大孔吸附樹脂在延胡索生物堿提取分離中的應(yīng)用

王紅紅

（天津南開和成科技有限公司，天津 300270）

大孔吸附樹脂在延胡索生物堿提取分離中的應(yīng)用

王紅紅

（天津南開和成科技有限公司，天津 300270）

Application of macroporous adsorption resin in rhizoma corydalis alkaloid extraction and separation

延胡索生物堿是醫(yī)學(xué)上常用的具有較高藥用價(jià)值的堿類物質(zhì)，是各類中草藥堿類物質(zhì)中的一種。但是，怎樣有效的將生物堿從延胡索中分離出來，仍然是我國醫(yī)學(xué)界的一大重點(diǎn)問題。本文主要運(yùn)用了大孔吸附樹脂純化方法，進(jìn)行了延胡索生物堿提取分離實(shí)驗(yàn)，以此優(yōu)化延胡索生物堿的提取分離方法。

大孔吸附樹脂；延胡索生物堿；分離

生物堿是自然界中存在的一種堿類物質(zhì)，具有較強(qiáng)的活性，一般存在于各類中草藥中。延胡索生物堿是從延胡索中提取出的生物堿，它具有極高的藥用價(jià)值。目前常用的生物堿提取方法主要有滲漉法、大孔吸附樹脂純化法、煎煮法等等。本文主要研究了大孔吸附樹脂在延胡索生物堿提取分離中的應(yīng)用。它的主要原理是利用大孔吸附樹脂，吸附延胡索中的生物堿成分，然后再用溶劑將吸附的有效堿性成分洗脫，最終實(shí)現(xiàn)提取分離的目的。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 準(zhǔn)備工作

在實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)所需的器材、試劑等。主要包括紫外線燈、液相色譜儀、大孔吸附樹脂、含有1%NaOH的硅膠板，長度為20 cm，寬度10 cm。除此之外，還要準(zhǔn)備延胡索提取液20 ml、適量甲醇、乙醚、丙酮液體，準(zhǔn)備鹽酸、純凈水適量。大孔吸附樹脂是從4種樹脂中選擇出來的，為AB-8，對(duì)這種樹脂進(jìn)行了測定，發(fā)現(xiàn)它可以有效吸附延胡索生物堿分子。

1.2 樹脂預(yù)處理和再生

在吸附柱內(nèi)裝入丙酮，丙酮的體積大約為樹脂的一半，然后選擇40 g大孔樹脂，裝入吸附柱內(nèi)，必須要保證樹脂完全浸泡在丙酮液體中，約24 h后，用2BV丙酮流過樹脂層，再用乙醇流過樹脂層，然后用水沖洗，沖洗后使用鹽酸浸泡樹脂柱，約2～5 h，然后用水流過樹脂層，直至流出的水無白色雜物為止，測定水的pH值，若pH值為中性，且流出的水較為清澈，就可以完成樹脂的預(yù)處理工作。樹脂的再生，是指將用過樹脂進(jìn)行再次處理，分離其中的吸附物質(zhì)及其他雜物，分離方法與預(yù)處理方法類似，根據(jù)樹脂的種類、性質(zhì)等等，選擇合適的方法，將吸附物質(zhì)分離。一般采用浸泡、沖洗等方法即可。樹脂的再生，可以讓樹脂實(shí)現(xiàn)循環(huán)反復(fù)利用，并且不會(huì)影響到使用的效果，實(shí)現(xiàn)了資源的節(jié)約和環(huán)境的保護(hù)，具有較高的環(huán)保價(jià)值。

1.3 吸附容量測定

將準(zhǔn)備好的延胡索提取液通過樹脂柱，然后收集流出的液體，由于本次實(shí)驗(yàn)中準(zhǔn)備的提取液為20 mL，因此收集的流出液體也為20 mL，這樣便于吸附容量的測定。加入氨水，使液體的pH值為12，然后用乙醚萃取，直至風(fēng)干后，加入1 mL甲醇將風(fēng)干物溶解，可以依據(jù)我國藥典規(guī)定的吸附容量測定方法來確定吸附容量。

1.4 洗脫劑的確定

為了選擇較為合適的洗脫劑，在實(shí)驗(yàn)中分別選擇了30%、40%、45%、60%、65%、80%、90%、95%等多種乙醇，分別使用每種乙醇洗脫收集液體，并將洗脫后的液體儲(chǔ)存起來 ，鑒定液體的質(zhì)量。鑒定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，40%與95%的乙醇洗脫液質(zhì)量較好。但是，40%乙醇可能會(huì)洗脫下延胡索中其他堿性物質(zhì)，因此，將95%乙醇確定為最佳洗脫劑。

