高效液相色譜法測定咳特靈片中牡荊素含量

韋建喬

（廣西壯族自治區河池食品藥品檢驗所，廣西 河池 574000）

高效液相色譜法測定咳特靈片中牡荊素含量

韋建喬

（廣西壯族自治區河池食品藥品檢驗所，廣西 河池 574000）

目的建立測定咳特靈片中牡荊素含量的高效液相色譜法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Agilent SB－C18柱(250 mm× 4．6 mm，5 m)，流動相為乙腈－0．2%醋酸水溶液（14∶86），流速為1．0 mL／min，檢測波長為340 nm，柱溫為30℃。結果牡荊素質量濃度在0．071 3～0．428 g／L范圍內與峰面積呈良好線性關系（r＝0．999 7），平均回收率為97．84%，RSD＝1．01%(n＝5)。結論所建立的方法簡便、準確、重復性好，可用于咳特靈片的含量測定。

含量測定；牡荊素；高效液相色譜法；咳特靈片

小葉榕，也稱雅榕 Ficus concinna(Miq．)Miq．，榕屬植物，根、葉、果實可入藥，具有清熱、解表、化濕功效，用于流行性感冒、瘧疾、支氣管炎、急性腸炎、細菌性痢疾、百日咳以及瘀血阻脈所致的胸痹，癥見胸悶憋氣、心前區刺痛[1]。其化學成分主要含黃酮類化合物牡荊素，牡荊素主要藥理作用為抗炎、抑菌、解痙、抗癌[2]。咳特靈片主要由小葉榕干浸膏制成，具有鎮咳、祛痰、平喘、消炎功效，主治咳喘及慢性支氣管炎[3]。目前，尚未見測定咳特靈片中牡荊素含量的報道[4－10]。為此，筆者建立了采用高效液相色譜法對方中牡荊素進行含量測定的方法，現報道如下。

1 儀器與試藥

安捷倫1260型高效液相色譜儀；AUW220D型電子分析天平；KQ－400KDB型高功率數控超聲波清洗器。牡荊素對照品（供含量測定用，批號為111687－200602，中國食品藥品檢定研究院）；咳特靈片（批號150101，150102，150103，廣西潤達制藥有限公司）；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Agilent SB－C18柱(250 mm×4．6 mm，5 μm)；流動相：乙腈 －0．2%醋酸水溶液（14∶86）；流速：1．0 mL／min；檢測波長：340 nm；溫度：30℃，進樣量：20 μL。在擬訂色譜條件下，牡荊素峰的保留時間約為22 min，理論板數為16 833，與相鄰峰的分離度為大于1．5，拖尾因子為1．05。供試品溶液與對照品溶液在同一保留時間有相同的波峰出現，而陰性對照品溶液則無相應的峰，陰性對照品無干擾，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

精密稱取牡荊素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含23．78 μg的溶液，即得對照品溶液。取樣品10片，研細，取約 0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加60%甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲波振蕩15 min，放冷，再稱定質量，用60%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。制備不含小葉榕的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2．3 方法學考察

線性關系考察：取牡荊素對照品適量，分別配制成質量濃度為0．071 3，0．142 7，0．214 0，0．285 4，0．356 7，0．428 0 g／L標準液，按擬訂色譜條件注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積(Y)為縱坐標、質量濃度(X)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y＝2 385 329．736 5X－13639．413 0，r＝0．9997(n＝6)。結果表明，牡荊素質量濃度在0．071 3～0．428 g／L范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗：取同一牡荊素對照品溶液，連續進樣6次，測定牡荊素的峰面積。結果的 RSD為 1．46% (n＝5)，表明儀器精密度良好，詳見表1。

穩定性試驗：取同一供試品（批號為150101）溶液，分別于制備后0，2，4，6，8，12，24 h時測定牡荊素峰面積。結果的 RSD為1．34%（n＝7)，表明供試品溶液在24 h內穩定，詳見表2。

