不同冷凍稀釋液的配方對遼寧絨山羊精子活率的影響

張桐煒，谷　建

(遼寧省營口市動物疫病預防控制中心，遼寧 營口 115000)

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不同冷凍稀釋液的配方對遼寧絨山羊精子活率的影響

張桐煒，谷建

(遼寧省營口市動物疫病預防控制中心，遼寧 營口 115000)

為了使遼寧絨山羊精液在冷凍保存時具有更好的活性，本實驗采用一步稀釋法，通過檢測精子活率的方法比較六種冷凍稀釋液。篩選出了適合遼寧絨山羊精液冷凍的最佳基礎冷凍稀釋液配方(100mL)：Tris 3.44g，檸檬酸1.83g，果糖1.26g，卵黃15%，甘油5%。

遼寧絨山羊；精液；冷凍稀釋液；配方；篩選

遼寧絨山羊主要分布在遼寧東部山區以及遼東半島地區，是在特定的歷史和地域條件下，經過長期自然選擇和人工選育所形成的絨肉兼用型絨山羊品種。具有體格大、抗逆性強、產絨量髙、絨纖維細長、絨毛比例高、絨毛潔白、手感柔軟等優良品質[1]。并且續山羊品種具有穩定的遺傳特性，攜帶有其他續山羊品種所沒有的獨特基因，是培育優質高產，改良低產絨山羊的寶貴遺傳資源。遼寧絨山羊是我國重點保護的家養動物品種，是我國政府明令禁止出口的少數幾個品種之一[2]。

羊精液的冷凍保存不僅能提高種公羊的利用率，而且能降低繁殖成本，對人工授精技術的推廣應用，對養羊生產的發展都產生了巨大的推動作用[3]。

1　實驗材料

試驗動物：遼寧絨山羊種公羊7只，該7只種公山羊為3～5歲發育良好、體格健壯、性機能旺盛。

主要試劑：果糖，海藻糖，蔗糖，Tris(三羥甲基氨基甲烷)，檸檬酸為進口分裝；甘油，葡萄糖，乙二醇，DMSO，乳糖，EDTA，檸檬酸鈉，青霉素，鏈霉素，維生素E，SOD(過氧化物歧化酶)，FITC-PSA(異硫氰酸熒光素豌豆凝集素)，羅丹明123，PI(碘化丙啶)，卵黃(新鮮雞蛋)

實驗器材：電子天平、OLYMPUS CH20顯微鏡、精細管程序冷凍儀(型號TSM-140MS，富士平工業株式會社)等。

2　試驗方法

2.1精液的準備

用假陰道法采精，采精后立即觀察精液外觀性狀并在光學顯微鏡下檢查精液質量，只有精液顏色正常，有云霧狀，精子活力在90%以上時，才用于實驗。

2.2精子活率的測定

取1滴待檢查精液稀釋后，置于載玻片上，上覆蓋玻片，借助光學顯微鏡放大200～400倍，用基礎稀釋液作為稀釋劑(見表1)，以保持正常運動，計數四角及中央五個方格中的非直線運動精子數(包括死精子，擺動旋轉運動的精子)，然后把計數板放入90℃保溫箱內大約3～5min，殺死全部精子后在顯微鏡下計出全部精子數。活率=(總精子數-非直線運動的精子數)/總精子數×100%。

表1　六種基礎稀釋液配方

2.3結果與分析

經過SPSS V13.0軟件分析后，對數據進行顯著性檢驗。結果見表2。

表2　6種不同配方稀釋液精子解凍后活率

注：同列數據后標注的不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同小寫字母表示差異不顯著(P>0.05)

實驗結果表明，在所選用的6種冷凍稀釋液中。E組稀釋液解凍后精子活率，均顯著高于A、C、F組的稀釋液(P<0.05)。與B、D組稀釋液相比效果不顯著(P>0.05)，但各項指標都相對高于B、D組稀釋液。因此篩選出E組冷凍稀釋液，作為遼寧絨山羊精液冷凍稀釋液的配方。

3　討論

本實驗通過比較6種冷凍稀釋液對精液冷凍解凍后活率，初步篩選出山羊細管冷凍基礎稀釋液E(100mL)：Tris 3.44g，檸檬酸1.83g，果糖1.26g，卵黃15%，甘油5%。

[1] 姜懷志，韓迪，郭丹，等.遼寧絨山羊的若干種質特性[J].中國草食動物,2010(6):72-75.

[2] 楊秋鳳，劉興偉，楊詠梅,等.遼寧絨山羊年齡與續毛生產性能的關系[J].中國草食動物,2008(8):28-30.

[3] 王超，周慶雨.山羊精液冷凍過程中影響因素分析[J].畜牧與獸醫,1995,27(1)：11-13.

2015-12-31

張桐煒(1983-)，助理獸醫師，本科，研究方向：預防獸醫學。

S814.3

A文章編號：2095-9737(2016)04-0019-01