(1-3)-β-D葡聚糖聯(lián)合半乳甘露聚糖抗原檢測在侵襲性真菌感染中的應用價值

馮　潛，李　穎，顧　兵，張　穎

(徐州醫(yī)學院附屬醫(yī)院檢驗科，江蘇徐州 221000)

?

·論著·

(1-3)-β-D葡聚糖聯(lián)合半乳甘露聚糖抗原檢測在侵襲性真菌感染中的應用價值

馮潛，李穎△，顧兵，張穎

(徐州醫(yī)學院附屬醫(yī)院檢驗科，江蘇徐州 221000)

摘要:目的探討(1-3)-β-D葡聚糖(G試驗)和半乳甘露聚糖抗原(GM試驗)檢測在侵襲性真菌感染(IFI)中的應用價值。方法收集該院住院高危IFI患者126例，分別檢測患者血清(1-3)-β-D葡聚糖和半乳甘露聚糖水平，計算G試驗、GM試驗及聯(lián)合檢測的敏感度、特異度、陽性預測值(PPV)、陰性預測值(NPV)、假陽性率、假陰性率。結(jié)果G試驗的敏感度(83.0%)高于GM試驗(77.4%)，而特異度(74.2%)低于GM試驗(89.4%)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。聯(lián)合檢測敏感度、特異度、PPV及NPV分別為92.5%、95.5%、92.1%、92.0%，其敏感度和特異度均高于G試驗、GM試驗單獨檢測，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論G試驗和GM試驗聯(lián)合檢測，能提高診斷準確性，更有效地用于侵襲性真菌感染的早期診斷。

關(guān)鍵詞:侵襲性真菌感染；(1-3)-β-D葡聚糖；半乳甘露聚糖

侵襲性真菌感染是以侵襲深部組織和內(nèi)部以及全身為主的真菌感染，因其臨床表現(xiàn)常無特異性，故其誤診率、漏診率較高。近年來開展的(1-3)-β-D葡聚糖(BG)和半乳甘露聚糖抗原(GM)的檢測已在臨床廣泛應用，成為目前診斷侵襲性真菌感染的首選方法[1]。本研究分別通過檢測患者血清中的G抗原和GM抗原，探討其在侵襲性真菌感染中的應用價值。

1資料與方法

1.1一般資料選取2014年10月至2015年3月在本院呼吸科、重癥醫(yī)學科及血液科住院的患者126例，其中男72例，女54例，年齡39～90歲，平均年齡54歲。按歐洲癌癥治療組織/侵襲性真菌感染協(xié)作組(EORTC)及我國真菌診斷的標準[2-3]分為確診組11例、臨床診斷組42例、擬診組7例和非真菌感染組66例。

1.2儀器與試劑

1.2.1儀器MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)，流水線式全自動酶聯(lián)免疫工作站(ADC ELISA 180)，T02智能恒溫儀，高速離心機，振蕩器。

1.2.2試劑真菌BG檢測采用GKT-5M動態(tài)真菌檢測試劑盒(光度法)，購于北京金山川科技發(fā)展有限公司，批號：GKT232；GM檢測試劑盒，購于法國Platelia Aspergillus，Bio-Rad公司，批號：4G0028。

1.3方法

1.3.1標本收集與處理用一次性無菌無熱源真空采血管采取靜脈血4 mL，3 000 r/min離心10～15 min，分離血清，2 h內(nèi)檢測。

1.3.2G 試驗嚴格按照儀器和試劑說明書進行操作。結(jié)果解釋：60 pg/mL以下，無深部真菌感染(隱球菌、接合菌除外)；60～100 pg/mL為觀察期，應連續(xù)檢測；100 pg/mL以上，懷疑為深部真菌感染。

1.3.3GM試驗嚴格按照試劑盒說明書進行操作。試驗原理采用酶聯(lián)免疫一步夾心法，根據(jù)換算公式Index=標本OD值/臨界值對照OD值均值，將標本OD值換算為系數(shù)I值，I<0.05被認為是GM抗原陰性；I≥0.50被認為是GM抗原陽性。

1.4統(tǒng)計學處理以臨床確診IFI為真陽性，以非IFI為真陰性，做四格表分析評價G試驗和GM 試驗與聯(lián)合診斷的價值。采用SPSS17.0 軟件進行統(tǒng)計學處理，兩組間計量資料比較用χ2檢驗,以P<0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。計算單項試驗和聯(lián)合試驗的敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值、假陽性率和假陰性率。

