產前診斷89例羊水細胞染色體異常核型分析▲

吳漢鋒 梁景欣

(廣西貴港市婦幼保健院遺傳實驗室，貴港市 537100，E-mail：302806790@qq.com)

臨床創新

產前診斷89例羊水細胞染色體異常核型分析▲

吳漢鋒 梁景欣

(廣西貴港市婦幼保健院遺傳實驗室，貴港市 537100，E-mail：302806790@qq.com)

目的 分析妊娠中期高危孕婦羊水細胞染色體核型，減少異常染色體胎兒的出生，提高人口出生素質。方法 符合產前診斷指征的孕中期孕婦2 298例，在B超引導下行羊水穿刺，取羊水進行細胞培養及G顯帶染色體核型分析。結果 2 298例羊水細胞培養，檢出異常核型89例，染色體異常檢出率為3.87%，其中常染色體異常31例，性染色體異常14例，染色體多態性為44例。結論 孕中期高危孕婦進行羊水細胞分析能準確檢出染色體異常核型，降低染色體病胎兒的出生率，提高人口出生素質。

高危孕婦；孕中期；羊水細胞分析；染色體異常；核型；產前診斷

染色體病是染色體數目和結構發生異常而引發的疾病，是導致新生兒出生缺陷最多見的一類疾病。染色體病多表現為智力低下、多發畸形等，當前尚無完全根治染色體病的方法，進行產前診斷是減少染色體病發生的主要方法[1]，羊水細胞染色體核型分析是胎兒染色體檢測的金標準[2]。本文對2 289例中期妊娠孕婦的羊水細胞遺傳學分析，檢出染色體異常核型89例，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2012年4月至2016年2月在我院優生遺傳科門診就診，符合產前診斷指征的孕中期孕婦2 298例，在知情同意的情況下行羊膜腔穿刺。產前診斷指征包括：唐氏篩查高危、高齡妊娠、胎兒超聲檢查異常、父母雙方地貧攜帶者、不良孕產史等。年齡15～45歲，穿刺孕周為17～24周。

1.2 方法 術前對孕婦進行遺傳咨詢，簽署產前診斷術前知情同意書；穿刺前囑孕婦進行適當活動，以便獲得更多的羊水細胞。嚴格無菌消毒，在B超定位下行羊膜腔穿刺，先抽取2 ml羊水棄去不用，防止母體血污染，再抽取20 ml羊水，分別注入2個15 ml BD無菌離心管中，1 500 r/min離心10 min，留取約2 ml羊水沉淀細胞，分別加入5 ml培養基吹打均勻，接種于培養瓶中，置于37℃，5% CO2培養箱中靜置培養7 d后換液，觀察細胞生長情況于第8～10 d傳代，當細胞生長旺盛，羊水細胞平鋪培養瓶，即可進行收獲。培養液采用美國Irvine Scientific公司生產CHANG Medium C培養基和廣州白云山拜迪生物醫藥有限公司生產的一生駿培養基，接種和培養均采用雙人雙線平行操作。 收獲前加入秋水仙素2滴(20 μg/ml)繼續培養3 h，用細胞刮刮取羊水貼壁細胞倒入離心管中離心棄上清，加入KCl 0.075 mol/ml低滲液，37℃水浴12 min，預固定加入固定液2 ml，離心沉淀，加入固定液7 ml，輕輕混勻，靜置室溫30 min，再次離心加固定液至于4℃冰箱過夜。第2天取出離心，滴片，95℃烤箱烤1 h后進行G顯帶染色。

1.3 核型分析 利用全自動掃描系統計數20個分裂相，G顯帶分析5個核型，發現異常則加倍計數和分析。

2 結 果

2.1 一般情況 2 298例孕婦行羊水細胞培養，首次羊膜腔穿刺培養失敗5例，進行二次穿刺培養后均成功。檢出異常核型89例，異常檢出率為3.87%，其中常染色體異常31例，異常檢出率為1.35%；性染色體異常14例，異常檢出率為0.61%；染色體多態性為44例，異常檢出率為1.91%。見表1。

2.2 三體型分析 89例異常染色體核型中，檢出18例三體型，其中高齡妊娠9例，B超發現異常3例，唐氏篩查高危4例，其他指征2例，18例三體型產前診斷指征與妊娠結局見表2。

表1 89例羊水細胞染色體異常核型分布

表2 18例三體型產前診斷指征與妊娠結局

3 討 論

染色體病是導致新生兒出生缺陷最多見的一類遺傳性疾病，染色體病至今無法醫治，發病率相對較高，我國每年出生染色體異常的新生兒約10萬人，新生兒活嬰中染色體異常占0.5%[3]，要防止染色體病患兒的出生，在妊娠中期抽取羊水細胞進行染色體核型分析，是一項準確、安全的預防措施。三體型的發生與母親年齡密切相關，本文檢出三體型18例，其中≥35歲的高齡孕婦10例占55.5%(10/18)。其產生的原因是由于生殖細胞老化或受到某些因素的影響，在減數分裂時染色體發生不分離，當它與正常的精子或卵子結合，就會產生三體型[4]。本文18例三體型，其中11例三體型患者是高齡孕婦，因此，對高齡孕婦在妊娠中期進行產前診斷非常必要。