表1 精密度試驗結果

表2 穩定性試驗結果

重復性試驗：對同一批（批號為150101）樣品5份，按供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂色譜條件平行測定，按外標法計算含量。結果平均含量為0．156 mg／g，RSD為2．17%(n＝5)，表明方法的重復性較好，詳見表3。

表3 重復性試驗結果

加樣回收試驗：取已知含量的供試品約0．25 g（批號為150101），共5份，分別精密加入牡荊素對照品溶液（質量濃度0．05 g／L）1 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液，分別進樣測定，按外標法計算出含量，計算回收率。結果見表4。

表4 牡荊素加樣回收試驗結果(n＝5)

2．4 樣品含量測定

取3批樣品（批號分別為150101，150102，150103）依法測定，計算含量，結果見表5。

表5 樣品含量測定結果（n＝3)

3 討論

3．1 提取溶劑試驗

對不同溶劑提取樣品進行考察，取供試品共6份，每份0．5 g，置具塞錐形瓶中，分別加入乙醇、甲醇、30%乙醇、30%甲醇、60%乙醇、60%甲醇，各25 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定。結果60%甲醇溶液提取時得到的含量高，故選擇60%甲醇溶液為提取溶劑。

3．2 提取時間試驗

對提取時間進行考察，取供試品共4份，每份0．5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25 mL，稱定質量，分別超聲15 min，30 min，1 h，2 h，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定。結果超聲15 min，30 min，1 h，2 h的提取率相當，表明超聲15 min基本可以將樣品中的牡荊素提取完全，故選擇超聲時間為15 min。

[1]國家中醫藥管理局《中華本草》編委會．中華本草[M]．上海：上海科學技術出版社，1999：1 034－1 036．

[2]孫文基．天然活性成分簡明手冊[M]．北京：中國醫藥科技出版社，1998：597．

[3]WS3－B－2743－97．中藥成方制劑(第十四冊)[S]．

[4]張 鋒．大鼠血漿中牡荊素鼠李糖苷的質量濃度測定[J]．中國藥業，2010，19(12)：33－34．

[5]王兆龍，楊 蕾，孫 爽．咳特靈膠囊質量標準研究[J]．中國藥業，2007，16（13）：16－17．

[6]鐘 英，楊尚軍，王 菊，等．高效液相色譜法測定山楂葉總黃酮中牡荊素含量[J]．時珍國醫國藥，2000，10（11）：26－28．

[7]羅婭君，邊清泉，陳 佳，等．高效液相色譜法測定牡荊中牡荊素含量[J]．廣西植物，2011，31（3）：418－421．

[8]楊冬梅，楊世友．高效液相色譜法測定復方葛酮顆粒中葛根素含量[J]．中國藥業，2010，19(5)：19－20．

[9]曹 健，王 芳，陳 琳，等．高效液相色譜法測定眩痛定膠囊中延胡索乙素含量[J]．中國藥業，2010，19（3）：26－27．

[10]馬春婷，李紅艷，鄧智懷．高效液相色譜法測定咳特靈片中馬來酸氯苯那敏含量[J]．中國藥業，2008，17(15)：39－40．

Content Determination of Apigenin8－C－glucoside in Keteling Tablets by RP－HPLC

Wei Jianqiao
(Guangxi Hechi Food and Drug Control,Hechi,Guangxi,China 574000)

Objective To establish an HPLC method for determination the content of Apigenin8－C－glucoside in Keteling tablets．M ethods HPLC method was used．The column type was Agilent SB－C18(250 mm×4．6 mm,5 μm)．The mobile phase was acetonitrile－0．2%acetic acid(14∶86)．The flow rate was 1．0 mL／min．The detective wavelength was 340 nm and column temperature was 30℃．Results The linear range of quercetin was 0．713－0．428 g／L(r＝0．999 7),the average recovery was 97．84% and the RSD＝1．01%(n＝5)．Conclusion The method is simple and accurate,and can be used reliably for the quality control of Apigenin8－C－glucoside．

content determination;apigenin8－C－glucoside;HPLC;Keteling Tablets

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)05－0057－03

2015－07－13)