綿羊母羔多胎基因（FecB）檢測技術應用要點*

張云生*，姚曉鵬，周平，王新華，劉守仁

（1.新疆農墾科學院畜牧獸醫研究所，新疆石河子832000；2.新疆惠達農牧業科技有限公司）

綿羊母羔多胎基因（FecB）檢測技術應用要點*

張云生1*，姚曉鵬2，周平1，王新華1，劉守仁1

（1.新疆農墾科學院畜牧獸醫研究所，新疆石河子832000；2.新疆惠達農牧業科技有限公司）

小片斷法高分辨率熔解曲線（SA-HRM）技術檢測綿羊多胎FecB基因具有準確、高效、自動化程度高等特點，可以在短時間內實現大規模群體多胎基因檢測的目的。近兩年已推廣應用于兵團和自治區的多家肉羊養殖場及育種場的8 000多只綿羊，明顯提高了多胎綿羊及其雜交后代的產羔率，產生了顯著的經濟效益，是目前多胎綿羊養殖過程中不可缺少的關鍵性技術。為盡快利用本項技術為新疆及兵團肉羊產業發揮提質增效作用，本文就SA-HRM基因分型技術在肉羊養殖實際生產中的推廣應用經驗及要點進行了概述。

綿羊；母羔多胎鑒定；FecB；SA-HRM

綿羊屬單胎哺乳類動物，但有些綿羊品種卻具有能夠穩定遺傳的多胎性狀，FecB基因是目前已知的綿羊高繁殖力主效基因。我國的小尾寒羊和湖羊的產羔率分別為270%、250%，其攜帶的多胎FecB基因是決定個體多胎性狀的主要因素。在小尾寒羊、湖羊的雜交后代群體中，均能檢測到攜帶多胎FecB基因的個體，多胎FecB基因純合型（BB）母羊個體產羔率約為250%，雜合型（B+）母羊個體產羔率約為200%，因此，通過多胎基因檢測鑒定，可有效區分純合型（BB）、雜合型（B+）以及野生型（++）的母羊個體[1]，以檢測結果為依據對生產母羊群體實行多胎性能整群，將有效、精準的增加群體的繁殖力，可快速提高兵團肉羊業的生產水平和科技含量。

利用小片斷法高分辨率熔解曲線（SA-HRM）技術我們成功建立了簡單、快速、準確的綿羊多胎FecB基因鑒定技術體系。在肉羊養殖實際生產中，很短時間內就可實現大規模綿羊群體多胎性檢測。采用本項技術能夠實現綿羊母羔早期多胎性狀鑒定，最早在母羔出生后1月齡以內，就可采血鑒定多胎FecB基因，在生產實際中提前2年就能完成對生產母羊個體的多胎性選留，對未攜帶多胎FecB基因的羔羊及時淘汰育肥，可以節省約2年的飼養管理成本[2]。及時鑒別現有生產母羊群體中個體間多胎性能差異，盡早淘汰產單胎的母羊個體，使多胎生產母羊群保持較高水平的繁殖性能，達到止損、增效的目的。目前，新疆從山東、江蘇、浙江引進的小尾寒羊和湖羊純種群體中有5%～10%的母羊個體未攜帶多胎FecB基因；而從內蒙、甘肅引進的小尾寒羊、湖羊雜交后代中約有25%的母羊個體未攜帶多胎FecB基因，使群體多胎性能大大降低，利用綿羊多胎FecB基因檢測技術及時淘汰低產個體，有利于節省成本，有效降低多胎肉羊養殖風險。

1　樣品采集要求

1.1綿羊個體選擇

多胎基因檢測對象主要為小尾寒羊、湖羊個體，以及其雜交后代綿羊個體，不針對山羊樣品進行檢測；要求被檢測的公、母羊個體康健，無人畜共患疾病（如結核、布魯氏桿菌病等）；大、小羊只常年均可采樣進行送檢。

