P38 MAPK通路在老年卵巢癌化療藥物耐藥性產生中的作用

王素琴　安紅軍　徐勝東　常　青

(濟源市人民醫院婦科,河南　濟源　459000)

P38 MAPK通路在老年卵巢癌化療藥物耐藥性產生中的作用

王素琴安紅軍1徐勝東1常青2

(濟源市人民醫院婦科,河南濟源459000)

〔摘要〕目的研究P38 MAPK通路在老年卵巢癌化療藥物耐藥性產生中的作用，對可能的機制進行探討。方法采用免疫組化法測定P38 MAPK、凋亡抑制蛋白 Survivin、耐藥相關蛋白切除修復交叉互補基因 1(ERCC1)，肺耐藥相關蛋白(LRP)，谷胱甘肽轉移酶(GST-π)在25例老年原發性卵巢上皮癌和32例老年復發性卵巢上皮癌治療前后標本中的表達情況。結果P38 MAPK在原發性卵巢癌中的表達顯著高于復發性卵巢上皮癌(P<0.01)，而Survivin、ERCC1、GST-π的表達則明顯低于復發性卵巢癌組(P<0.01)，P38 MAPK 與 Survivin、ERCC1、LRP 之間存在負相關性(P<0.01)，但與 GST-π 之間無相關性(P>0.05)。結論化療抑制了P38 MAPK信號通路，增加了Survivin、ERCC1、GST-π的表達，進一步導致了耐藥性的發生，P38 MAPK信號通路開通可能是改善卵巢癌化療效果的理論途徑。

〔關鍵詞〕P38 MAPK通路；卵巢癌；耐藥性

卵巢癌是威脅女性生命的惡性腫瘤之一，由于缺乏有效的早期診斷，死亡率居女性腫瘤首位〔1〕。P38 MAPK 是絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)的重要亞家族成員，在應激條件下，胞質內P38 可轉入核內，進行磷酸化并調控相關基因表達。有研究提示，P38 MAPK受抑制可能是以順鉑為主的化療藥物耐藥的原因〔2〕。本文對P38 MAPK 通路受抑制對老年卵巢癌化療藥物耐藥性產生的作用進行實驗設計，探討可能的機制。

1材料與方法

1.1一般資料病例均來自于濟源市人民醫院婦科收治并經寧夏醫科大學同一病理專家確認的卵巢上皮癌病例57例，患者均為老年女性，年齡55～65歲，平均(55.3±4.6)歲。其中原發性卵巢上皮癌25例，術前未行放化療治療，患者均經過病理確診為晚期卵巢上皮癌，需行手術治療，術后病理證實與術前診斷一致；復發性卵巢上皮癌32例，均行TP或CP方案化療6～8個療程達到臨床緩解，停藥半年后腫瘤再次復發。

1.2研究方法及材料檢測材料包括鼠抗人磷酸化P38多克隆抗體(Santa Cruz 公司)，兔抗人Survivin多克隆抗體(Santa Cruz 公司)，兔抗人耐藥相關蛋白切除修復交叉互補基因1(ERCC1)多克隆抗體(Santa Cruz 公司)，鼠抗人肺耐藥相關蛋白(LRP)多克隆抗體(北京中杉生物技術有限公司)，鼠抗人谷胱甘肽轉移酶(GST-π)多克隆抗體(北京中杉生物技術有限公司)，免疫組織化學 SP 試劑盒(北京中杉生物技術有限公司)，DAB 顯色試劑盒(北京中杉生物技術有限公司)。 P-P38，Survivin，GST-π，ERCC1 及 LRP 采用免疫組織化學分析 SP 法，DAB 顯色，PBS 代替一抗作陰性對照，相同染色條件下的已知陽性片作為陽性對照。400倍光鏡下觀察切片。檢測標準和程序嚴格按照試劑說明書進行。

1.3數據分析采用SPSS18.0軟件行χ2檢驗。

2結果

2.1P38 MAPK的表達情況25例原發性卵巢上皮癌中P38 MAPK陽性表達24例(96.0%)，32例復發性卵巢癌患者中陽性表達13例(40.6%)，與原發性卵巢上皮癌患者比較差異有統計學意義(P<0.01)。

2.2Survivin、GST-π、ERCC1 及 LRP的表達情況25例原發性卵巢上皮癌中 Survivin陽性表達18例(72.0%)，ERCC1陽性表達17例(68.0%)，LRP陽性表達19例(76.0%)，GST-π陽性表達16例(64.0%)明顯低于復發性卵巢癌患者中各蛋白的陽性表達(均為100%，均P<0.01)。

2.3P38 MAPK與Survivin、GST-π、ERCC1及LRP表達的相關性通過對P38 MAPK與 Survivin、ERCC1、LRP、GST-π表達相關性的分析，結果顯示P38 MAPK與Survivin、ERCC1、LRP之間存在負相關性(r=-0.388、-0.399、-0.395，均P<0.01)，但與 GST-π 之間無相關性(r=-0.069，P>0.05)。

