非高密度脂蛋白膽固醇對氧化應(yīng)激的影響及其與腦卒中的相關(guān)性研究

李美珠，李煒煊，梁指榮，邱志琦，林靜，朱嫦琳

(佛山市第一人民醫(yī)院檢驗科，廣東佛山528000)

非高密度脂蛋白膽固醇對氧化應(yīng)激的影響及其與腦卒中的相關(guān)性研究

李美珠，李煒煊，梁指榮，邱志琦，林靜，朱嫦琳

(佛山市第一人民醫(yī)院檢驗科，廣東佛山528000)

目的探討腦卒中患者血清非高密度脂蛋白膽固醇（non-HDL-C)對氧化應(yīng)激的影響及其與腦卒中發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法選取2013年8月至2014年7月在本院神經(jīng)科住院的腦卒中患者123例，其中缺血性腦卒中(IS)58例，出血性腦卒中(ICH)65例，選取同期健康體檢者50例作為對照組，分別測定其血清谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、總膽固醇(TCH)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和全血糖化血紅蛋白(HbA1c)，計算出non-HDL-C值，并進行相關(guān)性分析。結(jié)果123例腦卒中患者血清non-HDL-C、MDA和HbA1c水平明顯升高，而HDL-C水平和GSH-Px活性顯著降低，分別與健康對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。經(jīng)Pearson相關(guān)分析，腦卒中患者血清MDA濃度與non-HDL-C、HbA1c呈相關(guān)性，與GSH-Px無相關(guān)。結(jié)論非高密度脂蛋白膽固醇、氧化應(yīng)激指標(biāo)水平與腦卒中發(fā)生的危險性密切相關(guān)，它們的檢測可提示確切的腦卒中的發(fā)病過程，對臨床診斷治療和預(yù)防具有指導(dǎo)意義。

非高密度脂蛋白膽固醇；糖化血紅蛋白；丙二醛；谷胱甘肽過氧化物酶；氧化應(yīng)激

腦卒中包括缺血性腦卒中(Ischemic stroke，IS)和出血性腦卒中(Intracerebral hemorrhage，ICH)是臨床最常見腦血管疾病之一，氧化應(yīng)激是體內(nèi)氧化系統(tǒng)與抗氧化系統(tǒng)失衡從而加重組織損傷的過程，它可以造成DNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等的損害，并且在動脈粥樣硬化及心腦血管疾病的發(fā)病機制中起重要作用[1]。谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-Px)是內(nèi)源性清除系統(tǒng)的抗氧化劑，參與維持體內(nèi)氧化與抗氧化機制的平衡；丙二醛(Malondialdehyde，MDA)是重要的脂質(zhì)過氧化作用的生物標(biāo)志物；糖化血紅蛋白(HbA1c)是反映1～2個月內(nèi)血糖平均水平的良好指標(biāo)。非高密度脂蛋白膽固醇(Non-high density lipoprotein cholesterol，non-HDL-C)是指總膽固醇中減去HDL-C的剩余部分，它包括了所有致動脈粥樣硬化顆粒(包括VLDL、LDL-C和IDL-C)中膽固醇水平的指標(biāo)，能更全面地反映膽固醇的致動脈粥樣硬化作用。本研究旨在探討IS和ICH患者的血糖、血脂水平對體內(nèi)氧化應(yīng)激水平的影響，并探討其與腦卒中發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2013年8月至2014年7月在我院神經(jīng)科住院的腦卒中患者123例，分為IS組58例，包括腦栓塞和腦血栓形成，其中男性36例，女性22例，年齡48～65歲，平均(56.2±4.1)歲；ICH組65例，包括腦出血和蛛網(wǎng)膜下腔出血，其中男性40例，女性25例，年齡46～68歲，平均(55.8±3.8)歲。選取同期健康體檢者50例作為正常對照組，男性30例，女性20例，年齡45～66歲，平均(54.8±3.0)歲。三組受試者的年齡和性別構(gòu)成比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 腦卒中納入標(biāo)準(zhǔn)(1)初發(fā)或多發(fā)的IS；(2)初發(fā)或多發(fā)的ICH；(3)符合世界衛(wèi)生組織腦卒中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]；(4)病例診斷均經(jīng)電子計算機斷層掃描(Computed Tomography，CT)或磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging，MRI)CT/MRI證實；(5)排除嚴(yán)重心、肝、腎疾病患者。

1.3 標(biāo)本采集及處理腦卒中患者及正常對照者均在未接受任何藥物治療狀態(tài)下空腹12 h清晨使用普通干燥管2管、肝素抗凝管1管，肘靜脈采血各3 ml。采血后1 h內(nèi)肝素抗凝管血混勻后直接上機檢測糖化血紅蛋白(HbA1c)；普通干燥管血其中1管離心15 min分離血清，立即定量測定高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)及總膽固醇(TCH)；另一支普通干燥管靜脈血，室溫靜置1 h，在2℃～8℃下離心15 min，分離上清液，置于離心管密封，統(tǒng)一編號置-70℃保存(可保存半年以上)，用于MDA和GSH-Px測定，避免反復(fù)凍溶，檢測時再次離心。

