豬場環境測定及對敏感抗生素的篩選

趙達卓,杜秋明,張　穎,許龍春

(吉林省延邊州動物疫病預防控制中心，吉林 延邊 133000)

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豬場環境測定及對敏感抗生素的篩選

趙達卓,杜秋明,張穎,許龍春

(吉林省延邊州動物疫病預防控制中心，吉林 延邊 133000)

豬舍環境不衛生是誘發疫病的重要因素之一，目前環境因素不被養殖戶所重視，導致豬群疫病暴發，從而給養殖戶造成經濟損失。通過對豬場空氣中以及飲用水中的細菌數進行檢測，與國家規定的標準進行比較，對比是否符合環境養殖標準,通過藥敏試驗檢測空氣中常在的細菌對何種抗生素敏感，為養殖戶合理用藥提供理論依據。

豬場；環境測定；敏感抗生素；篩選

我國養豬業發展迅速，近幾年來養豬模式由傳統的分散養殖快速向規模化、集約化和產業化方向發展，但是隨著規模的不斷擴大，新的制約因素不斷出現，尤其是在豬場衛生防御體系上，衛生防御體系脆弱，易受外界環境的干擾；豬場的飼養環境惡劣，限制新技術的應用[1]，使豬的生產性能難以發揮；出現這些因素的原因在于豬場內外環境的污染和生態系統的破壞。規模豬場產生的糞便和污水量較大，并且集中，超出周圍環境的消納能力[2]，生態環境變的極為脆弱與歐盟國家相比有很大的差距。

歐盟國家對畜禽廢棄物的先進管理超過很多國家，不僅擁有農牧混合發展的歷史傳統和現代技術，畜牧業也相當發達，在農業產品中占很重要的位置。同時，也是世界環境保護領域的帶頭人[3]，尤其是農業環境保護政策的涉及范圍廣、支持力度大、農民和消費者環保意識強，作為先進工業化的地區，歐盟各國起初也受到環境問題的困擾，起初實行的單一養殖模式給農業生態環境帶來巨大的影響。糞尿的肆意排放、無序處理對地表水及地下水造成很大污染[4]，雖然養殖模式向著集約化、規模化生產，但是同樣也對土壤造成了嚴重的損害。歐盟成立后在畜禽養殖廢棄物的管理上出臺了一系列政策法規、管理規定、生態補償標準等，不但改善了起初的現狀，在對畜禽糞尿的處理上也有很大改觀[5]。中國與之相比較畜禽污染防治法較為粗放，大多數畜禽養殖場沒有污染治理措施，畜禽糞便未經處理就地排放。畜禽的糞便和尿中有大量的病原微生物、寄生蟲卵，直接威脅環境和人類的健康。嚴重時還會導致人畜共患病的傳播，給人畜帶來災難性的危害，例如每年春季的流行豬瘟、豬丹毒、口蹄疫。在傳統的一家一戶養豬模式的轉化過程中由于對環境的重視不夠[6]，導致養豬環境惡化，進而引起疾病的流行，豬的生產性能、健康狀況和肉的品質都受到影響，進而給養殖戶帶來經濟損失，所以養殖環境是制約養豬業發展的重要因素。環境是防控疾病的首要因素，豬生長在適宜的環境中，機體抵抗力增強，減少疾病的發生。不良的環境可直接導致疫病的發生和傳播[7]，同時可促使疫病的暴發。如豬舍內的濕度過高可影響新陳代謝，引起仔豬黃白痢;寒冷對仔豬的間接影響更大，是仔豬黃白痢和傳染性胃腸炎等腹瀉性疾病的主要誘因，還能引起呼吸道疾病。

環境是提高生產效率的關鍵。豬生長在適宜的環境中能充分發揮其遺傳潛力，各項生產性能均能發揮正常[8]。不良的環境嚴重制約著豬的各項生產性能。比如：高溫高濕環境下，豬食欲減退、體溫升高、精神不振;公豬性欲減退;空懷母豬不發情或發情異常，妊娠母豬胚胎死亡率高，臨產母豬在溫度過高的情況下甚至還可能造成死亡[9]。

