GP73、GPC3和AFP聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的探討*

朱 波，肖亞雄△，彭宇生，王 鵬，張文禮，樊建新，王開正

(1.四川省宜賓市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 644000；2.四川省宜賓市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科 644000；3.四川省宜賓市第一人民醫(yī)院普外科 644000；4.瀘州醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)系，四川 646000)

GP73、GPC3和AFP聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的探討*

朱 波1，肖亞雄1△，彭宇生1，王 鵬1，張文禮2，樊建新3，王開正4

(1.四川省宜賓市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 644000；2.四川省宜賓市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科 644000；3.四川省宜賓市第一人民醫(yī)院普外科 644000；4.瀘州醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)系，四川 646000)

目的 探討高爾基體蛋白73(GP73)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)和甲胎蛋白(AFP)聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌(PHC)診斷中的價(jià)值。方法 選取PHC患者194例，普通肝病組74例，其他腫瘤組患者70例和健康體檢者(健康對照組)80例進(jìn)行3項(xiàng)指標(biāo)的定量檢測和分析；AFP采用微粒子化學(xué)發(fā)光法，用美國雅培ARCHITECT i2000SR全自動化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行定量檢測；GP73和GPC3采用ELISA法作定量檢測。結(jié)果 PHC組血清GP73和GPC3水平均顯著高于普通肝病組、其他腫瘤組和健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；GP73、GPC3、AFP單獨(dú)及三者聯(lián)合檢測對診斷PHC的敏感度分別為：78.35%、53.09%、58.76%、94.85%，其受試者工作特征 (ROC)曲線下面積(AUC)分別為：0.89、0.74、0.75、0.96。結(jié)論 GP73、GPC3和AFP聯(lián)合檢測能提高PHC診斷的敏感度和診斷價(jià)值。

肝腫瘤；早期診斷；聯(lián)合檢測；高爾基體蛋白73；磷脂酰肌醇蛋白聚糖類；甲胎蛋白類

原發(fā)性肝癌(primary hepatic carcinoma，PHC)發(fā)病率位列全世界第五，在我國惡性腫瘤中位列第三，且在世界范圍內(nèi)發(fā)病率逐年上升[1]。發(fā)現(xiàn)時(shí)多為晚期，早診斷、早治療是提高PHC患者存活率的惟一途徑。目前臨床上最主要的診斷手段是定期檢測血清中甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)結(jié)合影像學(xué)檢查或超聲檢查等，但對慢性肝病基礎(chǔ)上較為常見的良性病變與小肝癌的鑒別仍較困難[2]，因此尋求新的更加敏感或特異的血清標(biāo)志物顯得越來越有必要。高爾基體蛋白73(golgi protein-73，GP73)和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3，GPC3)是近年來隨著基因技術(shù)和蛋白組學(xué)等技術(shù)發(fā)展而發(fā)現(xiàn)的最有希望成為新的PHC血清標(biāo)志物的物質(zhì)。國內(nèi)外一些研究報(bào)道顯示，GP73有優(yōu)于AFP的敏感性和特異度，GPC3的表達(dá)與腫瘤組織的分級及大小無關(guān)，與AFP無關(guān)聯(lián)性[3]。本研究旨在對GP73和GPC3對PHC的診斷價(jià)值進(jìn)行驗(yàn)證，同時(shí)對GP73、GPC3和AFP三者聯(lián)合檢測對PHC的診斷價(jià)值進(jìn)行探討。

1 資料與方法

1．1 一般資料 收集四川省宜賓市第一人民醫(yī)院2012年12月至2014年10月符合入選條件的患者338例，記錄姓名、性別、年齡、B超、CT、病理檢查等資料，按實(shí)驗(yàn)需求分為PHC組194例，其中男135例，女59例，年齡32～73歲，平均49.8歲，診斷符合衛(wèi)生部《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2011年版)》診斷標(biāo)準(zhǔn)，合并其他腫瘤者均排除；普通肝病組74例，其中男52例，女22例，年齡28～67歲，平均47.2歲；其他腫瘤組70例，其中男49例，女21例，年齡31～65歲，平均45.5歲；以上病例均來自消化內(nèi)科和普外科。健康對照組80例，其中男54例，女26例，年齡27～62歲，平均43.9歲，取自四川省宜賓市人民醫(yī)院體檢中心。

1．2 標(biāo)本采集、保存 所有病例于清晨6:00～7:00時(shí)，空腹采血5 mL，2 h內(nèi)離心分離血清2 mL，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1．3 檢測方法 AFP采用微粒子化學(xué)發(fā)光法，采用美國雅培ARCHITECT i2000SR全自動化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行定量檢測,儀器及相應(yīng)配套試劑均購自美國雅培公司。GP73和GPC3采用ELISA法作定量檢測，試劑購自北京熱景生物有限公司。

