唾液學檢測技術在健康管理中應用

樊福好

唾液（saliva）俗稱口水（oral fluid），是指由位于口腔內的腺體分泌的、包含多種活性酶、電解質和抗體、抗原在內的混合物，其中水分含量占99%以上。隨著機體生理狀態的改變，唾液的成分、濃度和黏度等變化往往較大。

研究唾液的組成、功能以及唾液狀態改變規律的學科稱為唾液學（Salivology）。

1 唾液的主要作用

1.1 預消化作用

唾液中含有多種消化酶（如唾液淀粉酶、葡萄糖酶），可以對進入口腔內的食物進行初步消化，減輕胃腸道的消化負荷，為胃腸道的消化做好準備。

1.2 對細菌和病毒的選擇性消滅作用

在機體處于正常生理機能的情況下，唾液將對進入口腔內的細菌和病毒進行甄別并選擇性殺滅（如艾滋病病毒、溶血性鏈球菌、傷寒桿菌、大腸桿菌及葡萄球菌），唾液是機體防護的重要防線。

1.3 唾液可以有效地消除霉菌毒素和農藥殘留

1）唾液中的過氧化氫醇等酶類可以對進入口腔內的真菌毒素（如黃曲霉毒素、赭曲霉毒素）進行瞬間降解和清除。

2）唾液可以降解某些農用藥物在食物和飼料中的殘留。

3）唾液可以消除機體產生的超氧自由基、亞硝基化合物、黃曲霉素和苯并芘，具備較好的抗癌作用。俗諺有云：“日咽口水三百口，保你活到九十九。”

1.4 唾液可以促進傷口愈合

唾液中的表皮生長因子、神經生長因子等可以促進傷口愈合，采集動物的唾液制成凍干品具有重要的醫學價值，具備巨大的商業前景。

1.5 唾液參與抗體的大循環

動物機體對病原的抵抗主要通過免疫學反應進行，進入機體的病原刺激機體產生的抗體在體內的循環主要有兩個途徑：大循環和小循環。

小循環是指抗體在血液中循環，大循環是指抗體在血液和唾液之間循環，故此，體內的抗體分為兩種：小循環抗體、大循環抗體。

小循環抗體主要參與機體的免疫記憶反應，免疫保護活性較弱，甚至會產生對機體有害的反應（如登革熱的糖蛋白抗體、藍耳病的糖蛋白抗體和核蛋白抗體）。

大循環抗體主要參與機體的免疫保護反應，也是重要的免疫保護機制產生的基礎，具備重要的生物防御意義（如環狀病毒膜蛋白抗體和豬瘟E2蛋白抗體）。

據此，可以推斷能夠產生大循環抗體的疫苗才是優秀的生物制品（如我國的C株豬瘟苗），而目前的藍耳苗、偽狂犬疫苗、禽流感滅活疫苗、口蹄疫滅活疫苗等均不能產生有效的大循環抗體，免疫效果較差。

2 唾液是判斷機體健康狀態的重要樣本

目前，唾液中發現了至少600種以上的活性酶類，這些酶可以作為判斷機體健康狀態的重要指標。其中堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、唾液淀粉酶等均可作為機體活性的指示酶類。唾液檢測的項目包括電解質、激素、藥物、抗體、抗原和感染因子等。

對豬群的研究發現，用PCR方法檢測唾液中的環狀病毒，檢出率高出血清學方法300%以上，檢測豬群唾液中的豬瘟抗體和環狀病毒（圓環病毒）抗體具有明顯的優勢，CV%值較小，檢測結果穩定（見表1、表2）。

機體活度（Activity）是評價機體對外界環境緩沖能力的重要指標，其數值范圍在0.0～1.0之間。活度越高，機體越健康；活度越低，機體越容易生病。對某保育、生長豬群的活度檢測結果（見表3、表4）。

3 唾液學檢測

3.1 機體活度（Activity）檢測

唾液是機體口腔內腺體（腮腺、頜下腺和舌下腺）分泌的重要液體，其成分隨著機體健康狀態的改變而改變，尤其是唾液中酶的量和酶活性是機體活力狀態改變的重要指針，測定唾液中酶的活性具有重要的臨床指導意義。

唾液中酶的活性受到唾液分泌量的影響而變動較大，加之酶的活性還受到唾液pH值、唾液中礦物質及食物殘渣的影響而不斷波動，所以測定唾液中的酶活性具有很強的不確定性。通過配制特殊的顏色反應液選擇性作用于唾液中的特異性酶，通過顏色改變來確定酶活性，實現酶活性測試的數量化具有重要的實踐意義。

