熒光法在生物樣品理化檢測標準中的應用進展

蔣 瑩

（遼寧省職業(yè)病防治院，遼寧 沈陽 110005）

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熒光法在生物樣品理化檢測標準中的應用進展

蔣 瑩

（遼寧省職業(yè)病防治院，遼寧 沈陽 110005）

【摘要】目前，熒光法由于它的靈敏度相對較好，特異性強、容易操作、定量準確等特點，被廣泛地應用到生物樣品理化檢測領(lǐng)域。國家標準、職業(yè)衛(wèi)生行業(yè)標準等也在不斷增強，修訂的頻率更是不斷加快。依據(jù)已有標準中生物樣品所采用的熒光檢測方法，進行了一個簡單的總結(jié)。分析熒光法在生物樣品檢測標準中的應用。提出了對熒光檢測的未來發(fā)展方向的展望。以供讀者參考。

【關(guān)鍵詞】熒光法；生物樣品；理化檢測

在工業(yè)化高度發(fā)展的同時，我國在大范圍的運用全新的工業(yè)技術(shù)。這些直接導致我國毒物中毒事件屢見不鮮，引起全國高度關(guān)注。因為它對社會經(jīng)濟發(fā)展和社會和諧穩(wěn)定有重要影響，它更直接與千千萬萬人民健康安全息息相關(guān)。熒光法檢測技術(shù)是通過輻射躍遷理論的高級檢測方法［1］。在檢測生物樣品時，工作人員一般都是將樣品放在特定波長的激光下檢測，因為僅限于特定結(jié)構(gòu)在這種條件下才會發(fā)出光芒。該波長由生物樣品中毒物種類所決定，而反應強度又與其濃度密切相關(guān)。檢測人員也是根據(jù)這兩個特點進行定性、定量檢測。熒光檢測具有強大的優(yōu)越性，與傳統(tǒng)的檢測方法相比，熒光法檢測生物樣品更加科學方便，更加具有準確度，更加具有選擇性，更加具有靈敏性能［2-3］。這種高級檢測方法已在生物樣品檢測范圍使用，但生物樣品熒光檢測法在我國檢測標準中卻沒有形成完整詳盡的論述。該文章總結(jié)了現(xiàn)代標準體系中我國所普遍運用的熒光檢測方式，如原子熒光分析法、熒光分光光度法等。

1 分子熒光法在檢測標準中的應用

出現(xiàn)熒光所需要具備的前提：第一就是分子它擁有吸收激光的構(gòu)造；其次，分子具有比較高的量子效率，其內(nèi)涵就是熒光物質(zhì)在吸收光能之后所發(fā)射的熒光量子數(shù)量以及所吸收的激發(fā)光量子數(shù)值都相對比較多。我國在生物樣品檢測中已經(jīng)廣泛使用熒光分光光度法、薄層色譜-熒光法等方法。

1.1熒光分光光度法：我們可以直接把生物樣品放入熒光檢測比色器皿中，然后再通過其所產(chǎn)生的熒光強度進行定量檢測，這也是我國所能運用的生物檢測中最普遍使用的分光光度檢測方法。無分離直接檢測方法對前期處理凈化要求也相當嚴格，因此熒光分光光度法就常常與層析凈化法相結(jié)合，共同使用［4-5］。

鑒于以上特點，熒光分光光度法通常作為檢測標準的篩選方法，即對大批量的樣品進行初步篩選，對于無熒光信號的可直接鑒定為陰性樣品，有熒光信號的進行再次檢測，采用高效液相色譜-熒光法或高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進行進一步分離和結(jié)構(gòu)解析，從而實現(xiàn)單一化合物的精確定性定量檢測。

