高效液相色譜－電噴霧檢測器法測定貞芪扶正顆粒中黃芪甲苷含量

梁慧敏，歐 妮

（廣西壯族自治區梧州食品藥品檢驗所，廣西 梧州 543002）

高效液相色譜－電噴霧檢測器法測定貞芪扶正顆粒中黃芪甲苷含量

梁慧敏，歐 妮

（廣西壯族自治區梧州食品藥品檢驗所，廣西 梧州 543002）

目的建立測定貞芪扶正顆粒中黃芪甲苷含量的高效液相色譜－電噴霧檢測器(HPLC－CAD)法。方法采用ZORBAX Eclipse Plus C18柱（100 mm×4．6 mm，3．5 m），檢測器為電噴霧檢測器，霧化溫度為35℃，載氣N2，壓力63．6 psi，柱溫40℃。結果黃芪甲苷進樣量在0．286～2．86 g范圍內與峰面積對數值線性關系良好（r＝0．999 8），平均回收率為99．14%，RSD為0．42%（n＝9)，陰性對照無干擾。結論該方法操作簡便，靈敏度高，方法可靠，結果準確，重復性好，可作為貞芪扶正顆粒質量控制的方法。

貞芪扶正顆粒；黃芪甲苷；高效液相色譜－電噴霧檢測器法

貞芪扶正顆粒的主要成分為黃芪、女貞子，藥理作用是提高人體免疫功能，保護骨髓和腎上腺皮質功能，可用于各種疾病引起的虛損，配合手術、放射、化學治療時促進正常功能的恢復。衛生部頒藥品標準中對貞芪扶正顆粒的質量控制以黃芪甲苷為指標，采用薄層掃描法測定含量，其前處理步驟繁雜，方法耗時，重復性差，可行性不佳。為了更好地控制其質量，保證該品種的臨床療效，本研究中采用高效液相色譜－電噴霧檢測器(HPLC－CAD)法同時對制劑中黃芪甲苷進行了含量測定，簡化了提取條件，方法準確、簡便、快速。

1 儀器與試藥

液相雙三元Thermo－U3000，BP211D型電子分析天平。黃芪甲苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110781－200613，含量為95．8%）；貞芪扶正顆粒(通化神源藥業有限公司，批號為20140220，規格為每袋5 g)；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18柱（100 mm× 4．6 mm，3．5 μm）；流動相：乙腈－水（32∶68）[1]；流速：1．0 mL／min；檢測器為電噴霧檢測器，霧化溫度為35℃；載氣：N2，壓力63．6 psi；柱溫：40℃。在此條件下，黃芪甲苷峰與鄰峰基線分離良好，理論板數不低于8 000[2]。在對照品溶液色譜主峰位置上，供試品溶液具有保留時間相同的色譜峰，陰性對照品溶液則無此峰，表明樣品中其他成分對黃芪甲苷的測定無干擾。色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

稱取黃芪甲苷對照品18．66 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成黃芪甲苷對照品貯備溶液（質量濃度為1．787 6 g／L）；再精密量取2 mL，置25 mL容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，制成對照品溶液（質量濃度為0．143 0 g／L）。

取貞芪扶正顆粒10袋，研成細粉，稱取樣品約5 g，加水40 mL溶解，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇溶液振搖提取3次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用氨試液提取2次，每次20 mL，棄去氨試液，正丁醇液蒸干[3－5]，殘渣加甲醇溶解，轉移至25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0．22 μm濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

按處方工藝制得不含黃芪的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

線性關系考察：精密量取黃芪甲苷對照品溶液（質量濃度為0．143 0 g／L）2，5，10，15，20 μL進樣，以進樣量對數值（X）為橫坐標、對照品平均峰面積對數值（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y＝1．505 21 X＋5．586 95，r＝0．999 8（n＝5）。結果表明，黃芪甲苷進樣量在0．286～2．86 μg范圍內與峰面積對數值呈良好線性關系。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗：精密量取同一對照品溶液10 μL，重復進樣6次依法測定。結果的 RSD為1．1%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，于配制后0，2，4，6，8 h時分別量取10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積。結果的 RSD分別為1．1%，0．95%（n＝5），表明供試品溶液在8 h內穩定。