性染色體異常是人類染色體畸變的一種，主要包括數目和結構異常。數目異常有性染色體單體，主要為45，XO(Turner綜合征)；性染色體三體主要為47，XXY(克氏綜合征)；47，XYY(超雄綜合征)；47，XXX(超雌綜合征)。Turner綜合征又稱先天性卵巢發育不良，是最常見的性染色體疾病，在女性中發病率約為1/2 500，是女性原發性閉經的重要因素，引起X染色體異常原因是患者的雙親之一的細胞分裂過程中的X染色體不分離所致[5]。 47，XXY是以睪丸發育障礙和不育為主要特征，無生育能力，精液檢查無活動精子。部分患者智力發育低于正常，為輕度智能障礙。本文有14例性染色體異常，其中8例選擇終止妊娠；1例45，XO/46，Xi(X)兒宮內死亡；2例47，XYY繼續妊娠；3例Y倒位與父親核型相同選擇繼續妊娠。

染色體結構異常是指染色體或染色單體經過斷裂-重換或互換機制可產生染色體畸變及染色單體畸變。本文發現染色體結構異常15例，占異常核型的16.85%，主要有易位、染色體部分增加、缺失和倒位。檢出胎兒染色體結構異常，應建議雙親進行外周血染色體檢查，確定胎兒染色體異常來源[6]，若雙親染色體正常，B超提示胎兒未見異常情況，則建議繼續妊娠。本文15例結構異常有3例選擇終止妊娠，均為染色體片段增加，影響生長發育。

染色體多態性在普通人群中的發生率為2.6%[7]。本文染色體多態性44例，發生率為1.91%。在產前診斷核型分析中，多態性變異很常見，如inv(9)、ps+/pstk+、1/9/16qh+等都屬于正常變異，從分子水平上看異染色質所含DNA主要是非編碼的高度重復序列，不含有結構基因，沒有轉錄活性，因此認為異染色質是多余的，無特殊功能，無表型效應[8]。

染色體嵌合體是指同一個體內存在兩個或兩個以上不同細胞系。嵌合體分真性嵌合和假性嵌合，前者通常發生在合子形成后卵裂或胚胎正常發育早期，部分細胞同源染色體不分離或丟失；后者則來源于不同合子的兩個或兩個以上細胞系，染色體畸變隨機發生。Hsu等[9]報告羊水細胞培養中發現真性嵌合體為0.2%。本文6例嵌合體，同意進行臍帶血復查染色體核型的僅有3例，2例染色體核型與初次相符，1例染色體為正常核型。胎兒外不重要的細胞增殖、細胞體外培養畸變、染色體制片等多種因素均可導致假性嵌合體的發生[10]，因此羊水細胞培養建立兩個或兩個以上的獨立培養基，兩名技術人員分兩線進行操作和閱片，出現嵌合體現象時視具體情況增加細胞計數。不進行臍帶血穿刺的嵌合體核型應進行隨訪，尤其是性染色體的嵌合體，隨訪時間應延長至青春期[11]。

綜上所述，羊水染色體核型分析是檢查染色體異常和多態性的重要依據，對孕婦是否繼續妊娠具有重要的、決定性的指導意義[12]。對具有產前診斷指征者進行羊水染色體核型分析，是提高出生人口出生素質，控制和減少出生缺陷發生的有效措施。

[1] 張桂林,衛小靜,鄭梅玲.918例孕中期羊水細胞染色體核型分析[J].中華醫學遺傳學雜志,2012,29(1):102-103.

[2] 張 晶,李衛凱,謝志威,等.羊水細胞染色體核型分析在產前診斷中的應用價值[J].中國優生優育,2011,17(4):192-194.

[3] Nielsen J,Wohlert M.Chromosome abnormalities found among 34 910 newborn children:results from a 13-year incidence study in Arhus,Denmark[J].Hum Genet,1991,87(1):81-83.[4] 張麗芳,許 平,曾 艷,等.1 249例胎兒臍血染色體核型分析與產前診斷[J].中華醫學遺傳學雜志,2011,28(3):352-353.

[5] 葉文虎,趙壽元,李 璞.現代臨床遺傳學[M].第3版.合肥:安徽科學技術出版社,1996:274.

[6] 王素桂,沈七英,薛 虹,等.產前診斷胎兒染色體平衡易位的處理[J].北京醫學,1984,6(2):94-96.

[7] Shaw-Smith C,Redon R,Rickman L,et al.Microarray based comparative genomic hybridisation(array-CGH) detects submicroscopic chromosomal deletions and duplications in patients with learning disability/mental retardation and dysmorphic features[J].J Med Genet,2004,41(4):241-248.[8] 羅小金,胡 亮,楊 艷,等.615例產前診斷羊水染色體異常與多態性核型分析[J].中國優生與遺傳雜志,2015,23(5):37-39.

[9] Hsu LY,Kaffe S,Jenkins EC,et al.Proposed guidelines for diagnosis of chromosome mosaicism in amniocytes based on data derived from chromosome mosaicism and pseudomosaicism studies[J].Prenat Diagn,1992,12(7):555-573.

[10]段紅蕾,朱瑞芳,李 潔,等.產前羊水細胞診斷中真假嵌合體的鑒別[J].中國優生與遺傳雜志,2008,16(10):55-56.

[11]賈嬋維,王樹玉,高淑英,等.31例羊水染色體異常核型、B超檢查和產后隨訪分析[J].北京醫學,2004,26(1):38-39.

[12]甘 冰.羊水細胞遺傳學方法在產前診斷染色體疾病中的研究進展[J].中國傷殘醫學,2013,21(4):422-423.

廣西貴港市科學研究與技術開發項目(貴科攻1302004)

吳漢鋒(1977～)，女，本科，主管檢驗技師，研究方向：醫學細胞遺傳學。

R 714.5

A

0253-4304(2016)07-1001-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.07.32

2016-02-10

2016-05-05)