不同標志物在甲狀腺濾泡性腫瘤中的表達及其意義的實驗研究

沙春艷(白城醫學高等專科學校 吉林 白城 137000)

不同標志物在甲狀腺濾泡性腫瘤中的表達及其意義的實驗研究

沙春艷
(白城醫學高等專科學校 吉林 白城 137000)

甲狀腺濾泡癌惡性度較甲狀腺乳頭狀癌高，早期易發生血道轉移，預后差，發病隱蔽，常誤診為其他良性病變為提高甲狀腺濾泡癌診斷準確率，應探求應用免疫組化染色技術等輔助檢測手段做出病理診斷。

甲狀腺；濾泡癌；乳頭狀癌；病理診斷

1.引言

甲狀腺濾泡癌惡性度較甲狀腺乳頭狀癌高，早期易發生血道轉移，預后差，發病隱蔽，常誤診為其他良性病變。為提高甲狀腺濾泡癌診斷準確率，應探求應用免疫組化染色技術等輔助檢測手段做出病理診斷。為此本實驗研究CK19、PCNA、VEGF和TTF-1在甲狀腺濾泡性腫瘤中的表達情況，探討其在甲狀腺濾泡癌與甲狀腺瘤鑒別診斷中的應用價值和意義。

2.資料和方法

2.1 研究對象

收集吉林大學病理生物學教育部重點實驗室1998年—2007年首次手術治療67例甲狀腺腫瘤標本，標本均經病理復查核診。其中甲狀腺濾泡癌26例，甲狀腺濾泡型腺瘤41例；男性22例，女性45例；年齡21～66歲，高峰年齡42.8歲。患者術前均未接受放化療，臨床資料完整。

2.2 主要試劑

CK19鼠抗人單克隆抗體，PCNA鼠抗人單克隆抗體，VEGF鼠抗人單克隆抗體，TTF-1鼠抗人單克隆抗體，U1traSensitiveTM S-P（即用型），多聚賴氨酸，檸檬酸鹽緩沖液（0.01M，pH6.0），均由福建邁新生物技術開發有限公司提供。

2.3 實驗方法

采用S-P法及其試劑盒說明書進行CK19、PCNA、VEGF 和TTF-1免疫組化染色。

2.4 染色結果判定

采用雙盲法觀察免疫組織化學染色結果，以細胞質或細胞核出現棕黃色顆粒為陽性表達。

CK19表達情況的判斷：無陽性細胞，即為陰性記為0；1%～10%陽性細胞為弱陽性（+）；11%～50%為中等陽性（++）；>50%為強陽性（+++）。

PCNA表達情況的判斷：觀察高倍鏡下每張切片計數100個腫瘤細胞PCNA陽性細胞數，以百分率表達，<20%為陰性。

VEGF表達情況的判斷：整個切片未見陽性著色為陰性（-），陽性細胞<25%為輕度陽性（+），25%～50%為中度陽性（++），50%以上為強陽性（+++）。前兩者為低表達，后兩者為高表達。

TTF-1定量分析：在40倍物鏡下，每個樣本隨機選20個視野，每個視野隨機測試10個陽性瘤細胞，用交互式方法測量每個陽性細胞核灰度值，在200個視野中測試背景灰度并取平均值，計算每個目標細胞核陽性單位（PU）值。

2.4 統計方法

采用SPSS 11.0統計學軟件包處理。

3.結果

3.1 一般形態學觀察

甲狀腺濾泡癌：腫瘤由大小不等濾泡、梁狀或實性巢狀濾泡上皮細胞組成，竇樣血管豐富。腫瘤細胞有不同程度異型性，核分裂相常見，常有包膜和血管浸潤。

甲狀腺腺瘤：25例單純型腺瘤腫瘤組織由大小一致、排列擁擠、內含膠質、與成人正常甲狀腺相似的濾泡構成；12例膠樣型腺瘤腫瘤組織由大濾泡或大小不一濾泡組成，濾泡內充滿膠質并互相融合成囊，瘤間質少；3例胎兒型腺瘤腫瘤組織主要由小而一致、僅含少量或無膠質的小濾泡構成，上皮細胞為立方形，似胎兒甲狀腺組織，間質呈水腫粘液樣，易發生出血、囊性變。1例胚胎型腺瘤瘤細胞小大小一致，分化好，呈片狀或條索狀，偶見不完整小濾泡，無膠質，間質疏松呈水腫狀。