2 結(jié) 果

2.1 各組血清GP73、GPC3和AFP檢測結(jié)果及比較 見表1。

表1 各組血清GP73、GPC3和AFP檢測結(jié)果(±s,ng/mL)

a:P<0.05,與健康對照組比較;b:P<0.05，與其他腫瘤組比較;c:P<0.05,與普通肝病組比較。

2.2 GP73、GPC3和AFP單項(xiàng)及3項(xiàng)聯(lián)合檢測對PHC的診斷價(jià)值比較 按衛(wèi)生部《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2011年版)》,AFP取200 ng/mL為診斷臨界值；GP73據(jù)ROC曲線得最佳臨界點(diǎn)為175.5 ng/mL，GPC3據(jù)ROC曲線得最佳臨界值為0.385 ng/mL；血清GP73、GPC3和AFP單項(xiàng)指標(biāo)及3項(xiàng)聯(lián)合檢測對PHC的診斷價(jià)值見表2，其ROC曲線見圖1。就PHC診斷的敏感度而言，三者聯(lián)合檢測與GP73、GPC3、AFP單項(xiàng)檢測差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.99、42.56、33.45，均P<0.05)；就特異度而言，三者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.69、3.68、0.77，均P>0.05)，AUC三者聯(lián)合檢測高于各項(xiàng)單獨(dú)檢測，診斷價(jià)值明顯提高。

表2 血清GP73、GPC3和AFP單項(xiàng)及3項(xiàng)聯(lián)合檢測對PHC的診斷價(jià)值比較

a:P<0.05，與AFP比較;b:P<0.05，與GPC3比較;c:P<0.05,與GP73比較。

圖1 GP73、GPC3和AFP及3者聯(lián)合診斷PHC的ROC曲線

3 討 論

PHC因其發(fā)病率高，治療難度大，一般發(fā)現(xiàn)時(shí)多為中晚期，患者生存時(shí)間短而被廣泛重視。早發(fā)現(xiàn)、早治療仍是目前提高患者生存質(zhì)量，延長壽命最有效的方法。目前臨床上最主要的診斷手段是定期檢測血清AFP結(jié)合影像學(xué)檢查或超聲檢查等，但對慢性肝病基礎(chǔ)上較為常見的良性病變與小肝癌的鑒別仍較困難。AFP作為傳統(tǒng)肝癌標(biāo)志物，在直徑小于3 cm的小細(xì)胞肝癌往往不表達(dá)或低表達(dá)，而在其他良性肝病，如肝硬化、慢性肝炎等或其他腫瘤時(shí)也會出現(xiàn)升高[2]。有文獻(xiàn)表明AFP對PHC的診斷敏感度特別是早期患者不高，其敏感度在40%～65%不等，特異度在76%～96%不等[4]。因此尋求新的更加敏感或特異的血清標(biāo)志物或血清診斷模式顯得越來越有必要。理想的肝癌標(biāo)志物應(yīng)具有較高的特異度，能夠?qū)⒏伟┡c肝炎、肝硬化、肝臟再生結(jié)節(jié)等區(qū)分開來；同時(shí)還需要較高的敏感性，能夠在肝癌早期提示診斷，且有易于檢測、可重復(fù)、侵入少的特點(diǎn)。

GP73是存在于細(xì)胞高爾基體的一種跨膜蛋白。Kladney等[5]于2000年描述了在正常人體肝組織中，GP73主要由膽管上皮細(xì)胞表達(dá)，而肝細(xì)胞表達(dá)很少甚至不表達(dá)，肝細(xì)胞受到病毒感染或非病毒原因損害(酒精性肝病或自身免疫性肝炎)均可引起GP73的高表達(dá)。Block等[6]于2005年提出，在PHC患者血清中GP73水平顯著升高。1項(xiàng)包括352例患者的研究顯示，與肝硬化患者相比，PHC患者的血清GP73水平顯著升高，且對于早期PHC的診斷，GP73優(yōu)于AFP。在我國，2008年北京協(xié)和醫(yī)院肝臟外科的毛一雷等[7]研究結(jié)果顯示，GP73診斷PHC的敏感性為76.9%，特異性達(dá)到92.8%，這項(xiàng)研究在國內(nèi)初步揭示了檢測PHC患者GP73的高敏感度，GP73有可能成為我國臨床上一個(gè)新的、更有效的、PHC早期診斷標(biāo)志物。石玉玲等[8]，張祖平等[9]隨后的研究顯示將GP73與AFP聯(lián)合檢測能提高PHC的診斷敏感度，其敏感度在87%左右，特異性在90%左右。