3討論

研究顯示，腫瘤對化療藥物產生耐藥性是導致腫瘤化療失敗或療效差的主要原因，可能存在交叉耐藥性〔3〕。有學者明確指出，先期化療耐藥性的產生可導致后期治療無效〔4〕。研究認為化療藥物產生耐藥性主要有三個途徑：(1)藥物外排增加(如MRP)，不能使細胞內藥物濃度達到有效濃度；(2)藥物失活增加(如GST)，藥物代謝失活；(3)DNA損傷修復發揮作用〔5〕。國內外多項研究顯示，p38 MAPK通路被抑制可能為順鉑等化療藥物發生機體耐藥的原因〔6〕。Losa 和Mansouri 等〔7，8〕的研究也對此有所提示。項濤等〔9〕報道上調P38可以提高A2780多腫瘤細胞對順鉑等化療藥物的敏感性，這也佐證了上述國外研究。

MAPKs是胞內信號傳導的重要通路，是多個信號傳遞的交點和共同通路，在細胞質內分布廣泛，將細胞外刺激信號傳遞至細胞核內，影響著細胞增殖、分化和應激的調控〔10〕。三級激酶級聯傳遞信號是該家族信號傳導的共同特點。P38是MAPK家族中重要的一員，具有α，β，δ和γ四個亞型，其中P38α具有調節細胞增殖、生存、分化的作用。近些年，對P38介入炎性反應而發病的研究較為廣泛，研究顯示其具有細胞免疫調節、炎癥反應調控的重要作用，在生物學刺激下經過磷酸化等激活，可在細胞核等重要部位發揮作用〔11〕。本研究結果顯示，P38 MAPK通路被抑制可增加Survivin、ERCC1、LRP、GST-π的陽性表達，促進了耐藥性的增加。根據后期的隨訪，也發現P38 MAPK與卵巢上皮癌的預后密切相關，需要進一步研究。綜上所述，化療抑制了P38 MAPK信號通路，但增加了Survivin、ERCC1、GST-π的表達，導致了耐藥性的發生，P38 MAPK信號通路的重新開通可能是改善卵巢癌化療效果的理論途徑。

4參考文獻

1Bristow RE，Tomacruz RS，Amstrong DK，etal.Survival effect of maximal cytoreductive surgery for advanced ovarian carcinoma during the platinumera：a meta-analysis〔J〕.Clin Oncol，2002；20(5)：1248.

2Coukos G，Rubin SC.Chemotherapy resistane in ovarian cancer：new molecular perspectives〔J〕.Obst Gynecol，1998；91(5)：783-92.

3焦今文，王蕾，溫放，等.p38 MAPK在不同療程化療后卵巢癌中的表達及臨床意義〔J〕.中國現代醫學雜志，2011；15：1828-34,1838.

4Gershenson D.Treatment of advanced ovarian cancer〔M〕.Alexandria，VA：ASCO Educational Book，2000：130.

5Sun P，Yoshizuka N，New L，etal.PRAK is essential forras-induced senescence and tumor suppression〔J〕.Cell，2007；128：295-308.

6Wong SH，Shih RS，Schoene NW，etal.Zinc-induced G2/M blockage is p53 and p21 dependent in normal human bronchial epithelial cells〔J〕.Am J Physiol Cell Physiol，2008;294：C1342-9.

7Losa JH，Paradacobo C，Viniegra JG，etal.Role of the P38MAPK pathway in cisplatin-based therapy〔J〕.Oncogene，2003;22(26)：3998-4006.

8Mansouri A，Ridgway LD，Korapati AL，etal.Sustained activation of JNK/p38MAPK pathways in response to cisplatin leads to Fas ligand induction and cell death in ovarian carcinoma cells〔J〕.J Biol Chem，2003;278(21)：19245-56.

9項濤，夏曦，王世宣，等.上調 p38 表達提高卵巢癌多細胞球體順鉑敏感性〔J〕.腫瘤防治研究，2008;35：157-60.

10Rahman L.Oxidativ stress in pathogenesis of chronic obstructive pulmonary disease：cellular and molecular mechanisms〔J〕.Cell Biochem Biophys，2005；43(1)：167-88.

11黃翠萍，楊和平，張珍祥，等.p38蛋白激酶對支氣管哮喘大鼠Th2類細胞因子表達的調控〔J〕.中國病理生理雜志，2006；22(2)：311-3.

〔2015-09-24修回〕

(編輯郭菁)

基金項目：國家自然科學基金項目(No.81460230)

通訊作者：常青(1974-)，男，博士，副教授，主要從事基礎醫學教學及研究工作。

〔中圖分類號〕R737.9

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)11-2601-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.014

1濟源市婦幼保健院2寧夏醫科大學基礎醫學院

第一作者：王素琴(1975-)，女，副主任醫師，主要從事婦產科臨床及科研工作。