乳腺癌組織中基質金屬蛋白酶-9的表達及臨床意義

米永華　劉北忠

(重慶醫科大學附屬永川醫院檢驗科，重慶　402160)

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乳腺癌組織中基質金屬蛋白酶-9的表達及臨床意義

米永華劉北忠

(重慶醫科大學附屬永川醫院檢驗科，重慶402160)

〔摘要〕目的探討基質金屬蛋白酶(MMP)-9表達水平與乳腺癌的臨床病理特征的相互關系。方法通過計算機檢索PubMed、Medline、BIOSIS previews、The Cochrane Library(2015年第1期)、CNKI、VIP、CBM、WANFAN等數據庫，通過手工檢索相關雜志，查找國內外公開發表的關于乳腺癌組織中MMP-9表達及其與臨床病理特征關系的相關文獻及對照研究，檢索時限均為從建庫至2015年2月。按照納入和排除標準篩選文獻，提取數據并評價質量，然后應用RevMan5.2軟件進行統計分析。結果最終納入15個研究，共1 673例受試者，其中乳腺癌患者1 445例，正常對照組228例。Meta分析結果顯示：①MMP-9在乳腺癌組和正常對照組〔OR=13.19,95%CI(8.06,21.59),P<0.000 01〕的表達差異有統計學意義。②MMP-9在乳腺癌中高分化組與中低分化組〔OR=0.36,95%CI(0.17,0.74),P=0.006〕、伴淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組〔OR=2.84,95%CI(1.61,5.04),P=0.000 3〕、臨床分期Ⅰ～Ⅱ期組與Ⅲ期組〔OR=0.37，95%CI(0.26,0.52)，P=0.000 1〕、腫瘤<2 cm與≥2 cm組〔OR=0.63，95%CI(0.40,0.99)，P=0.04〕的表達差異均有統計學意義。年齡<50歲與≥50歲組〔OR=0.88，95%CI(0.62,1.27)，P=0.50〕的表達差異無統計學意義。結論MMP-9可能參與了乳腺癌的發生、發展過程。

〔關鍵詞〕基質金屬蛋白酶-9；乳腺癌

第一作者：米永華(1981-)，女，主管技師，主要從事腫瘤診斷方法學研究。

乳腺癌生物學行為特點之一是在病變早期癌細胞即可通過血液循環或淋巴途徑發生隱匿性轉移。目前普遍認為乳腺癌的預后與病理分期、是否轉移、血管生成狀況及治療措施等密切相關〔1〕。基質金屬蛋白酶(MMPs)的作用底物是細胞外基質和基底膜中的纖維網架分子，其中MMP-9 可特異性地降解其中的Ⅳ型膠原。研究表明〔2〕，MMP-9 在多種惡性腫瘤中呈現過表達，因此被認為在惡性腫瘤的浸潤轉移中扮演著重要角色。對于MMP-9是否在乳腺癌組織中存在特異性的表達以及與乳腺癌患者的年齡、淋巴結轉移、腫瘤大小、臨床分期和組織學分級之間的關系研究報道不一，存在較大爭議。本研究擬運用Meta分析的方法系統評價MMP-9與乳腺癌的發生、發展和浸潤轉移的相關性。

1資料與方法

1.1納入與排除標準納入標準：國內外公開發表的關于用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接(S-P)免疫組化法檢測乳腺癌組織中MMP-9表達的文獻，語種僅限中、英文；所有研究對象為病理診斷明確的乳腺癌患者，病例均要求有完整臨床病理資料，全部病例均經病理證實，癌組織采用國際婦產科聯合會(FIGO)分級標準進行病理分級和手術分期，取材前均未經放療或化療；對照組為癌旁正常組織或良性疾病旁正常組織。原始數據均能夠提供陽性表達的例數或陽性率。

排除標準：MMP-9檢測方法為S-P免疫組化法以外方法以及陽性判斷標準不一致者；術前進行放療或者化療；研究對象非人類；綜述、評論、會議摘要及個案報道類文章；重復報告或資料雷同、質量較差等無法利用的文獻。