1.2樣品采集

用含抗凝劑的采血管采集血液樣品3～4 mL，將血液樣品顛倒混勻6～8次，確保血液與抗凝劑充分混合、不發生凝血；記錄羊耳號和對應的血樣號，不同的樣品之間不能相互污染；樣品采集后及時放入-20℃保存；4℃條件下運輸，24 h內到達不影響檢測結果。

1.3多胎基因檢測

被送檢樣品要求樣品號標記準確、字跡清晰；采樣管上的號應與記錄號一致；樣品保存完好，無破損和滲出；無變質、降解情況發生。

2　多胎基因檢測步驟

2.1儀器及試劑

LightCycler 480Ⅱ熒光定量PCR儀（德國羅氏），Taq DNA聚合酶、10×Buffer、dNTP（天根生物技術有限公司生產），引物由上海英濰捷基生物技術有限公司合成。

2.2多胎基因擴增程序

PCR擴增程序：95℃預變性3 min；95℃30 s，55℃60 s，循環數為35次。HRM分析程序：95℃變性5 min，40℃冷卻2 min；75～95℃收集熒光信號，每秒鐘收集25次信號。利用LightCycler 480自帶軟件分析數據。

2.3FecB基因檢測與產羔情況分析

利用綿羊多胎基因檢測技術，可實現公、母羊多胎基因純合型（BB）、雜合型（B+）的精準選配，能夠大量、穩定生產攜帶有多胎FecB基因的雜交后代。頭胎有50%的個體產單羔，2～6胎產雙羔；多胎母羊在配種前要保證足夠的營養供給，維持良好的體況；在多胎母羊妊娠3～4個月和產羔后需要加強營養，以滿足母羊妊娠及哺乳雙羔對營養的需求。

3　經濟效益

3.1節約成本

利用多胎基因檢測技術，選擇多胎性好的種公羊個體，通過多胎雜交導入提高群體中多胎FecB基因的比例，使群體的產羔率增加，有效增加群體的繁殖性能，節省大量引進多胎生產母羊的費用；對羔羊進行早期鑒定，提前2年進行后備母羊的選留，節省大量的飼養管理成本。

3.2增收增效

應用綿羊多胎基因檢測技術和精準選配技術，實行種公羊、生產母羊的個體選留和選配，將提高群體產羔率30%～50%，每只羔羊凈利潤按300元計算，以戶均養殖母羊100只計算，每年增加的凈收益為1.2萬元，經濟效益十分可觀。綿羊多胎基因檢測技術的應用和實施，有效提高了農區和半農半牧區肉羊養殖的生產效益，也為羔羊育肥、羊肉加工企業提供了更多的羊源，增加了市場上羊肉的供給，有效緩解羊肉價格上漲。

4　注意事項

（1）對檢測為攜帶多胎FecB基因的綿羊個體，同時需要參考其它性狀，如體格大小、產肉、泌乳等性能，從而綜合評價個體生產性能，決定個體的生產利用價值；（2）在舍飼飼養條件下，多胎生產母羊群能夠充分發揮高繁殖力特性，羔羊成活率也會得到很大提高。

[1]張云生，京勇.新疆建立綿羊分子育種和繁育體系的研究分析，草食家畜，2014，169（6）：15-21.

[2]張云生，張萬順.阿寒多胎雜交羊群體生產性能初步研究，新疆農墾科技，2016，39（2）：32-34.

聲明

本刊2015年第10期第57頁“膜下滴灌鹽堿土改良劑在棉花上的應用研究”一文的作者“張德林”應為“張得林”，特此聲明。

《新疆農墾科技》編輯部

2016—09—27

兵團重大科技項目“良種肉羊繁育與雜交配套技術體系集成與示范”（2013AA003-001）；兵團國際科技合作計劃項目“基于血漿DNA開發牛、羊妊娠診斷及FecB基因高效分型技術研究”（2014BC003）。

張云生（1976-），男，副研究員，博士，研究方向為綿羊育種。E-mail：xmszys@163.com。