1.5 延胡索乙素含量的測定

延胡索生物堿的藥理作用很多，但是在所有的作用中，延胡索乙素的作用最為突出，因此，在實(shí)驗(yàn)中，一般將延胡索乙素含量作為判定生物堿提取質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)。目前常用的含量測定方法主要有高效液相色譜法、紫外分光光度法、毛細(xì)管電泳法等等。相對(duì)來說，第一種方法的測定結(jié)果最為精確，且測定方法易于操作，因此，在本次實(shí)驗(yàn)中，采用了第一種測定方法，即高效液相色譜法。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，用樹脂柱過濾延胡索提取液，在過濾過程中，用純凈水沖洗，直至流出的液體無色為止。在洗脫時(shí)，首先使用40%乙醇，洗脫出液體中的雜質(zhì)，然后再使用95%乙醇，洗脫后需要將洗脫液體儲(chǔ)存起來，儲(chǔ)存時(shí)要保證每個(gè)儲(chǔ)存器具中的洗脫液含量相同，并且根據(jù)需要加入適量的酒精稀釋。選擇質(zhì)量較好的延胡索乙素樣品，加入甲醇，使之充分溶解，溶解液為20 mL。然后吸取樣品溶解液與實(shí)驗(yàn)洗脫液各20 μL，使用色譜測定法測定并計(jì)算延胡索乙素濃度，并比較兩組液體中的濃度，便可以通過測定液體中的延胡索乙素含量了解提取液的質(zhì)量。

2 結(jié)論

根據(jù)結(jié)果可知，洗脫液的濃度為0.073%，相對(duì)來說，濃度較高，可見使用大孔吸附樹脂吸附延胡索中的生物堿成分，具有較好的吸附效果，它可以快速分離出延胡索中的堿性物質(zhì)，并且，在后期洗脫過程中，40%的乙醇可以洗脫液體中的雜質(zhì)，95%的乙醇可以達(dá)到洗脫的目的。但是，40%乙醇還可能洗脫出延胡索中的其他堿性物質(zhì)。因此，如果將這種洗脫方法投入實(shí)際使用，必須要考慮到它的利弊。尤其是在對(duì)生物堿成分要求極其嚴(yán)格的藥品中，要合理決定是否使用40%乙醇洗脫提取液，必要時(shí)可以直接省略這一步驟，使用95%乙醇完成提取液的洗脫工作。在實(shí)驗(yàn)中必須要合理選擇樹脂種類、洗脫液等，并且要嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)規(guī)定操作。同時(shí)，在具體實(shí)踐中，還要考慮到延胡索的自身特性。根據(jù)相關(guān)研究表明，延胡索提取液中的延胡索乙素在受熱的情況下，結(jié)構(gòu)會(huì)出現(xiàn)變化，影響液體的質(zhì)量。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中，要盡量避免提取液體遭受陽光直射，并且要控制室內(nèi)的溫度。這樣才能保證延胡索生物堿的質(zhì)量。

綜上所述，大孔樹脂吸附延胡索生物堿的效果較好，它可以快速的將延胡索提取液中的延胡索生物堿成分吸附，經(jīng)過洗脫劑洗脫后分離出來。相對(duì)于其他提取方法，這種方法對(duì)環(huán)境的污染小，不會(huì)排出有害物質(zhì)及氣體，并且具有可再生的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)，這種提取方法簡單、容易操作，并且可以快速將生物堿分離出來，具有較高的實(shí)用價(jià)值。

[1] 呂子明，劉文娟，于向紅，等. 大孔吸附樹脂純化延胡索總生物堿工藝研究[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，09(20)：109～112.

[2] 李爽，王帥，孟憲生，等. 基于GSE-1細(xì)胞相關(guān)活性評(píng)價(jià)體系的延胡索總生物堿萃取純化工藝研究[J]. 中成藥，2014，36(1)：56～61.

[3] 桑曉媛，張磊，劉立，等. 延胡索生物堿的提取及其抗肝腫瘤活性研究[J]. 浙江理工大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，26(5)：754～756.

[4] 商小金，錢俊青，郭輝，等. 響應(yīng)面法優(yōu)化延胡索生物堿乙醇提取工藝研究[J]. 林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2010，30(2)：32～36.

(P-02)

R284.2

1009-797X(2016)06-0056-02

A

10.13520/j.cnki.rpte.2016.06.019

王紅紅（1986-），本科，畢業(yè)于河北工業(yè)大學(xué)，研究方向?yàn)楣潭ɑ笜渲d體的研發(fā)。

2016-02-23