ELISA檢測梅毒抗體導致老年人產生假陽性的分析

朱艷萍 李彥民

（赤峰寶山中醫院檢驗科，內蒙古 赤峰 024070）

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ELISA檢測梅毒抗體導致老年人產生假陽性的分析

朱艷萍 李彥民

（赤峰寶山中醫院檢驗科，內蒙古 赤峰 024070）

【摘要】目的 討論使用酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）檢測梅毒抗體致老年人產生假陽性結果的原因。方法 采用酶聯免疫吸附試驗分別檢測450例老年人及1912例中青年患者血清中的梅毒特異性抗體，陽性者再使用已被CDC定為確診方法的梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TPPA）診斷試劑進行復檢確診。結果 酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）法檢測出的老年組的假陽性率明顯高于中青年組，兩組間具有顯著性差異（P＜0.05）。結論 年齡與疾病因素是造成TP-ELISA法檢測老年人梅毒特異性抗體導致假陽性的重要因素。

【關鍵詞】TP-ELISA；老年人；梅毒；假陽性

梅毒是一種以母嬰垂直傳播以及性傳播為主的一種傳染性疾病，主要由蒼白密螺旋體感染引起。在全球范圍內廣泛分布，近年來全國發病率不斷上升，發病人數高居全球第五位。梅毒的診斷主要依賴病史，臨床表現和實驗室篩查。而實驗室檢查的項目包括直接查梅毒螺旋體抗體（暗視野顯微鏡.直接熒光抗體），血清學檢查（查抗體）以及梅毒螺旋體核酸測定。其中血清學檢查，特別是TP-ELISA檢測因其對IgG以及IgM的檢測能力強，靈敏度高，操作方法簡便而被二級醫院廣泛采用。但是，由于梅毒抗體主要是蒼白密螺旋體，故此對試劑的純度要求較高恰恰由于這個因素，導致試劑檢測的特異度只能達到99%左右，這就導致了實驗室檢測陽性而患者并沒有臨床癥狀的情況。由于梅毒屬于性病范疇，是十分敏感的醫學問題和社會問題，錯誤的報告容易引起家庭糾紛甚至醫療糾紛，為此，筆者從2011年1月至2014年12月對此做了深入調查，結果如下。

1 對象與方法

1.1對象：在本院就診的所有門診及住院體檢病例，共2362例。其中年齡≥65歲的老年人共450例，對照組即年齡在18～60歲的病例共1912例。

1.2方法及試劑：初檢采用酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）。試劑盒由北京萬泰生物科技有限公司生產。確診試驗采用梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TP-PA）方法，試劑盒為珠海麗珠試劑股份有限公司生產。

1.3真陽性的判斷：酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）和梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TP-PA）同時呈陽性反應即為真陽性。

1.4假陽性的判斷：酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）陽性而梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TP-PA）陰性，并且2周以后復查結果沒有改變的即為假陽性。

1.5儀器的選擇：酶標儀選用深圳雷杜生命科學股份有限公司生產的RT-6000，洗板機為深圳雷杜生命科學股份有限公司生產的RT-3000。

1.6統計學方法：用SPSS18.0進行統計分析，采用卡方檢驗，P＜0.05有統計學差異。

2 結 果

受檢的450例老年組患者中酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）陽性者11例，其中假陽性者為9例，假陽性率為81.8%（9/11），平均S/C.O （S代表樣品孔的OD值，C.O代表臨界值，如樣品的S/C.O的計算值≥1則判定為陽性。反之，如果S/C.O的計算值＜1則判定為陰性）值為3084。真陽性兩例（均為男性），平均S/C.O值為1080，老年組中假陽性者均無臨床癥狀，也無接觸史，只有真陽性的2例患者承認年輕時有過不潔接觸史。而中青年組的1912例患者中酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）陽性的是78例，假陽性者為8例，假陽性率是10.3% （8/78），平均S/C.O值為3043，真陽性者均符合梅毒診斷行業標準（WS 273—2007）。這兩個參檢組的酶聯免疫法假陽性率差異非常大，P＜0.01，兩個參檢組間酶聯免疫吸附試驗（TP-ELISA）檢測假陽性率的差異具有統計學意義。

3 討 論

梅毒的確診臨床表現是一方面，更多的也要依賴實驗室的報告結果。梅毒螺旋體暗視野檢查是最直接的診斷方法，可是這種方法的檢出率太低所以臨床一般不常用。一般情況下，人體感染梅毒螺旋體后約14 d就能檢測出特異性抗體。酶聯免疫吸附試驗的靈敏度高于梅毒螺旋體顆粒凝集試驗（TP-PA），所以采用2周后復檢的方法即可避免早期感染患者因為抗體濃度低而被凝集法TP-PA漏檢的情況，并且本次試驗假陽性的S/C.O值均較高基本可以排除靈敏度差異而引起的誤差［1-2］。然而我們在工作中發現，由于TP-ELISA實驗影響因素較多，所以本法存在一定的假陽性，很多老年人TP-ELISA陽性，但臨床無癥狀，主訴無發病史及接觸史，且65歲以上的老年人因接觸而患病的概率非常小。筆者發現這2例真陽性老年患者的平均S/C.O值為1080，說明老年人可能存在梅毒螺旋體抗體。但是9例假陽性患者中，TP-PA未能檢測出梅毒螺旋體抗體，我們認為不能單純地用TP-PA假陽性來解釋，也可能查到的本來就不是梅毒特異性抗體。由于他們沒有不潔性生活史、性病史、流產史、抗梅治療史，而這種差異的出現筆者認為有兩種可能：一是有別的物質干擾了ELISA的檢測，另一種因素是兩種方法的抗原有所不同。而目前的ELISA試劑盒主要是采用雙抗原夾心法酶聯免疫吸附試驗原理，在微孔條上預包被梅毒螺旋體抗體的基因重組抗原，配以酶標記抗原及TMB顯色劑等其他試劑，檢測人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體。而TP-PA試劑是由梅毒螺旋體（Nichols株）的精制菌體成分制成，它與血清中的梅毒螺旋體抗體發生凝集反應。實際上老年人易使TP-ELISA檢測產生較高的假陽性，是因為隨著年齡的增大使其生理功能慢慢退化，從而導致免疫功能異常或患有一系列疾病，如系統性紅斑狼瘡、丙型肝炎、冠心病等，疾病的因素使機體誘導產生并釋放某些交叉抗原，從而干擾了實驗結果。老年人也是惡性腫瘤，糖尿病，肝硬化，風濕性疾病等自身免疫疾病的高發人群，這些疾病也能讓老年人體內產生一些治療性抗體及免疫性蛋白等，這些特殊成分在酶聯免疫吸附試驗檢測反應中具有一定的吸附作用，使試驗發生顯色反應，從而產生假陽性結果。

中圖分類號：R759.1；R446

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）04-0090-02