血清和糖皮質激素誘導激酶基因多態性與自然流產的關系

何淑貞，蒲育棟，曹金如，周麗霞，陳壽云，周玉玲

(東莞市第三人民醫院產前診斷中心，廣東 東莞 523326)

血清和糖皮質激素誘導激酶基因多態性與自然流產的關系

何淑貞，蒲育棟，曹金如，周麗霞，陳壽云，周玉玲

(東莞市第三人民醫院產前診斷中心，廣東 東莞 523326)

目的 探討血清和糖皮質激素誘導激酶1(SGK1)rs1743967以及血清和糖皮質激素誘導激酶2 (SGK2)rs743998與自然流產之間的關系。方法采用病例對照研究方法，選取2013年1月至2013年12月我院64例自然流產患者作為自然流產組，同期40例人工流產患者作為對照組，利用3730XL測序儀檢測SGK1 rs1743967和SGK2 rs743998基因多態性，χ2檢驗比較病例組與對照組基因型及等位基因頻率分布。結果①SGK1 rs1743967對照組基因型為GG+GT，而自然流產組以GG+GT為主，其次是TT，兩組基因型比較差異有統計學意義(P＜0.05)。對照組等位基因G和T頻率各占50.0%；自然流產組G占35.2%，T占64.8%，兩組等位基因頻率比較差異有統計學意義(P＜0.05)。②SGK2 rs743998對照組基因型以CT+TT為主，其次是CC，而自然流產組以CC為主，其次是CT+TT，兩組基因型比較差異有統計學意義(P＜0.05)。對照組等位基因C和T頻率各占50.0%；自然流產組C占83.6%，T占16.4%。兩組等位基因頻率比較差異有統計學意義(P＜0.05)。結論SGK1 rs1743967和SGK2 rs743998與自然流產有關，但相關機制有待今后進一步研究。

血清和糖皮質激素誘導激酶；自然流產；基因多態性；相關性

自然流產是育齡婦女常見的妊娠期疾病，發生率為10%～15%[1]。孕婦黃體功能不全、甲狀腺功能低下、胚胎染色體異常、免疫功能異常等是發生早期自然流產的常見原因[2]。Solker等[3]發現在患有原因不明性不孕癥婦女的子宮內膜中，血清和糖皮質激素誘導激酶1 (SGK1)的含量較正常孕婦高，而習慣性流產者的SGK1含量則比正常孕婦低。本研究旨在探討SGK基因多態性與自然流產的關系，進一步闡明自然流產的分子生物學機制，為尋找自然流產的病因提供有利的借鑒依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1月至2013年12月期間在我院就診的自然流產患者作為自然流產組，年齡19～40歲，平均(29.6±4.3)歲。納入對象：無染色體因素、解剖因素、感染因素、內分泌因素、抗磷脂綜合征及血管栓塞性疾病等。所有研究對象均未生育過小孩。選擇同期進行人工流產的患者作為對照組，年齡19～36歲，平均(28.0±4.5)歲。兩組間的年齡差異無統計學意義(t=1.889，P=0.062)。本研究經本院倫理委員會批準，所有對象均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集和抽提 收集所有對象的一般臨床資料，同時采集2 ml EDTA抗凝血，-80℃冰箱保存，用于提取DNA。按DNA提取試劑盒(Axygen)說明書要求進行操作，從全血標本中提取基因組DNA。

1.2.2 主要試劑和儀器 外周血基因組DNA抽提試劑盒、Taq DNA聚合酶、DNA Marker均購自上海翼和應用生物技術有限公司，引物由該公司合成。PRISM 3730序列分析儀購自美國ABI公司。

1.2.3 引物設計與合成 通過NCBI基因序列數據庫獲得SGK1基因rs1743967 G/T核苷酸序列，并用Primer5.0設計引物序列如下：上游引物AGCCGGCATCAATCTTTAAT，下游引物GCAAAAGCACCC TGTAGGC，擴增產物長度是700 bp。通過NCBI基因序列數據庫獲得SGK2基因rs743998 C/T核苷酸序列，并用Primer 5.0設計引物序列如下：上游引物GCTCTGTTGCCCAAGAGTCTGTTAG，下游引物AATGTCAACAACTTTCTGGTAATTCTGGTG，擴增產物長度是1 583 bp。

1.2.4 PCR擴增 采用20μL PCR擴增反應體系，含1μL模板DNA，上下游引物各1μL，2μL dNTP，0.2μL Taq聚合酶，2μL反應緩沖液，0.6μL Mg2+，12.2μL雙蒸水。PCR反應條件：先在95℃預變性2 min，94℃ 30 s，59℃ (rs1743967)1 min 30 s，53℃(rs743998)1 min 30 s，72℃1 min 30 s，40個循環后72℃延伸10 min。將PCR擴增產物使用美國應用生物系統公司3730XL測序儀測序。

1.3 統計學方法 所有數據輸入SPSS16.0統計軟件進行分析，數據用頻數和構成比表示。Hardy-Weinberg平衡用于檢測各基因型分布，χ2檢驗用于比較自然流產組與對照組基因型及等位基因頻率，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 SGK1 rs1743967基因型及等位基因分布對照組基因型為GG+GT，而自然流產組以GG+GT為主，其次是TT，兩組基因型比較差異有統計學意義(P＜0.05)。對照組等位基因G和T頻率各占50.0%；自然流產組G占35.2%，T占64.8%，兩組等位基因頻率比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

表1 SGK1-rs1743967與自然流產的關系[例(%)]

2.2 SGK2 rs743998基因型及等位基因分布 對照組基因型以CT+TT為主，其次是CC，而自然流產組以CC為主，其次是CT+TT，兩組基因型比較差異有統計學意義。對照組等位基因C和T頻率各占50%。自然流產組C占83.6%，T占16.4%。兩組等位基因頻率比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

