姬松茸多糖對糖尿病大鼠血清炎癥因子和免疫功能的影響

呂　娟　白　甫　曹蘭秀

(陜西中醫藥大學中藥教研室，陜西　咸陽　712046)

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姬松茸多糖對糖尿病大鼠血清炎癥因子和免疫功能的影響

呂娟白甫曹蘭秀1

(陜西中醫藥大學中藥教研室，陜西咸陽712046)

摘要〔〕目的探討姬松茸多糖對糖尿病(DM)大鼠血清炎癥因子和免疫功能的影響。方法成年大鼠48只，按DM大鼠模型建模，按質量分層隨機分為對照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組12只，分別以生理鹽水、240 mg/kg、300 mg/kg和375 mg/kg濃度姬松茸多糖灌胃給藥，持續1 w，末次給藥2 h后處死大鼠，對比觀察四組一般情況、體重和血糖、脾臟指數、胸腺指數、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、腫瘤壞死因子(TNF)-α、C反應蛋白(CRP)和白細胞介素(IL)-6。結果中藥各劑量組體重均較對照組顯著增加，血糖顯著降低(P<0.05)，且隨著給藥劑量的增加，體重增加和血糖降低的更顯著(P<0.05)；中藥各劑量組脾臟指數、胸腺指數均較對照組增加，其中中劑量組和高劑量組顯著高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)； 中藥各劑量組CD4+、CD8+均較對照顯著增加(P<0.05)，且高劑量組CD4+、CD8+均顯著高于低劑量組，中劑量組CD4+顯著高于低劑量組，差異有統計學意義(P<0.05)；中藥各劑量組炎癥因子TNF-α、CRP和IL-6均較對照組顯著降低(P<0.05)，且隨著給藥劑量的增加，炎癥因子TNF-α、CRP和IL-6降低越明顯(P<0.05)。結論姬松茸多糖能改善DM大鼠臨床癥狀，降低血糖和炎癥反應，增強免疫功能。

關鍵詞〔〕姬松茸多糖；糖尿病；炎癥因子；免疫功能

1方劑教研室

第一作者：呂娟(1977-)，女，在職碩士，講師，主要從事中藥學的教學工作，中西醫結合臨床治療糖尿病研究。

姬松茸是一種食藥兼用的珍稀蕈菌〔1〕，其所含的多糖在增強機體免疫功能、抗腫瘤、抗病毒、補腎護肝等方面均具有作用，具有廣泛的藥理活性〔1～4〕。多往對姬松茸多糖在糖尿病(DM)方面的研究較少，本研究通過建立DM大鼠模型，探討了姬松茸多糖不同給藥劑量對DM大鼠體重、血糖、炎癥因子腫瘤壞死因子(TNF)-α、C反應蛋白(CRP)、白細胞介素(IL)-6及免疫功能的影響。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物8周齡成年大鼠48只，雌雄各半，體重220～240 g，由第四軍醫大學動物實驗室提供。

1.1.2姬松茸多糖由陜西中醫藥大學中藥教研室自制姬松茸多糖，制作工藝步驟為：姬松茸粗多糖溶液制備、截留率膜超濾、截留液過陰陽離子樹脂交換柱、凍干后得姬松茸多糖蛋白多糖精粉、根據要求配置濃度。

1.1.3其他試劑和儀器鏈脲佐菌素購自Sigma公司，AUY120電子分析天平購自日本島津公司，血糖試劑盒購自上海申索佑福醫學診斷用品有限公司，流式細胞儀由美國Beckman Coulter公司提供，TNF-α、CRP和IL-6酶聯免疫試劑盒購自上海寶曼生物科技有限公司。

1.2方法

1.2.1建模禁食12 h，一次性腹腔注射60 mg/kg滅菌鏈脲佐菌素。3 d后隨機3次測量血糖，血糖≥16.7 mmol/L即為DM大鼠模型建模成功。

1.2.2分組和給藥按質量分層隨機分為對照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組12只，分別以生理鹽水、240 mg/kg、300 mg/kg和375 mg/kg濃度姬松茸多糖灌胃給藥，1次/d，持續1 w，末次給藥2 h后處死大鼠。

1.3觀察指標一般情況：包括大鼠癥狀、建模是否成功以及死亡情況。體重和血糖：末次給藥前禁食12 h，末次給藥2 h后處死前稱體重，測量血糖水平。脾臟指數、胸腺指數:處死大鼠并解剖，摘取胸腺和脾臟，擦干表面殘留血跡，用天平稱其重量。脾臟指數和胸腺指數：臟器質量(mg)/體重量(g)的比值。免疫功能指標:處死前眼球后靜脈叢毛細管取血，肝素抗凝，流式細胞儀測定CD4+、CD8+，計算CD4+/CD8+。炎癥因子:取血方法同上，離心取上清液，炎癥因子TNF-α、CRP和IL-6均采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定。

1.4統計學方法采用SPSS20.0軟件進行t檢驗。

2結果

2.1一般情況四組均建模成功，大鼠均表現出“三多一少”、反應遲緩、精神萎磨、毛豎而晦暗、弓背蛇體等DM癥狀。對照組和高劑量組各死亡1只，中劑量組死亡2只。

2.2四組體重和血糖比較中藥各劑量組體重均較對照組顯著增加，血糖顯著降低(P<0.05)，且隨著給藥劑量的增加，體重增加和血糖降低的更顯著(P<0.05)。見表1。

2.3四組脾臟指數、胸腺指數比較中藥各劑量組脾臟指數、胸腺指數均較對照組增加，其中中劑量組和高劑量組顯著高于對照組(P<0.05)。見表2。

表1　四組體重和血糖比較±s)