GPC3 是一種硫酸類肝素蛋白多糖，1996年，Pilia等[10]通過對1例過度生長綜合征患者的研究發(fā)現(xiàn)：過度生長綜合征患者存在X：1轉(zhuǎn)位，并通過STSS-PCR(sequence-tagged sites)得到其cDNA，屬于glypican家族，命名為GPC3。GPC3通過糖基磷脂肽肌錨蛋白錨定在細(xì)胞表面，可結(jié)合肝素結(jié)合型蛋白如生長因子，調(diào)控著細(xì)胞生長、繁殖、分化、黏附和遷移等行為，還可能涉及抑制或調(diào)節(jié)大部分中胚層組織和器官的生長。國外研究表明，GPC3在絕大多數(shù)肝癌組織中高表達(dá)，而在正常肝組織及良性肝臟病變中不表達(dá)或低表達(dá)[11]。另外有研究證明，GPC3的表達(dá)與腫瘤組織的分級及大小無關(guān)，與AFP無關(guān)聯(lián)性，可以作為AFP的一個(gè)很好的補(bǔ)充[12-13]。

近年來，國內(nèi)有關(guān)GP73、GPC3的研究逐漸增多，且從單個(gè)指標(biāo)向聯(lián)合多個(gè)指標(biāo)檢測發(fā)展，但有關(guān)GP73、GPC3和AFP三者聯(lián)合診斷的研究較少。本研究對GP73、GPC3和AFP聯(lián)合檢測在PHC診斷中的價(jià)值進(jìn)行探討，以期得出PHC的一種新的診斷模式。在本研究中，GP73用于診斷PHC的敏感度為78.35%，特異度為94.20%，AUC為0.89，其診斷價(jià)值優(yōu)于AFP，而GPC3敏感度為53.09%，特異度為95.09%，其AUC為0.74，單獨(dú)用于診斷PHC其價(jià)值并未優(yōu)于AFP，但因其與AFP相互獨(dú)立，在AFP陰性患者中的陽性檢出率較高，與國內(nèi)汪得勝等[2]，許方等[14]研究相一致；三者聯(lián)合檢測則可相互補(bǔ)充，其敏感度、特異度、AUC分別為94.85%、87.50%、0.96，相比單項(xiàng)檢測則可顯著提高診斷PHC的敏感度和診斷價(jià)值，具有敏感度高、特異度強(qiáng)、檢測方便、快速、創(chuàng)傷小、費(fèi)用相對低廉等特點(diǎn)，特別適用于PHC患者的早期診斷，AFP陰性的PHC患者的診斷，影像學(xué)或B超難以區(qū)分慢性肝病基礎(chǔ)上較為常見的良性病變與小肝癌的鑒別診斷，體檢者的篩查。

一個(gè)新的腫瘤標(biāo)志物從實(shí)驗(yàn)室到臨床應(yīng)用，是一個(gè)很漫長的過程，需要大量的臨床病例的驗(yàn)證、隨訪。在本研究進(jìn)行的過程中就遇到1例GP73偏高的健康人，其GP73值為424.0 ng/mL，GPC3為0.338 ng/mL，AFP為1.62 ng/mL，生化肝功能正常，表面抗原陰性，B超、CT均未見異常，在1年后體檢中經(jīng)128排CT掃描發(fā)現(xiàn)大小約1.1 cm小結(jié)節(jié)，后經(jīng)穿刺病理檢查確診為PHC。這也提示出GP73有可能在肝臟剛出現(xiàn)病理改變時(shí)，未達(dá)到影像學(xué)檢查界限之前就大量升高，對PHC的早期診斷有著不可比擬的優(yōu)勢。這也是作者后續(xù)研究的重點(diǎn)之一。

綜上所述，GP73、GPC3和AFP單獨(dú)用于PHC的診斷都有一定的局限性，三者聯(lián)合檢測可起到相互補(bǔ)充的作用，有助于提高PHC診斷的敏感度及診斷價(jià)值，做到早診斷、早治療，減少漏診和誤診。

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[4]謝明水，劉楊，陳丹丹，等．AFP-L3、GP73、GPC3聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J]．國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35(5)：519-520．

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[9]張祖平，張德忠，吳耀震．血清GP73聯(lián)合AFP對PHC的早期診斷價(jià)值探討[J]．放射免疫學(xué)雜志，2010，23(2)：205-206．

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四川省衛(wèi)生廳科研課題項(xiàng)目(110600)；四川省宜賓市科技局重點(diǎn)科研項(xiàng)目(2011SF004)。

朱波(1980-)，主管技師，本科，主要從事臨床免疫研究。
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，E-mail:304825793@qq.com。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2016.10.022

R735.7

B

1671-8348(2016)10-1367-03

2016-01-22

2016-02-19)