3.2 CK19在甲狀腺濾泡癌與腺瘤中的表達

表達于細胞質，其中見棕黃色顆粒為陽性，兩者之間的差異有高度統計學意義（P<0.01）。見表1。

表1 CK19在甲狀腺良惡性濾泡性腫瘤組織中的表達

3.3 PCNA在甲狀腺濾泡癌與腺瘤中的表達

陽性細胞可顯示顆粒狀和彌漫性兩種類型核著色，腫瘤細胞核內出現清晰棕黃色顆粒為陽性，兩者之間的差異有高度統計學意義（P<0.01）。見表2。

表2 PCNA在甲狀腺良惡性濾泡性腫瘤組織中的表達（%）

3.4 VEGF在甲狀腺濾泡癌與腺瘤中的表達

陽性表達主要位于細胞質或細胞膜，陽性著色為棕黃色，呈顆粒狀，甲狀腺濾泡癌陽性表達率明顯高于甲狀腺腺瘤（P＜0.01）。見表3。

表3 VEGF在甲狀腺良惡性濾泡性腫瘤組織中的表達

3.5 TTF-1在甲狀腺濾泡癌與腺瘤中的表達

細胞核為其在甲狀腺表達部位，主要見于甲狀腺濾泡細胞，陽性胞核淡黃色，邊界清楚，散在分布；兩者結果比較差異無統計學意義（P>0.05）。表4。

表4 TTF-1在甲狀腺良惡性濾泡性腫瘤組織細胞中的表達

4.討論

4.1 CK19在甲狀腺濾泡性良惡性腫瘤中的表達意義

本實驗表明，3例甲狀腺腺瘤患者弱陽性表達，陽性表達率為7.69%；甲狀腺濾泡癌中陽性表達強度（包膜浸潤處明顯）及表達率（92.31%）均明顯增強，說明CK19有助于區別甲狀腺良惡性濾泡性腫瘤。在良性甲狀腺濾泡性病變組織中出現少量CK19明顯中強陽性，一定要仔細尋找原發灶，以免漏診[1]。

4.2 PCNA在甲狀腺濾泡性良惡性腫瘤中的表達意義

本實驗表明，PCNA在甲狀腺濾泡癌與甲狀腺腺瘤中的陽性表達范圍未重疊，增殖指數分別為67.01%和8.26%，表明PCNA在甲狀腺濾泡癌中表達率較高，在甲狀腺腺瘤表達率較低，提示在鑒別診斷中敏感性較高。

甲狀腺濾泡癌PCNA陽性表達率高證明癌細胞增殖活性較高，甲狀腺腺瘤中陽性表達率低說明細胞增殖活性較低。其與腫瘤細胞分化有關，反映了細胞增殖活性與甲狀腺濾泡性腫瘤生物學行為之間的關系[2]。其增殖指數可作為判斷甲狀腺濾泡性腫瘤良惡性的參考指標，可提供重要預后信息。

4.3 VEGF在甲狀腺濾泡性良惡性腫瘤中的表達意義

VEGF在甲狀腺癌生長和轉移中地位重要[3]，高水平表達并以旁分泌方式刺激甲狀腺癌血管生成，促進甲狀腺癌發展。

本實驗顯示，VEGF在甲狀腺濾泡癌和甲狀腺腺瘤的陽性表達率分別為65.38%和21.95%。VEGF高表達是疾病活躍標志，在甲狀腺濾泡性腫瘤惡變中可起重要作用，有助鑒別診斷良惡性濾泡性腫瘤。

4.4 TTF-1在甲狀腺濾泡性良惡性腫瘤中的表達意義

TTF-1可特異性地在甲狀腺上皮或濾泡旁上皮細胞表達，且位于細胞核內，是一種良好標記物。

本實驗表明，甲狀腺濾泡癌和甲狀腺腺瘤患者的PU值分別為（14.9±2.4）和（16.1±1.3），均能很好表達呈由高到低的趨勢，但兩組表達值差異無統計學意義，與既往研究一致[4]。可見該標志物尚不能作為甲狀腺濾泡性良惡性腫瘤的鑒別指標。

綜上所述，聯合檢測CK19、PCNA和VEGF有助于提高甲狀腺濾泡性良惡性腫瘤的診斷正確率，TTF-1在甲狀腺濾泡性良惡性腫瘤中都能很好表達但對鑒別診斷幫助不大。當懷疑惡性腫瘤來自甲狀腺時可檢測TTF-1表達情況，為腫瘤來源正確判斷提供參考。

[1]騰曉東，王麗君，姚洪田，等.細胞角蛋白19、gelectin- 3、HBME-1在甲狀腺病變上的表達及鑒別診斷意義[J].中華病理學雜志，2004，33（3）:212-216.

[2]孫青，鹿偉，張傳森，等.甲狀腺腫瘤增殖細胞核抗原表達的免疫組化研究[J].第一軍醫大學學報，2001，21（1）:17-18.

[3]張矛.血管內皮生長因子與甲狀腺癌[J].國外醫學內分泌學分冊，2001，21（2）:76-78.

[4]魏正俐，姚紅，趙麗芹，等.甲狀腺轉錄因子-1在甲狀腺良、惡性病變中表達的定量研究[J].中國藥物與臨床，2006，6（11）：809-812.

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1009-5624（2016）06-0178-03