礬根葉片組培技術(shù)研究

陳 琳,盧秋霜

(河南省安陽市園林綠化科研所,河南 安陽 455000)

1 引言

礬根(Heucheramicrantha)又名珊瑚鈴，虎耳草科礬根屬，多年生耐寒草本花卉。葉基生，闊心型，葉色有紅色、綠色、花葉等；花期4～10月份，粉色小花鐘狀，花徑0.6～1.2 cm，復(fù)總狀花序。由于其耐寒耐陰，是極好的陰生耐寒性地被植物。其葉片顏色鮮艷，外觀迷人，花期較長，具有較高的觀賞價值，園林中多用于林下花境、花壇、花帶、地被、庭院綠化等。另外，在環(huán)境價值上，礬根對環(huán)境有著一定的優(yōu)化作用，據(jù)報道，在光照比較充足的時候，礬根可以增加空氣的含氧量，還具有吸收空氣中大量的有毒物質(zhì)，為空氣增濕，吸取輻射等作用。

2 選材與方法

2.1 選材

2018年，引進(jìn)萊姆里基、太陽黑子、烈焰等5個品種，通過栽培發(fā)現(xiàn)，萊姆里基品種在安陽市過夏困難，在高溫下生長不良，易發(fā)生病害，致使繁殖困難，栽培兩年以來，未見其花芽分化，且所剩無幾。與其它品種相比，該品種葉色嫩綠，是室內(nèi)盆栽觀賞的佳品。故本研究以礬根品種萊姆里基為對象，取帶病植株上部健康葉片進(jìn)行組織培養(yǎng)，開展快速繁殖技術(shù)研究。

2.2 方法

2.2.1 外植體滅菌

資料上顯示，升汞滅菌效果顯著[3]，但從保護(hù)環(huán)境上考慮，對環(huán)境污染嚴(yán)重。李川[2]等采用75%酒精進(jìn)行外植體滅菌滅菌,經(jīng)探討研究，采用75%酒精和95%酒精滅菌各50瓶做對比實(shí)驗(yàn)。

外植體選取植株上部健康葉片，采用500倍洗潔精清洗，1000倍多菌靈浸泡1 min，1500倍洗衣粉清洗，流水沖洗1 h。然后到無菌操作臺上用不同濃度的酒精清洗30 s，滅菌水清洗3～5次，9%次氯酸鈉清洗1 min，滅菌水沖洗3～5次，雙氧水清洗30 s，滅菌水清洗3～5次，不同濃度的酒清洗30 s，滅菌水清洗3～5次，見圖1。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，95%酒精滅菌效果明顯優(yōu)于75%酒精。

圖1 滅菌后準(zhǔn)備接種的葉片

2.2.2 組織培養(yǎng)

以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，設(shè)置9組6-BA和NAA的不同用量，均添加3%，瓊脂0.7%，pH值5.5～6.0， 培養(yǎng)溫度：22±2 ℃[3，4]，光照時間為12 h/d,比較芽誘導(dǎo)率，篩選出最適初代培養(yǎng)基。同樣，將叢生芽發(fā)出較好的初代切分為帶3～4片葉的芽簇，轉(zhuǎn)接入9組繼代培養(yǎng)基中。觀察不同激素濃度對繼代生長的影響。試驗(yàn)方案見表1。

表1 培養(yǎng)基編號及激素水平組合

3 結(jié)果分析

3.1 外殖體滅菌實(shí)驗(yàn)分析

外植體采用75%酒精滅菌，污染率達(dá)40%～60%。外植體采用95%酒精滅菌，污染率達(dá)5%～15%。比對結(jié)果顯示，95%酒精滅菌效果明顯高于75%酒精的滅菌效果。

3.2 培養(yǎng)基分析

根據(jù)表2可以看出，第3組最佳，第6組次之，適合萊姆里基葉片初代培養(yǎng)基為MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0.5 mg/L。根據(jù)數(shù)據(jù)顯示，6-BA達(dá)到5 mg/L后，嚴(yán)重抑制了葉片的出芽率，因此6-BA用量不能過高，見圖2。

表2 初代結(jié)果

圖2 葉片愈傷組織出芽

根據(jù)表3可以看出，繼代試驗(yàn)第3、6、9組的激素配比相對較好些。其中第3組達(dá)到70%。在此基礎(chǔ)上，繼續(xù)對激素配比進(jìn)行優(yōu)化，經(jīng)過篩選，調(diào)整繼代第3、6、9組激素用量，獲得出芽率在85%～99%的激素組合，結(jié)果見表4。

表3 繼代培養(yǎng)結(jié)果

表4 優(yōu)化后的激素組合及出芽率

經(jīng)觀察調(diào)整后的3組培養(yǎng)基發(fā)現(xiàn)，第一組分生出芽率高，長勢較好，無玻璃化現(xiàn)象。第2組分生出芽率低，長勢一般，且有玻化現(xiàn)象。第3組分生出芽率略高于第二組，但長勢不如第一組，伴有畸形率升高，玻化現(xiàn)象比第2組嚴(yán)重的現(xiàn)象。

4 討論

本次實(shí)驗(yàn)研究，為搶救性解決礬根品種萊姆里基的擴(kuò)繁問題，采用葉片進(jìn)行組培研究。礬根葉片組織培養(yǎng)，雖然在培養(yǎng)周期上較莖尖慢，但在搶救性擴(kuò)繁上有明顯優(yōu)勢，見圖3、圖4。

圖3 繼代擴(kuò)繁瓶苗

圖4 葉片生根瓶苗進(jìn)行分栽

在實(shí)驗(yàn)研究中，器皿也是重要因素。生產(chǎn)中常用筒狀玻璃瓶或塑料瓶。普通玻璃瓶甁壁厚，在一定程度上影響植物對光的吸收，容易引起玻化現(xiàn)象。同時，筒狀玻璃瓶瓶口大，會增加污染幾率。而塑料瓶透光性差，重復(fù)使用，在清洗過程中導(dǎo)致甁壁模糊，透光性更差。對愈傷組織誘導(dǎo)和增殖方面影響嚴(yán)重，某種程度上還影響植物性狀表現(xiàn)。光對植物細(xì)胞、組織、器官的生長和分化有著極其重要的作用。不同光質(zhì)對愈傷組織誘導(dǎo)的效應(yīng)因植物種類或外植體類型的不同而存在差異。有實(shí)驗(yàn)表明，隨著玻璃厚度增加，可見光透射比都有不同程度的下降。故而器皿的透光性影響著植物對光的利用率。作為實(shí)驗(yàn)研究，還是玻璃三角瓶比較合適。玻璃三角瓶甁壁薄，可見光透射比高，有利于組織培養(yǎng)的各個階段對光的利用。

4 結(jié)論

在試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，用95%酒精進(jìn)行外植體滅菌可以進(jìn)一步推廣應(yīng)用領(lǐng)域。以葉片為外植體時易出現(xiàn)玻化現(xiàn)象和葉片畸形情況，有待進(jìn)一步優(yōu)化激素及培養(yǎng)條件，以獲得更好的培養(yǎng)效果。在生根培養(yǎng)時也發(fā)現(xiàn)發(fā)根點(diǎn)集中在培養(yǎng)基表面，葉片偶有焦邊現(xiàn)象，需要深入探索。