1.4 測定方法采用競爭性抑制酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測MDA和GSH-Px，均使用加拿大ELIXIR公司提供的定量分析試劑盒；采用膽固醇氧化酶法檢測總膽固醇，直接一步法檢測高密度脂蛋白膽固醇，HDL-C、TCH兩個項目用SIEMENS公司提供的配套試劑盒，在全自動生化分析儀ADVIA2400上檢測，然后計算出non-HDL-C值；HbA1c采用高效液相色譜法(HPLC)在東曹(TOSOH)全自動糖化血紅蛋白分析儀(HLC-723 G8)上檢測，所有實驗方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書和SOP文件進行操作。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料進行正態(tài)分布檢驗，符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間兩兩比較采用兩獨立樣本t檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組受試者的各項指標(biāo)比較IS組、ICH組與對照組比較，腦卒中患者HDL-C濃度、GSH-Px活性顯著降低，MDA、HbA1c水平則明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，而TCH水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；與對照組比較，IS組中的血清non-HDL-C水平明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，而在ICH組中，血清non-HDL-C濃度也高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

2.2 IS組與ICH組各項指標(biāo)比較在腦卒中IS組與ICH組中，IS組患者血清GSH-Px、non-HDL-C水平比ICH組明顯升高(P＜0.01或P＜0.05)，而MDA、HDL-C和HbA1c水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05)，見表2。

表1 三組受試者的各項指標(biāo)比較(±s)

表1 三組受試者的各項指標(biāo)比較(±s)

注：與對照組比較，aP＜0.01，bP＜0.05。

組別對照組(n=50) IS組(n=58) ICH組(n=65) GSH-Px(ng/ml) 598.3±60.6 513.6±55.7a294.5±30.3aMDA(ng/ml) 2.48±0.66 5.34±1.14a7.67±1.70aTCH(mmol/L) 4.69±0.88 4.80±1.08 4.76±1.12 HDL-C(mmol/L) 1.28±0.26 0.95±0.12a1.08±0.38anon-HDL-C(mmol/L) 3.38±0.79 4.2±0.86a3.80±1.05bHbA1c(%) 4.88±0.89 5.4±0.83a7.80±1.78a

表2 IS組與ICH組各項指標(biāo)比較(±s)

表2 IS組與ICH組各項指標(biāo)比較(±s)

組別IS組(n=58) ICH組(n=65) t值P值GSH-Px(ng/ml) 513.6±55.7 294.5±30.3 27.5＜0.01 MDA(ng/ml) 5.34±1.14 7.67±1.70 8.2＜0.01 TCH(mmol/L) 4.8±1.08 4.76±1.12 0.20＞0.05 HDL-C(mmol/L) 0.95±0.12 1.08±0.38 2.49＜0.05 non-HDL-C(mmol/L) 4.2±0.86 3.80±1.05 2.3＜0.05 HbA1c(%) 5.4±0.83 7.8±1.78 9.4＜0.01

2.3 腦卒中患者各項指標(biāo)的相關(guān)性在腦卒中病組中，MDA濃度與non-HDL-C、HbA1c、GSH-Px、TCH濃度的相關(guān)系數(shù)r分別為0.41、0.5和0.11、0.17，按α=0.05檢驗水準(zhǔn)，可以認為腦卒中病組中MDA濃度與HbA1c、non-HDL-C具有正相關(guān)性，而與GSH-Px、TCH無相關(guān)性。

3 討論

氧化應(yīng)激(Oxidative stress)是指機體遭受各種有害刺激時機體或細胞內(nèi)自由基的產(chǎn)生和抗氧化防御之間嚴(yán)重失衡，活性氧(Reactive oxygen species，ROS)在機體或細胞內(nèi)蓄積并引起細胞氧化損傷的病理過程[3]。本研究結(jié)果，腦卒中患者GSH-Px活性顯著降低(P＜0.01)，而MDA水平則明顯升高(P＜0.01)，表明氧化應(yīng)激指標(biāo)與腦卒中的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，抗氧化系統(tǒng)能力降低和脂質(zhì)過氧化作用增強，對于腦卒中患者的氧化應(yīng)激損傷具有重要的作用；GSH-Px主要作用是還原脂質(zhì)過氧化物，減少氧自由基的產(chǎn)生；MDA是脂質(zhì)過氧化物的終產(chǎn)物，它可以使蛋白質(zhì)、核酸、脂類發(fā)生交聯(lián)，導(dǎo)致生物膜變性、細胞突變、衰老或死亡，從而反映出機體細胞損傷的程度。本文結(jié)果顯示，ICH組患者發(fā)生氧化應(yīng)激較IS組患者反應(yīng)增強，可能與病情嚴(yán)重程度有關(guān)。

