槐米中蘆丁提取純化工藝研究進展

舒俊翔　王　崢

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槐米中蘆丁提取純化工藝研究進展

舒俊翔王崢

（湖南科技學院 化學與生物工程院，湖南 永州 425199）

槐米是一種具有廣泛生理活性的傳統中藥，主要含蘆丁等成分。文章對近十年從槐米中提取和純化蘆丁的方法進行了綜述。蘆丁的提取主要有回流提取法、微波輔助提取、超聲輔助提取等。蘆丁的純化方法主要有溶劑重結晶法、大孔樹脂純化法、葡聚糖凝膠純化法、聚酰胺純化法等,為蘆丁的工業化生產和蘆丁的實驗室研究提供了理論依據。

槐米；蘆丁；提取工藝；純化工藝

槐米是豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾，夏季花蕾形成時采收，蒸后曬干，除去枝、梗及雜質[1]。槐米具有涼血止血，清肝瀉火之功效；臨床上常用于便血，痔血，血痢，崩漏，吐血，衄血，肝熱目赤，頭暈目眩等疾病治療。槐米中主要活性成分為蘆丁，另外還含有樺皮醇(betulin)、槐二醇(sophoradiol)、槐花米甲，乙，丙素(soph-orinA,B,C)、槲皮素(quercetin)及槐花皂苷Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ(kaikasaponinⅠ,Ⅱ,Ⅲ)等化合物[2]。近年來國內外醫藥工作者對其作用進行研究，發現其有效成分有抗癌防癌、抗血小板聚集、鎮痛、抗菌、抗病毒、抗衰老、抗炎、抗過敏、抗自由基及抗氧化等多種活性，對改善心肌循環、清熱解毒、降血脂、軟化血管、消炎補腎等有良好的防治作用[3]。

蘆丁（rutin），異名蕓香苷、維生素P、紫槲皮苷，蕓香葉苷，路丁，絡通[4]。蘆丁分子式為C27H30O16·3H2O，相對分子量為610.51，其性狀為黃色結晶粉末或無晶形粉末，有苦味，熔點177-178℃，略溶于水，能溶于熱水及乙醇，遇光易變質，需在陰涼處保存[5]。蘆丁具有清除自由基、吸收紫外線、抗氧化、保護胃黏膜、抗骨質疏松；增強免疫、抗衰老；降低血糖、抗癌細胞；抗病毒、抑菌、抗炎、鎮痛的作用[4]。對痛風、肥胖、糖尿病、心血管疾病有相關療效[6]。就近十年來對槐米中的蘆丁提取和純化方法經行總結如下，以供參考。

1　蘆丁的提取工藝

1.1加熱回流堿提取酸沉淀法

龔盛昭[7]等人研究發現將槐米粉碎，加入5倍量的水，用石灰水調節pH值至8-9，在溫度為50℃-60℃下提取20-30min。過濾，濾液用鹽酸調節pH值至2-3，在60℃-70℃保溫10min，靜置6h，過濾，濾液用pH值為1-2的鹽酸洗滌1次，再用冷水洗滌2-3次，即得粗蘆丁，產率為18.4%，含量為96%。將粗蘆丁進行精制，可得精制蘆丁，純度可達99%以上。

全先高[8]等人取槐米100g，加入硼砂1.0g作緩沖劑，亞硫酸鈉1.0g作抗氧劑，加水700ml用飽和石灰水調pH至9-10,于80℃提取1h。合并3次提取液濾用5mol/L的鹽酸調pH到4-5，低溫靜置24h抽濾，濾餅用蒸餾水洗滌至pH 7，70℃真空干燥。此法提取率為18.3%，蘆丁純度為96.3%。

1.2滲漉堿提取酸沉淀法

戰玉琴等[9]取粉碎槐米適量，加6一8倍量溫水洗滌后裝入滲漉桶中，加入堿溶液（Na2SO3與石灰水混合）浸泡20-30min后開始滲漉，控制流速10一15ml/min。至滲漉液澄清后開始收集滲漉液并立即酸化，直至滲漉液加酸酸化不產生混濁時停止收集，合并滲漉液調pH4-5放置過夜，翌日，過濾，收集沉淀并洗滌至中性后，在90℃以下烘干即得蘆丁粗品。其平均收率17.50%，蘆丁純度為93.93%。

1.3冷浸堿提酸沉法

李穎平[10]等人取10g粉碎的槐米，于PH值為8-9的飽和石灰水中冷浸。離心機離心，濾液用Hcl調至pH值為 2-3，60℃左右酸沉30 min。然后置于冰箱靜置過夜，再用離心機離心，沉淀用鹽酸洗2次，調至pH值為6。60℃干燥箱干燥，制得粗蘆丁。這方法蘆丁提取率為22.3%。

