愛羅咳喘寧口服液對慢性阻塞性肺疾病大鼠血清白細胞介素-6和白細胞介素-8的影響

謝文英　張良芝　常學輝　尚立芝　胡文豪　李　亮　劉　坦　張　靜　李進京

(河南中醫學院，河南　鄭州　450008)

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愛羅咳喘寧口服液對慢性阻塞性肺疾病大鼠血清白細胞介素-6和白細胞介素-8的影響

謝文英張良芝常學輝1尚立芝胡文豪李亮劉坦張靜李進京

(河南中醫學院，河南鄭州450008)

〔摘要〕目的探討愛羅咳喘寧口服液對慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血清白細胞介素(IL)-6、IL-8的影響。方法雄性SD大鼠60只隨機分為正常組、模型組、西藥組、中藥大劑量組、中藥中劑量組、中藥小劑量組，每組10只。采用2 次氣管內注入脂多糖加煙熏造模后，給予對應處理后測定各組大鼠血清IL-6、IL-8的含量。結果模型組大鼠血清IL-6、IL-8顯著高于正常組，經用愛羅咳喘寧口服液治療后，血清IL-6、IL-8明顯下降，與模型組比較差異顯著。結論愛羅咳喘寧口服液治療COPD的作用機制可能與降低IL-6、IL-8水平有關。

〔關鍵詞〕慢性阻塞性肺疾病；愛羅咳喘寧口服液；白細胞介素-6；白細胞介素-8

1河南中醫學院第二臨床醫學院內科學科

第一作者：謝文英(1963-)，女，教授，碩士生導師，主要從事常見病癥的辨證規律研究及中醫防治研究。

慢性阻塞性肺疾病(COPD)居我國疾病負擔序列的第一位，造成巨大的社會和經濟負擔。對于COPD 防治研究已成為目前醫學界研究的熱點課題之一。現代醫學認為COPD 的發病機制復雜，涉及多種因素〔1，2〕。近年來，隨著對 COPD 氣道炎癥的深入研究，普遍認為激活的炎性細胞釋放多種介質，包括白細胞介素(IL)-6、IL-8等參與COPD的發作、加重和復發。本研究主要通過觀察愛羅咳喘寧口服液對COPD 大鼠模型血清IL-6、IL-8含量的影響，探討愛羅咳喘寧口服液治療COPD的可能作用機制。

1材料與方法

1.1實驗動物雄性SD大鼠60只，清潔級，體重(300±20)g，由河南省實驗動物中心提供。

1.2藥物與試劑愛羅咳喘寧口服液(由炙麻黃、苦杏仁、云苓、蒼術、半夏、葶藶子、干姜、麥芽、白術、山藥、黨參、芫花、赤芍等藥物按一定比例配制而成，由河南中醫學院第一附屬醫院制劑室提供)；止咳橘紅口服液，北京同仁堂生產。IL-6、IL-8試劑盒購自南京建成生物醫學研究所；脂多糖購自廣州齊云生物技術有限公司(由美國Sigma公司生產)。

1.3分組大鼠隨機分為6組：正常組、模型組、止咳橘紅口服液對照組(對照組)、愛羅咳喘寧大劑量組(中藥大劑量組)，愛羅咳喘寧中劑量組(中藥中劑量組)，愛羅咳喘寧小劑量組(中藥小劑量組)，每組10只。

1.4造模采用煙霧吸入+脂多糖灌肺復合因素建立COPD大鼠模型,參照文獻〔3，4〕法制作。在造模的第1天、第14天將大鼠以適量乙醚吸入麻醉后，暴露喉頭，以靜脈套管針替代氣管導管行氣管插管，向大鼠氣管內注入脂多糖 LPS 100 μl(200 μg/μl)，完畢后將大鼠直立旋轉10～20 s，使LPS均勻分布于肺部。第2～13天、第15 ～ 28天，每天在有機玻璃密閉箱(80 cm×60 cm×50 cm，上方有一直徑為1.2 cm 的通氣孔)持續吸入新鮮的香煙霧(南寧卷煙廠生產真龍牌香煙，焦油含量19 mg，尼古丁1.2 mg)30 min，20支/d，每天熏煙后立刻用低于環境溫度(20℃)5℃冷空氣刺激1 h，造模28 d結束。