1.2文獻檢索計算機檢索PubMed、Medline、BIOSIS previews、The Cochrane Library(2015年第1期)、CNKI、VIP、CBM、WANFAN等數據庫，并通過手工檢索相關雜志，檢索時限均為從建庫至2015年2月，并輔以google學術搜索的方法，收集國內外公開發表的關于MMP-9表達與乳腺癌及其臨床病理特征關系-對照研究。中文檢索詞包括基質金屬蛋白酶-9、Ⅳ型膠原酶、乳腺癌、乳腺浸潤性導管癌，英文檢索詞包括Matrix metalloproteinases-9、MMP-9、collagenase type Ⅳ、Breast cancer、Invasive ductal carcinoma，具體參考Cochrane協作網工作手冊制定文獻檢索策略。

1.3文獻篩選與資料提取由兩名評價者獨立進行，按照先前制定的納入排除標準選擇文獻、提取資料并交叉核對，如遇分歧，經過討論或向相關專家咨詢進行解決。提取內容：文題、作者姓名、發表年限、原始文獻出處、納入病例的一般情況、MMP-9在乳腺癌組及對照組表達情況、乳腺癌患者年齡及其臨床分期、組織分化程度、淋巴結轉移、腫瘤大小等。

1.4質量評價由兩名評價者獨立對納入研究進行評價，如遇分歧通過討論解決或由第三方裁決。評價標準按Cochrane協作網推薦的紐卡斯爾-渥太華量(NOS)評價標準〔3〕，該評分標準采用星級系統原則，包括3個部分：研究對象選擇4個條目(4分)，組間可比性2個條目(2分)，危險因素暴露情況3個條目(3分)。

1.5統計學方法應用Cochrane協作網提供的RevMan 5.2軟件進行分析，結果以OR值和95%可信區間(CI)表示。首先采用χ2檢驗對各納入研究結果進行異質性檢驗,檢驗水準為α=0.1。若P≥0.1且I2≤50%，提示各研究間不存在異質性，采用固定效應模型進行Meta分析；若P<0.1且I2<50%，提示各研究結果間存在異質性，但在可接受范圍內，采用固定效應模型進行Meta分析；P<0.1且I2>50%,提示各研究間異質性較大，采用隨機效應模型進行Meta分析。Meta分析的檢驗水準為α=0.05，結果采用森林圖呈現，并采用漏斗圖估計發表偏倚的存在。

2結果

2.1文獻檢索結果最終納入文獻15篇，其中中文11篇，英文4篇，分別完成于中國、美國、土耳其、芬蘭等國家。見圖1。

圖1　文獻篩選及流程圖

2.2納入文獻基本特征及質量評價最終納入的15篇文獻共1 673例受試者，包括乳腺癌患者1 445例，正常對照組228例，參照NOS〔3〕的評價指南對上述研究進行評分，納入文獻的基本情況及評分見表1。數據說明：納入Meta 分析的文獻中所涉及的年齡、病理分級、臨床分期、淋巴結轉移、腫瘤大小等臨床病理特征不完全一致。

表1　納入研究基本特征及NOS質量評分

“-”表示缺乏數據；1)Ⅰ+Ⅱ/Ⅲ；2)G1/G2+G3

2.3Meta分析結果

2.3.1乳腺癌組與正常對照組MMP-9的表達共7個研究〔1,5,6,8~10,15〕報道了乳腺癌組與正常對照組MMP-9表達情況，其中乳腺癌組584例，正常對照組228例。各研究間無統計學異質性(P=0.43，I2=0%)，故采用固定效應模型。Meta分析結果顯示，兩組間MMP-2表達有統計學差異〔OR=13.19,95%CI(8.06,21.59),P<0.000 01〕。見圖2。

圖2　乳腺癌組與正常對照組MMP-9表達的Meta分析

2.3.2乳腺癌不同臨床分期MMP-9的表達共有11個研究〔1,5~8,10~12,14,15,19〕報道了乳腺癌癌FIGO臨床分期與MMP-9表達的關系，其中臨床Ⅰ～Ⅱ期患者689例，Ⅲ～Ⅳ期患者319例。各研究間無統計學異質性(P=0.12，I2=35%)，故采用固定效應模型進行Meta分析。MMP-9在乳腺癌Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ期的表達有統計學差異〔OR=0.37，95%CI(0.22,0.61),P=0.000 1〕。見圖3。