2結(jié)果

2.1G試驗檢測結(jié)果分析126例患者中G試驗陽性61例，陰性65例，陽性率為48.4%，見表1。以臨床確診IFI為真陽性53例，排除IFI診斷為真陰性66例，行四格表分析。G試驗敏感度、特異度、PPV、NPV、假陽性率及假陰性率分別為83.0%、74.2%、72.1%、84.5%、25.8%、17.0%，見表2。

2.2GM試驗檢測結(jié)果分析126例患者中GM試驗陽性48例，陰性78例，陽性率為38.1%，見表1。GM試驗敏感度、特異度、PPV、NPV、假陽性率及假陰性率分別為77.4%、89.4%、85.4%、83.1%、10.6%、22.6%，見表2。G試驗的敏感度高于GM試驗，而特異度低于GM試驗，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.3G試驗與GM試驗聯(lián)合檢測結(jié)果分析G試驗與GM試驗并聯(lián)檢測的敏感度為92.5%，高于G試驗(83.0%)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；串聯(lián)檢測特異度為95.5%，高于GM試驗(89.4%)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，詳見表3。

表1　　G試驗與GM試驗結(jié)果

表2　　G試驗與GM試驗敏感度、特異度、PPV、NPV假陽性率、假陰性率比較

-：無數(shù)據(jù)。

表3　　G試驗與GM試驗聯(lián)合檢測結(jié)果

-：無數(shù)據(jù)。

3討論

侵襲性真菌感染的發(fā)生率和病死率呈逐年上升趨勢，作為“金標準”的病原微生物培養(yǎng)，因其耗時長、敏感度低的缺點，給臨床診斷帶來一定的局限性。而BG和GM抗原檢測憑借其耗時短、敏感度和特異度較高等優(yōu)點在臨床上得到廣泛推廣。

真菌中除外接合菌和隱球菌，其細胞壁成分中有50%以上都是BG[4]，真菌經(jīng)人體吞噬細胞吞噬消化后，能夠持續(xù)釋放高含量的BG，后者可特異性激活鱟變形細胞裂解物中的G因子，最終形成凝固蛋白，故名G試驗。GM是一種特異性熱穩(wěn)定多糖成分，廣泛存在于曲霉菌細胞壁上，它是曲霉菌菌絲最早釋放的抗原。GM試驗的優(yōu)勢在于GM釋放量與菌量呈正比，可以反映其感染程度；且由于曲霉菌定植時釋放入血量極少，有助于侵襲與定植的鑒別。臨床上常多次連續(xù)檢測G試驗和GM試驗，作為治療療效監(jiān)測的指標。

本研究結(jié)果顯示，G試驗檢測結(jié)果與臨床最終診斷結(jié)果的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，而GM試驗檢測結(jié)果與臨床最終診斷結(jié)果的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，此結(jié)果與國內(nèi)有關(guān)研究結(jié)果基本一致[5]。G試驗的敏感度(83.0%)高于GM試驗(77.4%)，GM試驗的特異度(89.4%)高于G試驗(74.2%)，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，表明G試驗雖能提示深部真菌感染的存在，卻無法鑒定具體種屬；GM試驗雖特異度較高，但因其敏感度不高往往造成一定程度的漏診。因此，G試驗只可作為篩查侵襲性真菌感染的第一步。國內(nèi)外對GM試驗的Meta分析表明，其在造血干細胞移植及血液系統(tǒng)腫瘤患者中的敏感度為70%～82%，特異度為82%～92%[6]，與本實驗研究結(jié)果(敏感度77.4%、特異度89.4%)基本一致。

本實驗中G試驗和GM試驗單獨檢測的假陽性率和假陰性率都較高，均超過10%。造成G試驗假陽性的因素常見于使用含葡聚糖的靜脈制劑、紗布等醫(yī)療物品；服用多糖類抗腫瘤類藥物及多黏菌素、磺胺類藥物等。此外，鏈球菌敗血癥患者、標本脂血、黃疸及污染時也可出現(xiàn)假陽性。而某些抗真菌藥物的使用、局灶性曲霉菌病等亦可導致G試驗假陰性。GM試驗假陽性常見于某些半合成青霉素，如哌拉西林的使用、食用可能含GM的牛奶等高蛋白食物及污染的大米[7-8]、自身免疫性肝炎、非粒細胞缺乏癥及新生兒和兒童。另外，當釋放入血的GM并不持續(xù)存在而被很快清除時可導致假陰性。