本試劑盒中含有唾液中幾種重要酶（溶菌酶、唾液淀粉酶、過氧化物酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、丙酮酸激酶、谷胱甘肽還原酶等）作用的相應底物，底物產生的分解物使特定組合的色原物質發生顏色的改變，通過測定光密度值來確定唾液中酶的總活性，以此標示機體的活性狀態（活度）。

本試劑盒中含有陽性對照（0.5mL）、陰性對照（0.5mL）、反應液A（1mL）、反應液B（20mL），微孔反應板（96孔，可拆卸）1塊。所有試劑置于4℃冷藏、避光保存。有效期180d。所有試劑禁止接觸皮膚、眼睛等部位，建議戴保護手套進行實驗操作。

1）唾液的準備：停止采食和飲水6h以上（或過夜），采用專用的唾液采集袋（見圖1）收集人或動物的唾液1mL左右，1萬r/min，離心1min，上清備用（冷凍）。檢測時，樣本需室溫條件下回溫30min。

2）反應板的準備：根據樣本的數量，取微孔反應板1塊或若干條。

3）加樣：第1、2孔加入陰性對照液10μL；第3、4孔加入陽性對照液10μL；其余各孔分別加入唾液樣本10μL。

4）在上述每孔中（陰性對照、陽性對照、樣品）分別加入反應液A10μL、反應液B180μL（反應孔內溶液最終體積200μL）。

5）讀板：加入反應液B10min時立即采用630nm濾光片讀取微孔反應板各孔的OD值。

6）判斷：陰性對照小于0.05，陽性對照大于0.9，則反應成立。（樣本OD值減去陰性對照OD值作為機體的活度值，陰性孔的OD值較小時，可以忽略不計。活度=OD_s-OD_N（為計算方便，當陰性對照值較小時，可以直接用樣本OD值代表寒度值）。

7）生理意義：機體的活度值越高，活性越高，機體抵抗力強，疾病后恢復較快。若活度值小于0.4，則機體抵抗力弱，疾病后恢復較慢。

8）眼觀判斷：深藍色：抵抗力強；淺藍色：抵抗力弱。

3.2 機體寒度（Cold）檢測

本試劑盒中含有唾液中幾種重要酶（溶菌酶、唾液淀粉酶、過氧化物酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、丙酮酸激酶、谷胱甘肽還原酶等）作用的相應底物，底物產生的分解物使特定組合的色原物質發生顏色的改變，通過顏色改變來確定機體的體質。通過配制特殊的顏色反應液選擇性作用于唾液中的特異性酶，通過顏色改變來確定酶活性，而其中某些酶的活性與機體的體質有直接的關系。

本試劑盒中含有陽性對照（0.5mL）、陰性對照（0.5mL）、反應液A（1mL），反應液B（20mL），微孔反應板1塊（96孔，可拆卸）。所有試劑置于4℃冷藏、避光保存。有效期180d。所有試劑禁止接觸皮膚、眼睛等部位，建議戴保護手套進行實驗操作。

1）唾液的準備：停止采食和飲水6h以上（或：過夜），采用專用的唾液采集袋收集人或動物的唾液1mL左右，1萬r/min，離心1min，上清備用（冷凍）。檢測時，樣本需室溫條件下回溫30min。

2）反應板的準備：根據樣本的數量，取微孔反應板1塊或若干條。

3）加樣：第1、2孔加入陰性對照液10μL；第3、4孔加入陽性對照液10μL；其余各孔分別加入唾液樣本10μL。

4）在上述每孔中（陰性對照、陽性對照、樣品）分別加入反應液A10μL、反應液B180μL（反應孔內溶液最終體積200μL）。

5）讀板：加入反應液B10min時立即采用630nm濾光片讀取微孔反應板各孔的OD值。

6）判斷：陰性對照小于0.05，陽性對照大于0.9，則反應成立。以樣本OD值減去陰性對照OD值作為機體的寒度值。寒度=OD_s-OD_N（為計算方便，當陰性對照值較小時，可以直接用樣本OD值代表寒度值）。

7）生理意義：機體的寒度值越高，寒性越高，機體呈寒涼體質。若寒度值小于0.4，則機體呈溫熱體質。處于寒涼體質的機體，不能使用寒涼藥物；處于溫熱體質的機體，不得使用溫熱藥物。

8）熱性體質：0.0～0.2；溫性體質：0.2～0.4；中性體質：0.4～0.6；涼性體質：0.6～0.8；熱性體寒：大于0.8。

9）眼觀判斷：深藍色：寒涼體質；淺藍色或無色：溫熱體質。

（編輯：趙曉松）