，可以減少漏診。其原因可能為不同廠家生產(chǎn)的試劑盒，由于包被抗原或抗體純度及生產(chǎn)工藝不同，導致結(jié)果不同。而把上海科華試劑作為另外一種復檢試劑，也是合適的，可以相對增加其特異度。54例復檢陽性標本經(jīng)送上級確認實驗室最終確認陽性49例,陰性5例。造成假陽性結(jié)果的原因多數(shù)尚不清楚，一些含有針對HLA抗原的抗體和患有自身免疫性疾病(如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風濕病),寄生蟲病及某些病毒性肝炎患者的血清標本容易出現(xiàn)假陽性[13-14]。因此，根據(jù)《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范(2009年修訂版)》要求，對初篩呈陽性反應的標本，應使用原有試劑和另外一種不同原理(或廠家)的試劑重復檢測，以增加敏感度，提高特異度，減少漏診和降低費用。

綜上所述，本研究通過對56例初篩陽性血清標本的回顧性分析，探討了HIV抗體在檢測過程中的諸多影響因素。在選擇初篩診斷試劑時，既要保證其敏感度高，又要兼顧特異度,工作中要加強質(zhì)量控制，嚴格按照操作規(guī)程進行，才能減少假陽性結(jié)果的發(fā)生，提高檢測結(jié)果的準確性。

[1]楊曉莉，鮑作義，劉永健，等．中國HIV抗體檢測策略的應用評價[J]．中華流行病學雜志，2010，31(7)：776-780．

[2]董雪,趙曦,里天初,等.中國三版艾滋病檢測技術(shù)工作規(guī)范的對比分析[J].中國艾滋病性病,2010，15(6):595-598.

[3]張京海，陳世敏，崔海榮，等．HIV感染病人的血清學診斷及結(jié)果分析[J]．放射免疫學雜志，2007，20(2)：179-180．

[4]郭德華．全國臨床免疫和臨床免疫檢驗學術(shù)會紀要[J]．實驗與檢驗醫(yī)學，1999，16(4)：256．

[5]岳展伊．溶血對ELISA法檢測HIV抗體影響的臨床分析[J]．中外醫(yī)療，2010，29(2)：34．

[6] 于振喜,李連潔.用ELISA法檢測HIV抗體時如何避免“花板”[J].中國醫(yī)藥導報,2006,3(23)：56.

[7]王靜．ELISA快速法檢測HBsAg時手工洗板和洗板機洗板的結(jié)果比較[J]．中國醫(yī)藥導報，2010，7(9)：69．

[8]張惠芳，張宇艷，楊詠梅，等．HIV抗體初篩實驗室室內(nèi)質(zhì)控分析[J]．中華臨床醫(yī)學衛(wèi)生雜志，2006，4(10)：76-77．

[9]陳云鈺．ELISA法檢測HIV抗體需注意的影響因素[J]．中國衛(wèi)生檢驗雜志，2011，21(6)：1564-1565．

[10]代麗麗，吳昊．人免疫缺陷病毒感染的實驗室檢測概況[J]．中國病原生物學雜志，2008，3(4)：312-314．

[11]Barbé F,Klein M,Badonnel Y.Early detection of antibodies to human immunodeficiency virus 1 by a third-generation enzyme immunoassay.A comparative study with the results of second-generation immunoassays and western blot[J].Ann Biol Clin(Paris),1994,52(5):341-345.

[12]吳忠華，羅鵬，呂沁風．HIV實驗室檢測及其研究進展[J]．中國國境衛(wèi)生檢疫雜志，2009，32(4)：285-292．

[13]陳奕賢，陳秋玉．不同試劑檢測艾滋病抗體結(jié)果觀察[J]．中國現(xiàn)代藥物應用，2010，4(12)：108-109．

[14]阮樂幸，袁國平，余明華．HIV抗體假陽性結(jié)果分析[J]．現(xiàn)代預防醫(yī)學，2005，32(12)：1763．

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.17.051

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