重復性試驗：稱取貞芪扶正顆粒細粉，照2．2項下方法共制備6份供試品溶液，分別取10 μL注入液相色譜儀，以峰面積外標法測定含量。結果黃芪甲苷平均含量為0．444 mg／g，RSD為1．5%（n＝6）。

加樣回收試驗：精密稱取已知含量的貞芪扶正顆粒細粉(黃芪甲苷含量為0．444 mg／g)共6份，加入黃芪甲苷對照品溶液（質量濃度為0．143 0 g／L）7．5 mL，照2．2項下方法處理后，各取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積外標法測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗結果（n＝9）

2．4 樣品含量測定

取3批樣品，依法測定含量。結果批號為20140220，20140322，20140510的樣品中黃芪甲苷含量分別為每袋2．3，2．2，2．1 mg。

3 討論

本試驗中提取方法所用到的氨試液，主要是去除到顆粒劑中的極性成分如糖類等，減少基質干擾，增加了系統分離能力。關于正丁醇提取次數的選擇，供試品在其他相同條件下，用水飽和的正丁醇振搖提取2，3，4次，結果表明，用供試品提取2次與3，4次有較大差異，而3，4次時黃芪甲苷含量無明顯差異，故選擇用水飽和的正丁醇溶液振搖提取3次。

關于流動相的選擇，參考2010年版《中國藥典（一部）》黃芪中黃芪甲苷項下的溶劑，經過試驗不同流動相的比例(30∶70，32∶68，35∶65)，結果流動相為乙腈 －水（32∶68）可同時將黃芪甲苷峰和其他雜質峰分離，且分離效果較好，無干擾，故選用該流動相。

本試驗中采用的電噴霧式檢測器（CAD）是一款通用檢測器，可檢測任何非揮發性和部分半揮發性物質，重復性好，回收率高，結果可靠，可作為黃芪制劑的質量控制方法[6－9]。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010：283．

[2]李效寬，張艷海，馮天輝，等．在線固相萃取法結合電霧式檢測器測定黃茂及其復方中黃茂甲普的含量[J]．分析化學，2014，42（12）：1 791－1 796．

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[4]李欣榮，吳愛英，宿 潔．高效液相色譜－蒸發光檢測法測定八寶顆粒中黃芪甲苷含量[J]．中國藥業，2010，19（11）：28－29．

[5]仝立國，梁瑞敏，馮瑪莉，等．HPLC－ELSD測定芪苓益肝顆粒中黃芪甲苷[J]．中國實驗方劑學雜志，2010，16（13）：72－74．

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[8]張 彤，黃順旺．HPLC－ELSD測定前列舒樂顆粒中的黃芪甲苷[J]．中國實驗方劑學雜志，2011，17（7）：82－83．

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Content Determination of Stachydrine Hydrochloride in Zhengqifuzheng Granules by HPLC－CAD

Liang Huimin,Ou Ni
(Guangxi Wuzhou Institute for Food and Drug Control,Wuzhou,Guangxi,China 543002)

Objective To establish an HPLC－CAD method for the determination of Stachydrine Hydrochloride in Zhengqifuzheng Granules．M ethods A ZORBAX Eclipse Plus C18Column(100 mm×4．6 mm,3．5 μm)was used．Detector was CAD,with evaporation temperature at 35℃,N2as Carrier gas,pressure at 63．6 psi,Column temperature at 40℃．Results Stachydrine Hydrochloride showed good linear range within 0．286－2．86 μg(r＝0．999 8)．The average recovery was 99．14%,RSD＝0．42%(n＝9)．The negative sample had no interference．Conclusion s This method is simple,feasible and reproducible．The result was reliable and accurate．It can be used for the quality control of Zhengqifuzheng Granules．

Zhengqifuzheng Granules;stachydrine hydrochloride;HPLC－CAD

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)05－0055－03

梁慧敏（1981－），大學本科，主管藥師，主要從事藥品檢驗工作，（電話）0774－3823896（電子信箱）13637823＠qq．com。

2015－10－14；

2015－11－20)