腦卒中是臨床最常見腦血管疾病之一，包括IS和ICH，動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)往往是心、血管病變的病理改變基礎(chǔ)。一致公認AS是膽固醇、膽固醇酯在動脈血管內(nèi)中膜大量沉積的病理改變；血管中的脂質(zhì)沉積與血脂水平密切相關(guān)[4]。血脂中的LDL-C與冠狀動脈粥樣硬化的嚴(yán)重程度和心、腦血管事件相關(guān)性已得到公認[5]，但是臨床實踐也觀察到non-HDL-C作為評價和預(yù)測心、腦病危險性的指標(biāo)比LDL-C和apoB更全面反映膽固醇的致病作用、更有實用價值[6]。而計算non-HDL-C只要準(zhǔn)確測出TC與HDL-C，這兩者做到標(biāo)準(zhǔn)化也比較容易。本文結(jié)果顯示：在腦卒中組中non-HDL-C比正常組明顯升高(P＜0.01或P＜0.05)，表明發(fā)生腦卒中的危險性與血脂水平密切相關(guān)；同時也顯示IS組non-HDL-C水平顯著高于ICH組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。因此non-HDL-C可作為評價和預(yù)測缺血性腦卒中發(fā)生具有實用價值。

HbA1c是反映2～3個月內(nèi)血糖控制水平的良好指標(biāo)，也可作為血糖水平波動指標(biāo)[7]，本研究中腦卒中患者血HbA1c升高差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，而且在ICH組患者中HbA1c水平較高，可能血糖水平波動與氧化應(yīng)激和ICH病情發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。同時相關(guān)性分析顯示，腦卒中組血MDA濃度與HbA1c、non-HDL-C具有相關(guān)性，提示血脂代謝異常及血糖控制水平可能會導(dǎo)致氧化應(yīng)激反應(yīng)的產(chǎn)生，加重動脈粥樣硬化的損傷程度。應(yīng)密切關(guān)注腦卒中患者的血脂和血糖變化，從而減少動脈粥樣硬化和腦卒中發(fā)生的風(fēng)險。

[1]徐玉龍,管建國.氧化應(yīng)激及血糖水平與急性腦梗死發(fā)生的關(guān)系研究[J].實用心腦肺血管病雜志,2013,21(5):36.

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[3]王迪潯,金惠銘.氧化應(yīng)激與疾病·人體病理生理學(xué)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:29.

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Effect of serum non-high density lipoprotein cholesterol on oxidative stress and its correlation with cerebralstroke.

LI Mei-zhu,LI Wei-xuan,LIANG Zhi-rong,QIU Zhi-qi,LIN Jing,ZHU Chang-lin.Department of Clinical Laboratory,the First People's Hospital of Foshan,Foshan 528000,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo study the effect of serum non-high density lipoprotein cholesterol(non-HDL-C) level on oxidative stress,and to investigate its correlation with the occurrence and development of cerebral stroke. MethodsA total of 123 patients with cerebral stroke in the Department of Neurology in our hospital from Aug.2013 to Jul.2014 were enrolled in the study,including 58 patients with ischemic stroke(IS group)and 65 patients with intracerebral hemorrhage(ICH group).Fifty healthy persons were selected as the control group.The concentration of serum glutathione peroxidase(GSH-Px),malondialdehyde(MDA),total cholesterol(TCH),high density lipoprotein cholesterol (HDL-C),and glycosylated hemoglobin Alc(HbAlc)were detected.Then the non-HDL-C content was calculated,and correlation analysis was performed.ResultsThe non-HDL-C,MDA and HbA1c levels were significantly higher in IS group and ICH group than the control group,while the levels of HDL-C and GSH-Px were significantly lower than those in the control group,with statistically significant differences(P＜0.05 or P＜0.01).Pearson correlation analysis showed that MDA in patients with cerebral stroke was related to non-HDC-C and HbAlc,but not to GSH-Px.ConclusionThe levels of non-HDL-C and oxidative stress are closely related to the risk of cerebral stroke,which indicate the pathogenesis of cerebral stroke and have great significance to the prevention and treatment of the disease.

Non-high density lipoprotein cholesterol(non-HDL-C);Glycosylated hemoglobin;Malondialdehyde(MDA);Glutathione peroxidase(GSH-Px);Oxidative stress

R743.3

A

1003—6350（2016）01—0025—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.01.009

2015-08-08)

廣東省佛山市醫(yī)學(xué)類科技攻關(guān)項目(編號：201308111)

李煒煊。E-mail：Lwxuan@fsyyy.com