1.5處理造模成功后正常組、模型組大鼠分別給予蒸餾水按10 ml·kg-1·d-1灌胃；愛羅咳喘寧大劑量組按20 ml·kg-1·d-1灌胃混懸液(每毫升含藥物3 g)；愛羅咳喘寧中劑量組按10 ml·kg-1·d1灌胃混懸液(每毫升含藥物1.5 g)；愛羅咳喘寧小劑量組按5 ml·kg-1·d=1灌胃混懸液(每毫升含藥物0.75 g)；對照組按10 ml·kg-1·d-1灌胃藥物混懸液(每毫升含藥物0.0375 g)。每天灌胃2次/d，6AM與6PM各給藥一次，連續7 d。

1.6指標測定灌胃結束24 h后斷頭處死動物，取血3 ml于4℃靜置30 min后，以3 000 r/min 離心15 min，取血清在-20℃ 凍存待檢測。IL-6，IL-8檢測均用ELISA法,在河南中醫學院實驗中心完成，均按照試劑盒說明書由專人操作。

1.7統計學處理采用SPSS18.0進行F檢驗及Q檢驗。

2結果

見表1。模型組大鼠血清IL-6，IL-8顯著高于正常組(均P<0.01)；中藥大、中、小組及對照組大鼠血清IL-6，IL-8值顯著低于模型組(均P<0.01)，中藥大劑量組血清IL-6，IL-8值與對照組比較無顯著性差異(P>0.05)，中藥大劑量組血清IL-6，IL-8值顯著低于中藥中、小劑量組(均P<0.01)。

表1　各組大鼠血清IL-6，IL-8水平比較

與正常組比較:1)P<0.01；與模型組比較:2)P<0.01；與中藥大劑量組比較：3)P<0.01

3討論

COPD病因病機概括為六淫之邪侵襲，衛表受邪，肺失宣肅而成，尤以六淫之寒邪為多，外感是其重要的誘發因素；其病機為本虛標實，本虛為肺脾腎虛，標實為痰飲、血瘀；反復發作致肺氣虛是本病遷延不愈的主要原因。COPD病機之關鍵涉及“氣虛”、“痰凝”、“血瘀”、“氣滯”，而又以“氣虛”為根本，病位涉及肺、脾、腎三臟，治則為宣肺降肺；益氣行氣；化痰祛瘀；健脾益腎。愛羅咳喘寧口服液為已故著名中醫謝暢懷治療慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺疾病的經驗方，全方由炙麻黃、苦杏仁、云苓、蒼術、半夏、葶藶子、干姜、麥芽、白術、山藥、黨參、芫花、赤芍等藥組成。方中炙麻黃宣肺平喘，杏仁祛痰止咳平喘，兩者同為君藥。臣以半夏燥濕化痰，葶藶子瀉肺降氣，祛痰平喘；干姜溫肺化飲；茯苓健脾化痰；芫花瀉水逐飲，祛痰止咳。佐以黨參健脾益肺，白術健脾益氣，山藥補脾、養肺、固腎，蒼術燥濕健脾,麥芽健脾和胃，赤芍活血祛瘀。全方可起健脾益腎，祛痰祛瘀，止咳平喘之效〔5~7〕。

近年來，細胞因子網絡和免疫功能紊亂與COPD關系的探討受到重視，細胞因子成員IL-6、IL-8在機體炎癥和免疫調節過程中發揮重要作用〔8~10〕。IL-6 是機體內細胞產生的一種具有多種生物學活性的刺激因子，是機體復雜的細胞因子網絡中的一個重要成員。IL-6在正常情況下調節免疫應答，在病理狀態下其濃度的升高可引起免疫性病理損傷。IL-8是第一個被發現的有化學趨向作用的細胞因子，由多種參與炎癥反應的細胞產生，如巨噬細胞、中性粒細胞、淋巴細胞和內皮細胞等，其作用于嗜中性粒細胞趨化游走功能，加強炎癥防護，促進T細胞趨化功能，加強免疫反應〔11,12〕。IL-8在慢性呼吸道炎癥中起著關鍵作用，它可以激活中性粒細胞外形的改變、溶酶體酶的釋放、超氧化物的產生和增加、黏附分子的表達。可見，以 IL-8為主要細胞因子導致的氣道炎癥已被認為是COPD 發病的重要機制之一〔13〕。

慢性支氣管炎大鼠模型血清IL-6，IL-8釋放增加，IL-6 又作用于血管內皮細胞，導致病理性損傷，促進疾病的發生與發展，與慢性阻塞性肺疾病炎癥的形成和發展具有重要影響。而愛羅咳喘寧口服液可通過抑制IL-6，IL-8的釋放而發揮其抗炎作用。愛羅咳喘寧口服液通過降低IL-6，IL-8含量，防止其對機體的進一步損害，控制炎癥反應，此可能是愛羅咳喘寧口服液治療COPD的作用機制之一。

4參考文獻

1洪秀琴，戴愛國，孔春初.等.湖南部分地區慢性阻塞性肺疾病流行現狀調查〔J〕.中國老年學雜志，2012；32(4)：795-7.