由此可見，豬舍環境的好壞決定豬場的成敗，做好豬舍內外的環境評價、環境監測是很有必要的，夏季對成年豬做好防暑降溫工作，冬季提高新生仔豬和斷奶豬環境溫度。豬舍的濕度也是引發豬病的因素之一，為了防止濕度過高，首先要減少豬舍內水汽的來源，盡量不用大量的水沖刷圈舍，避免積水造成濕度過高，還要設置通風設備，經常開啟門窗以降低室內濕度，為美化豬場的環境可以在豬場周圍植草種樹，不但具有綠化環境的作用，夏季還能發揮遮陽的作用，適當的降低溫度[10]。

不單是這些自然因素可以影響豬的生長，養殖場內部的水質也是影響豬只的重要因素，而影響水質的不僅是水中的細菌，還有一些藻類，水藻是污染水源的微生物之一，有些水藻能夠產生對豬有毒的化合物，在極端的情況下，藻類能產生具有異味的物質，使豬肉有塑料味或泥腥味[11]。被細菌和藻類污染的水會引起豬的疾病，有時會抑制其免疫系統，從而危害生產性能，還有些非致病的細菌和藻類會使水出現難聞的氣味和滋味，豬不愿飲水或采食導致生產性能下降。防止水質污染的有效措施是對水管采取沖擊處理，采用有機酸和清潔劑進行清潔處理，隨后添加艾菌清，但是使用有機酸和清潔劑時要注意避免有機酸和清潔劑進入眼中或呼吸道造成生命危險[12]。近年來養殖戶不注重豬舍環境和養殖場飲用水的質量，不合理的應用抗生素導致疫病的暴發，給養殖戶帶來經濟損失，因此本實驗從圈舍內細菌和水中微生物的檢測入手，為養殖戶解決圈舍和飲用水中微生物超標的問題，并且通過藥敏試驗為養殖戶在殺菌消毒用藥方面提供合理依據。

1　材料

1.1試驗用的藥品

抗生素：萬古霉素、萘啶酸、強力霉素、妥布霉素、乙酰螺施霉素、慶大霉素、四環素、紅霉素、新霉素、卡那霉素、壯觀霉素、痢特靈、新生霉素、林克霉素、氯霉素、氟哌酸、呋喃妥因、復方新諾明、利福平、多粘菌素B、先鋒霉素V、氨芐青霉素、頭孢曲松、先鋒孟多、氧哌嗪青霉素、苯唑青霉素、頭孢他定、頭孢拉定、頭孢拉定、青霉素G、鏈霉素、頭孢噻肟、丁胺卡那、麥迪霉素、世福素、環丙沙星、阿莫西林、奧復星、優立新、洛美沙星、米諾環素、頭孢噻吩、頭孢哌酮、頭孢呋肟。

1.2試驗用的儀器

血液瓊脂培養基，藥敏試紙，溫度計，鑷子，移液器(10uL)，刻度尺，濕度計，豬舍飲用水，無菌注射器，高壓蒸汽滅菌器，干熱滅菌箱，37℃恒溫培養箱，菌落計數器。

2　方法

2.1試驗步驟

樣品的采集在豬舍內養殖床的下方15cm區域內采樣，取11個培養基平均放置在養殖場角落、中心、窗，放置2min后蓋上培養皿蓋收回，然后采用無菌注射器抽取豬舍飲用水1mL與培養基一并帶回。

實驗室檢測：采用藥敏試驗檢測法步驟如下,將取回的培養基放在培養箱內培養10～18h;用移液器吸取培養好的菌落2uL注入培養平板上，用涂菌環涂抹均勻;用鑷子夾取藥敏片分別放置在培養平板上兩紙片間距大于25mm，紙片離培養皿邊緣15mm分別在培養平板下部標記抗生素名稱和菌種名稱;將平板底部向上在37℃恒溫培養箱內培養18h后觀察。