表2 SGK2-rs743998與自然流產的關系[例（%）]

3 討 論

血清和糖皮質激素調節蛋白激酶(Serum and glucocorticoid-regulated protein kinase，SGK)是一種新發現的絲/蘇氨酸蛋白激酶，基因全長2.4 kb，在各種哺乳動物組織和細胞系中均有表達。它有SGKl、SGK2和SGK3三種異構酶，三種異構酶的結構同源性高達80%[4]。近年來研究表明，血清和糖皮質激素調節蛋白激酶可能是多種細胞信號轉導通路和細胞磷酸化級聯反應的一個功能性交匯點，可被多種應激因素誘導激活，在調節離子通道、細胞增殖、細胞存活和凋亡的信號轉導中起重要的作用[5-6]。

本研究結果發現，SGK1 rs1743967對照組基因型為GG+GT，而自然流產組以GG+GT為主，其次是TT，兩組基因型比較差異有統計學意義。進一步由OR值1.778可知，TT基因型是自然流產發生的危險因素。而等位基因也證實，當G突變為T時，增加了患者發生流產的風險，所以T等位基因是自然流產發生的危險因素。SGK2 rs743998對照組基因型和自然流產組基因型比較差異有統計學意義，進一步由OR值0.060可知，CT+TT基因型是保護性因素，當CT+TT轉變成CC基因型越多，發生自然流產的風險越大。而等位基因T是保護性因素，當T突變為C，則增加自然流產的風險。

由于SGK1和SGK2的等位基因發生突變，考慮可能使上皮鈉通道(ENaC)表達上調，并且使泛素連接酶(Nedd4-2)表達下調，從而引起一系列生理反應，導致自然流產的發生。Salker等[3]的研究也表明，SGK1能夠防止子宮內膜間質成纖維細胞的氧化細胞死亡，所以蛻膜SGK1表達減少將導致流產。

綜上所述，SGK1 rs1743967和SGK2 rs743998與自然流產存在著一定的關聯，但具體的機制如何有待今后進一步的實驗加以證實，以期為更好地研究自然流產的相關機制提供有利的借鑒依據。

[1]劉玉昆,劉穎琳,杜濤,等.早期妊娠自然流產患者的超聲表現與絨毛染色體核型分析[J].中山大學學報(醫學科學版),2013,34(1):94-98.

[2]謝幸,茍文麗.婦產科學[M].北京:人民衛生出版社,2013:49.

[3]Salker MS,MChristian,Steel JH,et al.Deregulation of the serum and glucocorticoid-inducible kinase SGK1 in the endometrium causes reproductive failure[J].NATURE MEDICINE,2011,17(11):1509-1513.

[4]孫婷婷,倪鑫.血清和糖皮質激素調節的蛋白激酶[J].生命的化學, 2007,27(2):133-135.

[5]包慶,趙勇,閏郡琴,等.分子開關蛋白激酶在不明原因復發性流產患者蛻膜組織中的表達[J].中國基層醫藥,2014,21(13):1947-1949.

[6]許海.血清和糖皮質激素調節蛋白激酶3在乳腺癌干細胞中的表達[J].中國組織工程研究,2013,17(40):7061-7067.

Association of SGK gene polymorphism with spontaneous abortion.

HE Shu-zhen,PU Yu-dong,CAO Jin-ru,ZHOU Li-xia,CHEN Shou-yun,ZHOU Yu-ling.Prenatal Diagnosis Center,the Third People's Hospital of Dongguan City, Dongguan 523326,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the association of serum and glucocorticoid-regulated protein kinases 1(SGK1) and SGK2 polymorphisms(rs1743967 for SGK1 and rs743998 for SGK2)with spontaneous abortion.MethodsSixty-four cases of spontaneous abortion,who enrolled into our hospital from January 2013 to December 2013,were selected as the spontaneous abortion group,and 40 cases of artificial abortion were selected as a control group for the same period. Polymorphisms of rs1743967 and rs743998 were determined through 3730XL sequencer.genotype and allele frequency distribution of the case group and the control group were compared with χ2test.Results①rs1743967 genotype of SGK1 in the control group were GG+GT,while rs1743967 genotype of SGK1 in the spontaneous abortion group were mainly GG+ GT,followed by TT.Control group and spontaneous abortion group had a statistically significant difference(P＜0.05).Allele frequency of G and T in the control group was equally 50.0%,while allele frequency of G and T in spontaneous abortion group were respectively 35.2%and 64.8%,and allele frequency distribution has a statistically significant difference between control group and spontaneous abortion group(P＜0.05).②rs743998 genotype of SGK2 in control group was mainly CT+ TT,followed by the CC,while spontaneous abortion group was mainly CC,followed by CT+TT,and genotype of the two groups have a statistically significant difference(P＜0.05).Allele frequency of C and T in control group was equally 50.0%, while allele frequency of C and T in spontaneous abortion group was respectively 83.6%and 16.4%.Allele frequency distribution of rs743998 had a statistically significant difference between control group and spontaneous abortion group(P＜0.05).ConclusionSGK1 and SGK2 polymorphisms(rs1743967 for SGK1 and rs743998 for SGK2)have the correlation with spontaneous abortion.However,the mechanisms have yet to be studied in detail.

Serum and glucocorticoid-regulated protein kinases(SGK);Spontaneous abortion;Gene polymorphism;Correlation

R714.21

A

1003—6350（2016）09—1393—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.09.006

2016-01-05)

廣東省科技廳社會發展領域科技計劃項目（編號：2012B032000015）

周玉玲。E-mail：zhouyuling88@163.com