與對照組比較:1)P<0.05；與低劑量組比較，2)P<0.05；與中劑量組比較:3)P<0.05；表3，表4同

表2　四組脾臟指數、胸腺指數比較(mg/g)

與對照組比較:1)P<0.05

2.4四組免疫功能指標比較中藥各劑量組CD4+、CD8+均較對照顯著增加(P<0.05)，且高劑量組CD4+、CD8+均顯著高于低劑量組，中劑量組CD4+顯著高于低劑量組(P<0.05)，四組CD4+/CD8+比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3　四組免疫功能指標比較±s)

2.5四組炎癥因子比較中藥各劑量組炎癥因子TNF-α、CRP和IL-6均較對照組顯著降低(P<0.05)，且隨著給藥劑量的增加，炎癥因子TNF-α、CRP和IL-6降低越明顯(P<0.05)。見表4。

表4　四組炎癥因子比較±s)

3討論

DM是臨床最常見的內分泌疾病，主要以糖脂代謝紊亂為特征。DM臨床主要表現為高血糖，出現多飲、多尿、多食以及消瘦“三多一少”癥狀。胰島素分泌缺陷或(和)其生物作用受損是DM發病的主要原因，受環境和遺傳共同作用〔5〕。DM患者長期處于高血糖狀態，會引起各種組織出現慢性損害和功能障礙，嚴重威脅患者身體健康。DM的發病機制尚未完全闡明，近年來有研究認為炎癥反應和免疫功能紊亂會加速DM發展，加重病情〔6〕。DM傳統治療方法以控制血糖為主，效果不盡如人意，抗感染和免疫調節可能成為DM治療的新思路，是近年來研究的熱點話題。

從姬松茸子實體中提取的姬松茸多糖，是一種具有芳香氣味和多種藥理功效的活性成分。姬松茸多糖藥理活性廣泛，在增強機體免疫功能、抗腫瘤、抗病毒、補腎護肝等方面均具有作用〔1～4〕，然而其在降血糖方面的作用一直未明確。本研究結果表明，姬松茸多糖具有降血糖的作用且給藥劑量越大，降血糖效果越明顯。胰島素吸收缺失和胰島素抵抗是DM損害的重要原因，保護胰島β細胞、消除胰島素抵抗是治療DM的關鍵。姬松茸多糖降血糖的可能機制為〔7〕：松茸多糖能促進胰島素的排泄，并增強胰島素的愚鈍性，從而遏制胰島細胞對高血糖素的吸收，另外，姬松茸多糖還能加速葡萄糖肝內代謝，保護胰島β細胞。

免疫功能紊亂在DM的發生和發展中起著重要作用，免疫器官重量能一定程度上反映機體非特異性免疫功能，脾臟中富含巨噬細胞和B淋巴細胞，能有效抵抗外來致病因素，參與了免疫反應中；胸腺能分泌胸腺素和產生T淋巴細胞，發揮細胞免疫調節功能。T細胞包括不同的亞群，CD4+、CD8+是T細胞中最主要的兩類，正常情況下，CD8+、CD4+兩類T細胞處于動態平衡狀態，發揮特異性細胞免疫和免疫調節功能，DM發生時，平衡被打破，細胞免疫功能下降、免疫調節失衡，容易引起感染。本研究結果表明，姬松茸多糖還具有增強免疫功能的作用，且給藥劑量越大，增強免疫功能效果越明顯。

有學者發現〔8〕，高濃度炎癥因子會加重DM病程和增加并發癥發生的風險。TNF-α、CRP和IL-6是三種常見的炎癥因子，本研究結果表明，姬松茸多糖還具有抗感染效果，且給藥劑量越大，抗感染效果越明顯。姬松茸多糖可能的抗感染機制為〔9〕：姬松茸多糖能抑制前列腺素E的生物合成和釋放，且能抑制緩激肽、5-羥色胺和組胺等癥介質的生成和釋放。

參考文獻4

1葛紅霞,廖偉.姬松茸及其多糖的研究進展〔J〕.畜牧獸醫科技信息,2012；5(1):4-5.

2王麗娟,張彥青,王勇，等.姬松茸多糖增強免疫作用及急性毒性研究〔J〕.食品科學,2014；35(13):258-61.

3崔立然,王桂梅,孫立冬，等.低分子量姬松茸多糖的免疫活性研究〔J〕.中醫藥信息,2013；30(2):10-3.

4周嵐,黃云超,任宏軒，等.姬松茸多糖聯合硒對肺癌惡病質小鼠營養和免疫的影響〔J〕.衛生研究,2013；42(6):1018-20.

5楊瑋,張寅飛,湯明明，等.中老年糖尿病患者中篩查成年人遲發性自身免疫性糖尿病的臨床線索〔J〕.中國老年學雜志,2014；34(23):6586-7.

6亓濤.中藥干預糖尿病炎癥因子保護胰島β細胞功能的臨床及實驗研究〔D〕.濟南：山東中醫藥大學碩士論文,2010.

7楊旭東,張杰,申梅淑.姬松茸多糖對2型糖尿病大鼠代謝及抵抗素基因表達的影響〔J〕.中國食物與營養,2010；16(1):74-6.

8盛志新,謝丹紅.炎癥與2型糖尿病的關系〔J〕.新醫學,2008；39(5):345-7.

9門繼光,金哲悟,齊鵬,等.姬松茸多糖對哮喘模型小鼠氣道炎癥和Th2類細胞因子水平的影響〔J〕.延邊大學醫學學報,2014；37(2):95-7.

〔2015-05-16修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

中圖分類號〔〕R587.1〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2016)01-0044-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.020