圖3　乳腺癌Ⅰ～Ⅱ期與Ⅲ期MMP-9表達的Meta分析

2.3.3乳腺癌高中低分化組MMP-9的表達共12個研究〔1,4,6~9,11，12，14~16,19〕報道了乳腺癌組織不同分化程度中MMP-9的表達，其中高分化患者290例，中低分化患者748例。各研究間有統計學異質性(P<0.000 01，I2=76%)，故采用隨機效應模型進行Meta分析。分析結果顯示，乳腺癌中低分化組的MMP-9表達高于高分化組的表達〔OR=0.36,95%CI(0.17,0.74),P=0.006〕。見圖4。

圖4　乳腺癌高分化組與中低分化組MMP-9表達的Meta分析

2.3.4乳腺癌淋巴結有無轉移與MMP-9的表達共有15個研究〔1,4~17〕報道了乳腺癌伴淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組MMP-9的表達情況，其中淋巴結轉移患者695例，淋巴結未轉移患者329例。各研究間有統計學差異(P<0.000 01，I2=77%)，故采用隨機效應模型進行Meta分析。結果顯示，乳腺癌伴淋巴結轉移患者MMP-9表達高于無淋巴結轉移患者，其差異有統計學意義〔OR=2.84,95%CI(1.61,5.04),P=0.000 3〕。見圖5。

圖5　乳腺癌伴淋巴結轉移與不伴淋巴結轉移MMP-9表達的Meta分析

2.3.5乳腺癌腫瘤大小與MMP-9表達的關系共12個研究〔5~16〕報道了乳腺癌組織<2 cm與≥2 cm中MMP-9的表達，其中<2 cm患者354例,≥2 cm患者820例。各研究間有統計學異質性(P=0.008，I2=57%)，故采用隨機效應模型進行Meta分析。分析結果顯示，腫瘤腫塊≥2 cm者MMP-9 表達高于<2 cm組〔OR=0.63,95%CI(0.40,0.99),P=0.04〕。見圖6。

圖6　乳腺癌腫瘤<2 cm與≥2 cm者MMP-9表達的Meta分析

2.3.6乳腺癌患者不同年齡組的MMP-9表達共7個研究〔1,4,6~8,12,14〕報道了乳腺癌患者中<50歲患者330例，≥50歲患者280例。各研究間無統計學異質性(P=0.83，I2=0%)，故采用固定效應模型進行Meta分析。結果顯示，乳腺癌<50歲患者與≥50歲患者MMP-9表達無統計學差異〔OR=0.88,95%CI(0.62,1.27),P=0.50〕。見圖7。

圖7　乳腺癌患者<50歲與≥50歲MMP-9表達的Meta分析

2.4發表偏倚分析針對MMP-9在乳腺癌腫塊<2 cm與≥2 cm組中MMP-9表達的12篇文獻運用RevMan 5.2軟件進行漏斗圖分析。漏斗圖未見明顯不對稱，提示發表偏倚可能性較小。見圖8。

圖8　乳腺癌腫塊<2 cm與≥2 cm組MMP-9表達的漏斗圖分析

3討論

腫瘤的侵襲和轉移是一個復雜的過程，但其先決條件是細胞外基質的降解。細胞外基質由Ⅳ型膠原、層黏連蛋白、纖維黏連蛋白等組成。國外研究發現,MMPs在腫瘤發生、發展過程中常過度表達,與腫瘤進展和浸潤轉移存在相關性〔18〕。MMP-9 是基質金屬蛋白酶家族中的Ⅳ型膠原酶,能特異性降解基底膜上的重要成分Ⅳ型膠原,在腫瘤的浸潤轉移中有重要作用〔19〕。MMP-9是MMPs的主要成員之一，是其家族中分子量最大的酶類(92 kD)，其基因位于染色體20q11.1~13.1，26~27 kbp，具有13個外顯子和9個內含子，相對分子量為72 kD，主要在癌上皮細胞表達,表達水平的增高常伴隨著腫瘤包膜的侵犯。有報道MMP-9 表達水平增高可使癌細胞轉移能力增加,而將MMP-9 表達水平下調可抑制腫瘤轉移〔20〕。

