FQ-PCR與RT-PCR檢測丙肝患者HCV RNA的敏感性及特異性比較

宋予娟

FQ-PCR與RT-PCR檢測丙肝患者HCV RNA的敏感性及特異性比較

宋予娟

目的比較熒光定量聚合酶鏈反應(FQ-PCR)與逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測丙型肝炎(丙肝)患者丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)的敏感性及特異性。方法67例丙肝患者和同期50例肝正常人, 均行FQ-PCR和RT-PCR檢測HCV RNA。觀察兩種檢測的敏感性和特異性。結果丙肝患者FQ-PCR檢測HCV RNA陽性率為64.18%, 較RT-PCR的46.27%明顯較高, 差異具有統計學意義(P＜0.05)；肝正常人HCV RNA檢測中RT-PCR檢測有3例陽性, FQ-PCR存在一定的漏診可能。結論FQ-PCR檢測丙肝患者HCV RNA敏感性和特異性均較高, 但極少數FQ-PCR檢測為陰性不排除HCV RNA為陽性的可能, 臨床診斷中可參考兩種檢測結果, 盡量避免漏診和誤診。

丙型肝炎；熒光定量聚合酶鏈反應；逆轉錄-聚合酶鏈反應；丙型肝炎病毒核糖核酸

丙型病毒性肝炎(HC)主要由HCV引起, 患者臨床多表現發熱、消化道癥狀及肝功能異常, 嚴重時易發展為肝硬化、肝癌［1］。醫學上診斷HCV感染主要是檢測血清HCV RNA且檢測方法較多［2］。本次研究選取本院2013年2月～2014年5月收治的67例丙肝患者和同期50例肝正常人分別行FQ-PCR和RT-PCR檢測, 旨在比較FQ-PCR與RT-PCR檢測丙肝患者HCV RNA的敏感性及特異性。現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2013年2月～2014年5月收治的67例丙肝患者和同期50例肝正常人。丙肝患者中男45例,女22例, 年齡24～76歲, 平均年齡(45.2±10.7)歲；肝正常人中男38例, 女12例, 年齡22～71歲, 平均年齡(41.5±10.6)歲。

1.2方法 67例丙肝患者和50例肝正常人均行FQ-PCR和RT-PCR檢測HCV RNA。①FQ-PCR檢測：取空腹靜脈血4 ml, 分離血清后低溫保存, 采用HCV RNA提取液提取HCV RNA后逆轉錄、不對稱擴增、信號擴增, 采用熒光免疫分量分析儀(江蘇南京基蛋生物科技股份有限公司, 型號Getein1100)檢測擴增后產物, 設置陰性、陽性及強陽性對照,以＜1.2×102copies/ml為陰性界線。②RT-PCR檢測：提取HCV RNA后核酸擴增、逆轉錄, 經2次PCR反應, 取10 μl PCR反應物在酶標儀紫外線燈下檢測, 根據OD值判定陽性、陰性, OD≤0.3判定為陰性, ＞0.3判定為陽性。

1.3統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件對數據進行統計分析。計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

丙肝患者FQ-PCR檢測HCV RNA陽性率較RT-PCR檢測顯著較高, 差異具有統計學意義(P＜0.05)；RT-PCR檢測肝正常人HCV RNA出現3例陽性, 而FQ-PCR檢測0例陽性, FQ-PCR存在一定的漏診可能。見表1。

表1 FQ-PCR和RT-PCR檢測HCV RNA結果比較(n, %)

3 討論

HCV感染是各種慢性肝病、肝硬化以及肝癌的常見病因,其中丙型病毒性肝炎較為典型［3］。據統計近年來因HCV感染造成的發病和死亡人數均呈上升趨勢, 我國丙型病毒性肝炎感染率高達3.2%, 因此加強病毒HCV RNA早期篩查檢測對盡早確定病情、指導治療尤為重要［4］。隨著醫學技術的進步和研究的不斷深入, HCV RNA檢測技術得到重大進展, 在傳統定性RT-PCR基礎上出現了多種定量檢測方法并廣泛用于臨床中, 其中以熒光定量FQ-PCR較為常見［5］。本院本次研究通過選取丙肝患者和肝正常人分別行兩種檢測, 進一步研究FQ-PCR與RT-PCR檢測丙肝患者HCV RNA的敏感性及特異性。

醫學臨床證實, 傳統RT-PCR檢測較為繁瑣, 易出現檢驗樣本交叉污染、靈敏度較低等弊端, 且PCR產物必須經電泳或雜交檢測, 僅能做定性分析；熒光定量FQ-PCR是在逆轉錄后的非對稱PCR產物中添加熒光基團, 利用熒光信號實時監測整個PCR進程, 能準確定量待檢模板的拷貝數, 最大程度降低PCR產物交叉感染而引起的假陽性, 在早期監測中應用較為普遍［6］。本次研究結果顯示, 67例丙肝患者行HCV RNA檢測, FQ-PCR陽性檢出率為64.18%, 而RTPCR檢測陽性率僅為46.27%, 可知FQ-PCR檢測HCV RNA的敏感性相較RT-PCR檢測明顯較高, 差異具有統計學意義(P＜0.05), 說明FQ-PCR檢測具有減少PCR產物污染、準確定量進而提高檢出水平的優點, 這和丁雪蓮［7］的研究結果基本吻合；50例肝正常人HCV RNA檢測中兩種檢測的特異性均較高, FQ-PCR檢測均為陰性, 但RT-PCR檢測結果中出現了3例顯示為陽性, 本研究分析認為這可能和定性PCR循環檢測的范圍存在不足有關導致假陽性出現, 也有研究［8］認為FQ-PCR檢測為陰性時不能排除該患者病毒血癥水平低于檢測極限的可能性, 檢測結果與病毒感染的潛伏和活躍期有關, 因此臨床檢測中可多次檢測, 盡量避免漏診、誤診。

綜上所述, FQ-PCR檢測丙肝患者HCV RNA具有較高的敏感性和特異性, 臨床檢測中結合RT-PCR檢測結果對避免漏診誤診具有較大臨床價值。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.03.014

2015-09-28］

453000 新鄉市第一人民醫院檢驗科