1.4連續萃取法

翟廣玉等[11]將槐米粉碎至20-40目，用OP-10和NaHCO3處理后再蒸煮45 min，用硼砂含量為0.3%的飽和石灰水做萃取劑，液料比為1：20。萃取液用鹽酸調pH =2-3，靜置沉淀6 h。該工藝提取率為22%，蘆丁純度為98.2%。通過與浸泡法、煎煮法的對比，得出此法工藝流程短，操作簡單,提取率高，含雜質少，殘渣少，耗能小，經濟和社會效益顯著的優點。但其工藝萃取液的體積較大，后處理費用較高。

1.5煎煮法

廖華衛等[12]對煎煮法提取槐米中蘆丁進行了工藝優化。稱取100g槐米細粉，2500mL蒸餾水加熱提取3次，每次提取40min，棉花過濾，合并濾液常溫下放置析晶12 h，得蘆丁粗品。蘆丁粗品沸水溶解后重結晶，抽濾，沉淀物于60℃干燥，稱重。該方法蘆丁提取率為12.66%。此實驗得到蘆丁純度高，污染少,操作簡單，成本低，適于大規模生產。

1.6微波提取法

陳燕芬等[13]取槐米細粉1g，精密稱定，加蒸餾水100ml浸泡30min，置于PJ17F-B微波爐(順德市美的微波爐制造有限公司)內加熱至沸，再低火(功率450W)提取10 min，待樣品溫度冷卻至室溫后再次提取，提取3次,合并提取液,過濾并濃縮定容到100mL。其提取法與水回流法，乙醇回流法做對比，此法槐米中所提取的蘆丁含量最高，達到14.66%。

1.7超聲提取法

付起鳳等[14]對超聲提取槐米中蘆丁的工藝進行了優化。將20g槐米置于400ml蒸餾水中加熱至沸騰，然后轉移至超聲波清洗器中進行超聲提取，靜置，抽濾，并干燥后得粗品蘆丁。最佳提取工藝為固定料液比1∶20、超聲頻率40kHz 、提取次數2次、提取溫度為70℃，提取時間為20min，提取功率為400W。

1.8超聲輔助堿提酸沉法

魏彩霞等[15]用超聲輔助堿提取酸沉方法對槐米中提取蘆丁進行了研究。碎槐米用石灰乳調pH至8-9，置于超聲儀中提取，過濾后加鹽酸調pH至2-3，過濾后得蘆丁粗提物。試驗后得最佳超聲輔助堿提酸沉工藝條件為超聲頻率20kHz,、提取功率800W、提取溫度60℃、料液比1:20、超聲提取2次、提取時間30min。得到的蘆丁提取率最高為18.25%。

1.9醇提法

王琴[16]用醇提法對槐米中蘆丁提取進行了研究。稱取約2g碎槐米, 加入乙醇20mL于圓底燒瓶中恒溫條件下提取,合并三次濾液后，放置24h后抽濾,濾餅用石油醚、丙酮、95%乙醇各洗滌一次,再用適量95%乙醇溶解，得蘆丁樣品。通過研究得最佳提取工藝為：75%乙醇、固液比1:10、控溫75℃、提取三次每次60min。此法的最高得率為17.52%。

1.10殺酶堿提法

曹永剛[17]對槐米用放射元素Co60產生放射線M射,使槐米中的酶滅活,緩沖劑為硼砂,亞硫酸氫鈉為抗氧化劑,以飽和石灰水為溶劑提取。此法蘆丁含量大于95%,提取率為85%。此工藝本工藝產品不需用乙醇或熱水重結晶,質量即可符合標準。但由于使用放射性物質，實際生產中有一定技術難度。

2　蘆丁的純化

2.1冷水結晶法

涂瑤生等[18]將提取液濃縮至無醇味后靜置析出結晶，離心，20倍水洗滌3次,蘆丁純度可達89.82%。采取冷水洗滌的方法純化蘆丁主要是因為蘆丁在0-5℃時,基本不溶于水,因而在溫度下降后會析出結晶。

2.2大孔樹脂柱色譜純化法

馮民昌等[19]采取大孔樹脂純化粗品蘆丁。結果表明，當蘆丁原料含量大于85%，原料/ 樹脂（DM－130型）=1/10（m/m），70%的甲醇 + 水系統時，一次工藝純化后的蘆丁產率大于50%，產品經HPLC檢測純度大于96.5%，當以蘆丁含量為90%的粗品蘆丁為原料時，產率接近65%，產品純度可達98%以上。此工藝流程快速、簡單，高效，可適于較大規模的生產。