乳腺癌的復發與轉移是影響患者預后的重要因素之一，癌細胞對基底膜的破壞是其向鄰近的結締組織浸潤和向遠處器官轉移的最基本步驟。MMP-9表達與乳腺癌及其臨床病理特征間存在相關性,MMP-9能否成為卵巢癌診斷和評估預后的有效指標已成為目前研究的熱點。但是有關MMP-9表達與乳腺癌臨床病理特征關系的國內外研究結果尚有分歧。田亮等〔1〕及范松青等〔5〕認為MMP-9的表達與腫瘤大小、是否淋巴結轉移、臨床分期、組織學分級均有相關性。但馮悅年〔4〕研究認為MMP-9表達在淋巴結是否轉移中無明顯區別，與臨床分期、組織學分級呈正相關。葛鳳霞等〔21〕認為MMP-9的表達與患者年齡及腫瘤大小及淋巴結轉移均無關。李洪濤等〔22〕則認為MMP-9 的表達與組織學分級有關，與腫瘤大小、臨床TNM 分期、淋巴結轉移狀態密切相關。鑒于國內外對于MMP-9在乳腺癌中表達的不同認識，本研究綜合國內外相關文獻進行meta分析，結果提示MMP-9表達水平增加，會增加罹患乳腺癌的風險。同時，MMP-9的表達與乳腺癌臨床病例特征密切相關，在乳腺癌臨床Ⅲ期表達明顯高于臨床Ⅰ~Ⅱ期。MMP-9表達也與子宮內膜癌分化程度、有無淋巴結轉移及腫瘤大小密切相關，提示MMP-9在乳腺癌的發生、細胞分化、淋巴結轉移及腫塊的生長中具有促進作用。另外，MMP-9與乳腺膜癌患者的年齡無明顯相關性，與Zhao等〔15〕報道的結果一致。

本研究檢索了國內外主要的數據庫，制定了較完善的檢索策略，但也存在著一些局限性：(1)納入的研究均為公開發表，缺少灰色文獻(如未公開發表的會議記錄、資料、政府研究報告等非傳統文獻來源的證據)，可能會漏掉陰性結果的研究，從而引起發表偏倚；(2)納入的文獻大部分為國內研究，國外研究相對較少，另外，語種限定為中、英文，未對其他語言的研究進行分析研究；(3)僅對單因素進行了研究，未對其他乳腺癌因素進行分析研究；(4)納入研究質量評分普遍中等，不排除納入研究可能掩蓋其設計中可能存在的缺陷，導致未知的偏倚。因此，在應用循證醫學研究證據時，使用者須謹慎可能存在各種偏倚。

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〔2015-07-16修回〕

(編輯袁左鳴)

Expression and clinical significance of matrix metalloproteinases-9 in breast cancer tissue:a meta-analysis

MI Yong-Hua,LIU Bei-Zhong.

Clinical Laboratory Yongchuan Hospital,Chongqing Medical University,Chongqing 402160,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression and clinicopathological significance of matrix metalloproteinases(MMP)-9 in breast cancer tissue.MethodsDatabases including PubMed,Medline,BIOSIS previews,Cochrane Library(Issue 1,2015),CNKI,VIP,CBM and WANFAN were electronically searched for retrieving relevant studies on MMP-9 and breast cancer tissue and its clinical pathologic features,published in foreign and domestic areas from inception to february 2015.ResultsTotally 1 673 cases of 15 studies were selected，including 1 445 breast cancer tissue cases and 228 normal controls.There were significant differences in positive rate of MMP-9 expression between breast cancer tissue and normal controls〔OR=13.19,95%CI(8.06,21.59),P<0.000 01〕.Significant differences were also found between high and moderate/low differentiated tissues〔OR=0.36,95%CI(0.17,0.74),P=0.006〕,breast cancer tissue with lymph node metastasis and that without lymph node metastasis〔OR=2.84,95%CI(1.61,5.04),P=0.0003〗,breast cancer tissue with clinical stagesⅠ～Ⅱand Ⅲ〔OR=0.37，95%CI(0.26,0.52)，P=0.000 1〕,the tumor <2 cm and ≥2 cm groups〔OR=0.63，95%CI(0.40,0.99),P=0.04〕.ConclusionsMMP-9 might participate in the occurrence and development process of breast cancer.

【Key words】Matrix metalloproteinases-9；Breast cancer

通訊作者：劉北忠(1970-)，男，教授，碩士生導師，主要從事腫瘤診斷方法學研究。

基金項目：國家高技術研究發展計劃(863計劃)基金資助(2011AA02A111)

〔中圖分類號〕R737.9

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)04-0780-05；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.04.005