S100—A8在乳腺癌表達的病理學研究

孫小年　胡丹妮　盧雪琳　王江濤　李晶

摘要：目的：分析S100-A8在乳腺癌表達及與乳腺癌臨床病理和生存狀況的關系。方法：用免疫組織化學方法檢測S100-A8蛋白在乳腺良性疾病（n=15）及乳腺癌無淋巴結轉移組（n=83）及109例有腋窩淋巴結轉移乳腺癌和配對淋巴結轉移灶中的表達，進行Kaplan-Meier生存分析和Cox回歸分析。結果：S100-A8蛋白在乳腺癌原發灶和淋巴結轉移灶之間存在差異表達，原發癌組織和配對的轉移性淋巴結之間差異有統計學意義。Kaplan-Meier生存分析和Cox回歸模型提示組織學分級和淋巴結狀態是乳腺癌的危險因素。結論：S100-A8蛋白與乳腺癌淋巴結轉移相關，并與ER表達水平和組織學類型有關。

關鍵詞：乳腺癌；S100-A8；淋巴結轉移；免疫組化方法

中圖分類號：R737.9 文獻標志碼：A 文章編號：1008-2409（2016）05-0036-04

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤和女性癌癥死亡的第二大原因。乳腺癌在西方國家發病率和病死率高，而其發病率在發展中國家呈上升趨勢。S100家族蛋白是脊椎動物特有的分子量為10～20 kDa的小酸性蛋白質，可以與鈣離子以同型二聚體或低聚物形式結合。許多研究已經描述了這些蛋白質與炎癥和癌癥的關系。至少有16個編碼S100家族成員的基因，包括S100-A8基因，聚集在人類染色體lq21，在腫瘤的發生發展中這個區域經常出現染色體重排，并與腫瘤細胞的增殖和轉移相關。筆者對S100-A8在乳腺癌中的表達及臨床病理學意義進行了初步研究。現報告如下。

1資料與方法

1.1病例資料

選擇1996年5月至2008年5月在湖南省腫瘤醫院就診207例女性乳腺疾病患者的石蠟組織樣本。其中15例診斷為乳腺良性疾病包括乳腺纖維囊性改變、不典型增生和纖維腺瘤，83例診斷為無區域淋巴結轉移乳腺癌，109例有腋窩淋巴結轉移乳腺癌和配對淋巴結轉移灶。所有乳腺癌患者均經湖南省腫瘤醫院病理確診，術前均未接受放療或化療。原發性腫瘤患者的平均年齡為45歲（30～73歲），平均總生存時間約為80.07個月。組織標本用10%甲醛固定液，石蠟包埋，4μm厚切片。所有病理切片均由湖南腫瘤醫院病理科兩位有經驗的病理醫生觀察，均為浸潤性導管癌和浸潤性小葉癌。分為4組檢測S100-A8蛋白的表達：①乳腺良性疾病（BBD）。②無淋巴結轉移的乳腺癌原發灶（NMBT）。③有淋巴結轉移的乳腺癌原發灶（PBT）。④配對的淋巴結轉移灶（PMLN）。

1.2試劑

兔單克隆免疫球蛋白（IgG）抗體S100-A8購自Abcam公司（英國）。檸檬酸抗原修復液（粉）（0.01M，pH：6，mvs-0066），0.01M PBS（pH：7.2～7.4）。DAB顯色試劑盒（聚合物kit-0015）和Elivision^TMplus Polyer HRP試劑盒（大鼠和家兔）kit-9902（邁新生物技術產品，福建）。家用微波爐（格蘭仕）對微波抗原修復。

1.3免疫組化方法

石蠟切片在烤箱烤60℃ 2 h，然后依次在二甲苯中脫蠟、梯度乙醇洗滌、流水清洗，檸檬酸抗原修復液中微波修復20 min。3%過氧化氫孵育15 min，非免疫血清封閉。滴加S100-A8抗體（1：200）4℃過夜。孵育鏈霉親和素一過氧化物酶15 min，然后過氧化物酶標記二抗孵育15 min后，DAB顯色。