馮希勇[20]用醇提法提取蘆丁粗品后, 用D101型大孔吸附樹脂純化。得出蘆丁提取率高達25%以上,且純度超過98%。其試驗建立了一種提取、純化蘆丁的新工藝, 且該工藝相對簡便易行,提高生產效率。

2.3葡聚糖凝膠柱色譜純化法

趙文彬等[21]用葡聚糖凝膠純化精制蘆丁。稱取精制蘆丁0.25 g,用少量甲醇使之溶解,加入葡聚糖凝膠柱頂,用甲醇洗脫 ,用聚酰胺板鑒定合并收集液，水浴濃縮至原液的一半，冷置，過濾晶體，60℃干燥即得蘆丁純品。此法純化的蘆丁含量可達98.05%。

2.4聚酰胺柱色譜純化法

冀德富等[22]取聚酰胺10.0g，加入200mL蒸餾水浸泡后裝柱。取1.0g堿提酸沉法得到的粗品蘆丁，使其溶于少量甲醇后加于聚酰胺柱頂。用100mL的蒸餾水洗脫后，繼用15%乙醇進行洗脫。用聚酰胺薄膜對各管收集液進行檢識，合并相同色譜行為的收集液并冷藏，析出沉淀后抽濾即得純化蘆丁，其含量為98.96%。

2.5高速逆流色譜分離純化法

朱琳等[23]以經初步純化的苦蕎麩皮黃酮為原料，進行了高速逆流的分離純化，選用兩相溶劑體系：乙酸乙酯-正丁醇-水（4：1：5），上相為固定相，下相為流動相，進樣速率2mL/min，轉速850 r/min。于140 min收集到蘆丁。經高效液相測定蘆丁純度分為99%。

2.6雙水相純化法

楊青海等[24]建立了由([BMIm]BF4)和(NH4)2SO4形成的雙水相體系分離盧丁的新方法。分別研究了 (NH4)2S04的水溶液濃度、[BMIm]BF4溶液濃度、蘆丁粗提物加入量和溶液pH值影響。結果顯示,無機鹽(NH4)2S04加入量在1.5g,[BMIm]BF4離子液體表面活性劑加入量在1.5-2.0mL之間,蘆丁粗提物加入量在1.0-1.5mL之間,溶液在pH值控制在4-6范圍內，離子液體雙水相體系對蘆丁的萃取率大于90%。

羅亞東[25]用丙酮/ (NH4)2S04雙水相體系提取蘆丁。通過單因素實驗和三因素三水平正交實驗,確定其提純蘆丁最佳工藝條件為:濃度為28.57%(NH4)2S04水溶液lOmL，10mL的70%丙酮,pH=9,加入粗提物0.5g,混合后形成雙水相,體積比1.62,取上相減壓濃縮真空干燥得蘆丁的含量為95.918%。

3　小　結

槐米是蘆丁提取的常用材料，在其中提取蘆丁的方法多種多樣。其中由于蘆丁結構為黃酮苷類化合物，含有酸性，因此可以用堿提取酸沉淀法提取，此法簡單且耗時較短，其對試劑和儀器的要求不高，可為實驗室常用提取方法，但是酸性雜質也容易被提取出來，對分離造成一定的困難。微波輻射(MWI)用于植物細胞的破壁；而超聲提取法是利用超聲波輻射產生的強烈空化效應破壞植物細胞壁，可利用這兩種方法作為堿提取酸沉淀法的輔助方法，進行試驗比較，得出較優方法，這將對蘆丁的大規模生產優化有著借鑒意義。蘆丁的純化方法中，冷水洗滌法耗時短，方法簡單，可純化率不高，聚酰胺柱色譜純化法、葡聚糖凝膠柱純化法、高速逆流色譜分離純化法與樹脂純化法耗時長，成本高，但純化率均在98%上下，可達到很好的純化效果，雙水相純化法純度較色譜分離法偏低，但成本比各類色譜分離法低，可研究試驗以便用于大規模生產上。

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(責任編校：何俊華)

2016－03－21

永州市科技計劃項目（永科發〔2015〕10號）。

舒俊翔（1995－），男，湖南科技學院化學與生物工程院制藥工程系學生。

王崢，女，碩士，湖南科技學院化學與生物工程學院制藥工程系教師，研究方向為天然藥物活性成分開發。

Q94-3

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1673-2219（2016）05-0044-03