2張紹敏，孫麗，張俊麗.社區COPD流行病學調查及健康教育對策〔J〕.解放軍護理雜志，2007；24(11A)：20-2.

3Hasday JD，McCrea KA，Meltzer SS，etal.Dysregulation of airway cytokine expression in chronic obstructive pulmonary disease and asthma 〔J〕.Am J Respir Crit CareMed，1994；150：s54-8.

4朱慧志，韓明向，丁小娟，等.多因素慢性阻塞性肺疾病大鼠模型的建立〔J〕.中國臨床保健雜志，2005；8(2)：145-6.

5謝文英，張良芝，劉霖，等.愛羅咳喘寧口服液對慢性支氣管炎大鼠白細胞介素-13 和腫瘤壞死因子-α含量的影響〔J〕.中國新藥雜志，2012；21(5)：551-4.

6謝文英，常學輝，張良芝.愛羅咳喘寧湯治療咳嗽變異性哮喘30例〔J〕.中醫研究，2007；20(5)：35-8.

7謝文英，常學輝，張良芝.愛羅咳喘寧口服液對支氣管哮喘患者白細胞介素2及白細胞介素13的影響〔J〕.中醫雜志，2007；48(7)：614-5.

8雷國燕，雷章恒，鐘紅衛.中醫藥治療COPD對IL-8、TNF-α影響的研究〔J〕.遼寧中醫藥大學學報，2012；14(3)：78-81.

9黃波貞.補肺益陽化痰中藥對穩定期慢性阻塞性肺疾病患者痰液炎癥細胞 IL-10、IL-8 的影響〔J〕.中國中醫藥現代遠程教育，2010；8(22)：144-5.

10周兆山，胡海波，楊曉萍，等.固本顆粒膠囊對大鼠 COPD 模型血清 IL-8 及 TNF-α 影響的實驗研究〔J〕.現代生物醫學進展，2010；10(19)：3663-6.

11顏碧清，樓天正，徐俊龍，等.COPD患者急性發作期血清TNF-α、IL-6、IL-8變化及意義〔J〕.浙江中西醫結合雜志，2004；14(6)：343-4.

12李淑岷.COPD患者血清中IL-6、IL-8、TNF-α的變化及其與分期之間的關系〔J〕.中國民康醫學，2010；22(2)：95，107.

13黃修解，蒙定水，牛豫潔，等.雙三口服液對實驗 COPD 大鼠血清白細胞介素-8和腫瘤壞死因子-α的影響〔J〕.中國中醫基礎醫學雜志，2010；16(5)：381-3.

〔2014-12-09修回〕

(編輯曹夢園)

Effect of Ailuokechuanning oral liquid on serum IL-6 and IL-8 in rat with chronic obstructive pulmonary disease

XIE Wen-Ying，ZHANG Liang-Zhi，CHANG Xue-Hui,etal.

Department of Diagnostics of Traditional Chinese Medicine,Henan Traditional Chinese Medicine College，Zhengzhou 450008，Henan,China

【Abstract】ObjectiveTo study the effect of Ailuokechuanning oral liquid on interleukin(IL)-6 and IL-8 in experimental rats' serums with chronic obstructive pulmonary disease (COPD).Methods60 SD male rats were randomly divided into normal control，model，Ailuokechuanning oral liquid( 5，10，20 ml·kg-1·d-1)，Zhikejuhong syrup control groups.COPD models were established by pouring lipopolysacchride(LPS)into trachea and putting rats into smoking environment twice a day.Levels of IL-6 and IL-8 in serum of rats were measured.ResultsThe levels of IL-6,IL-8 in rats′ serum of the model group were significantly higher than those in normal control group.The levels of IL-6,IL-8 of the rats treated with Ailuokechuanning oral liquid significantly decreased.ConclusionsThe mechanism of Ailuokechuanning oral liquid for treatment of COPD may be related to the inhibition of IL-6 and IL-8．

【Key words】Chronic obstructive pulmonary disease;Ailuokechuanning oral liquid;Interleukin-6;Interleukin-8

基金項目：國家自然科學基金面上項目(No.81573881)；河南省高等學校重點科研項目(15A360030)；河南省中管局項目(2013ZY02070)；鄭州市科技領軍人才項目(121PLTJRC535)

〔中圖分類號〕R285.5

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)04-0786-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.04.007