1.4免疫組化染色結果評分

免疫組化染色結果判斷由兩位高年資病理醫生進行，將結果進行比對，對不一致的結果將重驗并達到一致。總的免疫組化染色評分（total immuno-staining score，TIS）綜合染色比例和強度進行。

1.5統計學分析

應用Wilcoson signed-rank檢驗和MeNemar檢驗分析S100-A8各組乳腺病變中的表達差異。使用X²檢驗分析S100-A8表達與臨床病理指標間的關系。Kaplan-Meier法分析S100-A8陽性和陰性乳腺癌患者的生存狀態，Multivariat Cox風險分析$100-A8在乳腺癌預后中的作用。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 S100-A8在各組乳腺病變組織中表達

免疫組化結果顯示S100-A8陽性著色位于細胞質。陽性表達率在BBD、NMBT、PBT、PMLN分別為13.3%（2/15）、37.3%（31/83）、34.9%（38/109）、18.3%（20/109）。NMBT、PBT陽性表達率均明顯高于PMLN、BBD（P<0.01），BBD和PMLN，NMBT和PBT之間差異無統計學意義。詳見圖1～2。

2.2 S100-A8蛋白表達與臨床病理特征之間的相關性

S100-A8與組織學類型、雌激素受體（ER）的表達顯著相關。乳腺浸潤性導管癌的S100-A8陽性率較浸潤性小葉癌，ER陰性乳腺癌的S100-A8陽性率較ER陽性乳腺癌更高。詳見表1。

此外，Kaplan-Meier分析（圖3）表明，蛋白S100-A8陽性乳腺癌病例可能有更好的生存狀態，但目前的研究顯示差異無統計學意義（P=0.094）。此外，Cox回歸分析結果顯示組織學分級和淋巴結轉移情況與乳腺癌總生存率的預后相關。詳見表2。

3討論

乳腺癌是一種系統性疾病，100%～15%乳腺癌患者在3年內有侵襲性疾病和發生遠處轉移的原發腫瘤，轉移仍是乳腺癌總生存率的重要危險因素，因此，必須明確乳腺癌的轉移機制。區域性腋窩淋巴結總是首先受累的轉移。在Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌患者中保乳手術的復發率是根治術的2.8倍，淋巴結復發在保守治療中高兩倍多。精確有效的腋窩淋巴結狀況評價是乳腺癌患者預后判斷的重要方法。

本研究結果提示S100-A8與乳腺癌區域腋窩淋巴結轉移有關，但與乳腺癌總體生存率無顯著相關性。S100-A8陽性表達率偏低可能是其中的原因，需要增大樣本數量進一步研究。本研究結果也發現該蛋白表達與雌激素受體（ER）水平有關，可能是ER相關作用過程中的一個效應分子。而它在浸潤性導管癌和小葉癌中表達的差異沒有過類似報道，還有待進一步研究確定其意義。本組乳腺癌病例Cox回歸分析顯示組織學分級和淋巴結轉移情況與乳腺癌總生存率的預后相關，雖然S100-A8陽性表達與總生存期差異無統計學意義，但鑒于其與淋巴結轉移的顯著相關性，故其仍可能與乳腺癌預后有關。

S100-A8也稱為粒細胞相關蛋白8，有報道這種小細胞內鈣結合蛋白可被分泌以及在前列腺癌細胞外間質中表達。S100-A8蛋白在多種腫瘤如食管鱗癌和喉癌參與細胞周期、分化、趨化作用和炎癥信號轉導通路。此外，蛋白質S100-A8是NF-KB信號通路的新成員。Fu等發現S100-A8通過NF-KB信號通路與人類白細胞抗原（HLA-B）相互作用參與喉癌的發生發展。另有研究表明，鋅可以通過激活和抑制蛋白S100 A8-rage互動和下游NF信號促進和拮抗腫瘤發生。

綜上所述，蛋白S100-A8是預測乳腺癌淋巴結轉移的一個潛在的生物標志物。目前關于該蛋白在惡性腫瘤中功能的研究報道不多，本研究只是對其臨床病理學意義進行初步研究，還需進一步深入研究S100-A8蛋白如何參與乳腺癌轉移過程。