本研究結(jié)果顯示，單獨檢測G試驗和GM試驗的敏感度和特異度并不高，而聯(lián)合檢測則在一定程度上彌補了各自不足，提高了整個試驗的敏感度和特異度，降低了假陽性率或假陰性率。本實驗中，并聯(lián)檢測對IFI敏感度可達92.5%，串聯(lián)檢測特異度可達95.5%，其敏感度和特異度均高于G試驗和GM試驗的單獨檢測，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。串聯(lián)檢測的PPV為92.1%，即當試驗結(jié)果均為陽性時，提示患者合并IFI的可能性非常高，需結(jié)合臨床盡早進行經(jīng)驗性抗真菌治療；而聯(lián)合檢測的NPV為92.0%，即當試驗結(jié)果均為陰性時，提示患者合并IFI的可能性并不高，結(jié)合臨床并連續(xù)動態(tài)觀察G試驗和GM試驗，有助于排除IFI的診斷，降低漏診率和誤診率。

綜上所述，G試驗和GM試驗聯(lián)合檢測診斷侵襲性真菌感染，可以提高試驗結(jié)果的敏感度和特異度，降低假陽性率和假陰性率，為臨床及時準確地抗真菌治療提供有效的數(shù)據(jù)支撐，提高患者生存率和治愈率。

參考文獻

[1]Yoshida M,Rorh RI,Grunfeld C,et al.Soluble (1,3)-B-D glucans purified from Candida albicans：biologic effects and distribution in blood and organs in rabbits[J].J Lab Clin Med,1996,128(1):103-114．

[2]中華內(nèi)科雜志編輯委員會．血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌感染的診斷標準與治療原則[J]．中華內(nèi)科雜志，2007，46(7)：607-610．

[3]邱海波，劉大為．2004年嚴重感染和感染性休克治療指南概要[J]．中國危重病急救醫(yī)學，2004，16(3)：390-393．

[4]Marty FM,Koo S.Role of 1,3-β-Dglucan in the diagnosis of invasive aspergillosis[J].Med Myol,2009,47(1):233-240．

[5]何成祿，何增品，徐從瓊，等．血漿(1，3)-β-D葡聚糖和血清半乳甘露聚糖檢測對重癥患者侵襲性真菌感染的早期診斷價值[J]．現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2013，28(1)：54-56．

[6]Pfeiffer CD,Fine JP,Safdar N.Diagnosis of invasive aspergillosis using a galactomannan assay:a meta-analysis[J].Clin Infect Dis,2006,42(10):1417-1427．

[7]Niimi K,Shepherd MG,Cannon RD.Distinguishing Candida species by beta-N-acetylhexosaminidase activity[J].J Clin Microbiol,2001,39(20):2089-2097.

[8]Aubry A,Porcher R,Bottero J,et al.Occurrence and kinetics of false-positive Aspergillus galactomannan test results following treatment with beta-lactam antibiotics in patients with hematological disorders[J].J Clin Microbiol,2006,44(2):389-394．

Application value of detection of (1-3)-β-D glucan combined with

galactomannan antigen in invasive fungal infections

FengQian,LiYing△,GuBing,ZhangYing

(DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedHospitalofXuzhouMedicalCollege,Xuzhou,Jiangsu221000,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the application value of detecting serum (1-3)-β-D glucan(G test) and galactomannan antigen(GM test) in invasive fungal infections(IFI).MethodsA total of 126 patients with risk factors for IFI in our hospital were collected.The level of serum (1-3)-β-D glucan and galactomannan of all patients were detected.The sensitivity,specificity,positive predictive value (PPV),negative predictive value (NPV),fasle positive rate and false negative rate of G test,GM test and joint detection were calculated.ResultsThe sensitivity of G test was higher than that of GM test(83.0% vs.77.4%) and the specificity was lower than that of GM test(74.2% vs.89.4%),the differences were statistically significant(P<0.05).The sensitivity,specificity,PPV and NPV of the combined detection of G and GM were 92.5%,95.5%,92.1% and 92.0% respectively.The sensitivity and the specificity of the combined detection were higher than that of single G test and GM test respectively,and the differences were statistically significant(P<0.05).ConclusionThe joint detection of G test and GM test could improve the diagnostic accuracy and be more effectively used for the early diagnosis of invasive fungal infections.

Key words:invasive fungal infections;(1-3)-β-D glucan;galactomannan

(收稿日期：2015-07-18)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.01.031

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)01-0071-03

作者簡介：馮潛，男，初級檢驗醫(yī)師，主要從事臨床微生物免疫檢驗研究。△通訊作者，E-mail：154357456@qq.com。