圈內常在菌和豬舍飲用水菌數的檢測：無菌操作的方法用無菌移液器吸取混合均勻水樣1mL注入另一個培養平皿中用涂菌環涂抹均勻;將融化后的瓊脂倒入無菌培養平皿中將水樣與其混合均勻，然后取瓊脂倒入另一個培養平皿中作對照;待瓊脂冷卻后將培養平皿底部向上，放入恒溫培養箱中24h后取出計算每個平皿的菌數。

2.2判定標準

藥物敏感性判定標準參照美國臨床試驗室標準化委員會(National Committee Clinical Laboratory Standards NCCLS)頒布的《抗微生物藥物敏感性執行標準第14版信息增刊》的標準進行。

3　結果

3.1環境和水質情況

由試驗得知圈舍內細菌總數是8.9629萬個/m3，標準參考值≤5萬個/m3；超過標準值3.9629萬個/m3，水中微生物數量577mL，標準參考值≤100mL，超過國家標準477mL。因此圈舍內常在菌和飲用水中細菌數目均超過國家標準。

3.2抗生素敏感性結果

在藥敏紙片含量為10μg時，先鋒孟多的抑菌圈直徑是34mm，強力霉素的抑菌圈直徑是20mm，氟哌酸抑菌圈直徑是18mm，新生霉素抑菌圈直徑是14mm，丁胺卡那的抑菌圈直徑是12mm，四環素的抑菌圈直徑是7mm，利福平抑菌圈直徑是4mm，其余藥物均不產生抑菌圈。

4　討論

實驗中可知圈舍內細菌總數是8.9629萬個/m3，標準參考值≤5萬個/m3，水中微生物數量577mL，標準參考值≤100mL，可以得出圈舍內細菌總數和飲用水中微生物數量均不符合國家標準，圈舍空氣中細菌超標79.26%，陽性菌較多，霉菌陰性菌均存在。造成圈舍內菌落超標的原因是由于豬舍通風設施不夠完善，對于封閉式豬舍夏季通風較好，冬季隨著天氣寒冷通風次數不斷減少而造成空氣中菌落超標。由于水源的管理不當導致水中微生物超標。

藥敏試驗得知：圈舍內常在的細菌敏感抗生素是強力霉素、阿莫西林、洛美沙星；對新霉素、慶大霉素、四環素、鏈霉素均耐藥。仔豬黃白痢病原的分離及藥敏試驗得出：卡那霉素、多粘菌素高敏；氨芐西林及氟苯尼考中敏，對新霉素、慶大霉素、鏈霉素、四環素均耐藥，本次試驗與該學者實驗結果基本相同[12]。之所以有耐藥菌落的產生是由于不合理應用抗生素所至。

5　防治措施

冬季由于溫度過低、封閉式養殖場的通風和溫度之間存在矛盾，所以養殖戶為了保證溫度而不注重通風，往往是導致豬發病的因素之一，所以冬季也該注重通風，對開放式豬舍采用局部保溫，大環境通風，對于封閉式豬舍采用自動控制風機進行通風，同時規范的消毒程序也是不可缺少的，做好通風和消毒控制圈舍細菌在標準范圍之內，減少由環境中細菌引起的疾病給養殖戶造成損失，同時找出水源菌落數超標的原因加以治理。

經過藥敏試驗的檢測可知圈舍內常在的細菌對大多數抗生素有耐藥性，造成這種耐藥性的原因是抗生素的不合理應用，在使用抗生素時應注重抗生素的選擇，避免大量應用易產生耐藥性的抗生素，避免圈舍內耐藥菌株的增加，為養殖帶來潛在的風險。菌落對抗生素耐藥是一種自然的過程，在抗生素應用的過程中只要不大量應用耐藥性抗生素，并且有針對性的對某種菌應用某種藥物，從而減少耐藥菌株的存在，減少對養殖戶造成的風險。利用生物制劑替代日常養殖過程中投喂抗生素進行預防疫病的輔助功能。

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2015-11-30

趙達卓(1980-),女 ,碩士研究生,獸醫師。

許龍春(1964-),男 ,博士,研究員。

S816.73

A文章編號：2095-9737(2016)04-0007-02