1.2薄層色譜-熒光法：薄層色譜—熒光法是必須要在實現(xiàn)初步分離的步驟后才能進行的一種半定量檢測步驟。首先要將生物樣品進行提取、濃縮等完成之后，將生物樣品放置于薄層色譜板上面，然后通過已經(jīng)檢測好濃度的標準溶液進行參照。有以下幾點根據(jù)：第一，樣品與標準溶液的遷移距離相同；第二，樣品與標準溶液具有相同的熒光色度，依據(jù)這一點，我們可以判斷樣品是否含有我們所需要研究的化合物。第三，樣品熒光強度如果比標準溶液要低的話，那么樣品的含量就低于檢測的限度；第四，如果樣品比標準溶液高，那么我們就可以通過對樣品進行稀釋，使樣品強度與標準溶液強度保持基本一致，然后通過稀釋的倍數(shù)來計算樣品的本身的溶度。如果樣品中出現(xiàn)熒光雜質(zhì)，我們就可以通過橫向、縱向分離雜質(zhì)，再對目標化合物進行檢測。我們在檢測生物樣品中抗血凝鼠藥時廣泛運用其方法。

1.3高效液相色譜-熒光法：將高效液相色譜與熒光檢測器串聯(lián)，對待測樣品進行基線分離后， 導入流通池進行熒光檢測；當前標準中所采用的色譜均為常規(guī)柱反相液相色譜。定量方面，依靠色譜峰高或者峰面積，采用外標法即可實現(xiàn)精準定量分析；為降低柱外效應，流通池體積需與色譜柱規(guī)格相匹配，因此光程相對于比色皿小，靈敏度稍低于分光光度法。定性方面，該方法雖不能提供結(jié)構(gòu)解析功能，但其綜合了保留時間和熒光波長兩項指標，前處理再結(jié)合免疫親和層析凈化后，具有較大的可信性。目前部分標準將該法作為檢測的第一法，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法作為第二法，發(fā)現(xiàn)陽性樣品后實施第二法進行結(jié)構(gòu)確證。該法是目前我國食品安全標準體系中應用最廣泛的分子熒光檢測方法，在獸藥殘留、人工色素、真菌毒素等檢驗中獲得了普遍應用。

2 原子熒光法在生物樣品檢測標準中的應用

原子熒光法主要是存在于原子發(fā)射光譜、原子吸收光譜之間的一種光譜分析技術(shù)。它的主要原理為：將帶有一定濃度的待測元素原子化，接著利用特定頻率的激發(fā)光源輻射，使其達到高能態(tài)。之后，選擇光輻射的形式將特征波長的熒光進行發(fā)射。依據(jù)熒光的波長的特征，可以對其強度進行定量。其一般特征為：靈敏度強、幾乎無干擾、進樣量相對較少，被廣泛應用到生物樣品理化檢測中。

2.1氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法：在一定條件下，砷、硒、碲、鉛、錫等八種元素，能夠被還原成氣態(tài)氫化物。這些氫化物的沸點都＜0 ℃，型選擇性研究［J］.中國新藥與臨床雜志，2010，29（1）:45-49.

［10］ 李娟，何海霞，丁黎，等.苯環(huán)喹溴銨長期經(jīng)鼻給藥對小鼠學習和記憶能力的影響［J］.中國新藥與臨床雜志，2011，30（7）:500-504.

［11］ 孫魯寧，丁黎，嚴拯宇，等.LC-MS/MS法研究苯環(huán)喹溴銨對大鼠肝微粒體CYP450酶的抑制作用［J］.中國藥科大學學報，2013，44（2）:134.

［12］ 李練兵，呂靜，馬明福，等.苯環(huán)喹溴銨染毒的大鼠一般生殖毒性試驗［J］.毒理學雜志，2007，21（4）:317.

［13］ 李正，陳小平，李娟.苯環(huán)喹溴銨噴鼻劑的大鼠毒性作用研究［J］.中國藥業(yè)，2009，18（9）:6-7.

［14］ Li J，He HX，Zhou YD，et al.Subchronic toxicity and toxicokinetics of long-term intranasal administration of bencycloqiudium bromide: A 91-day study in dogs［J］.Regulat Toxicol Pharmacol，2011，59（3）:343-352.

中圖分類號：R9

文獻標識碼：A

文章編號：1671-8194（2016）04-0045-02