外源甜菜堿對低溫脅迫下結縷草生理特性的影響

梁小紅，安勐潁，宋崢，徐廣臣，濮陽雪華*

(1.北京林業大學草坪研究所, 北京 100083; 2.北京東方園林生態股份有限公司, 北京 100012)

外源甜菜堿對低溫脅迫下結縷草生理特性的影響

梁小紅1，安勐潁1，宋崢2，徐廣臣1，濮陽雪華1*

(1.北京林業大學草坪研究所, 北京 100083; 2.北京東方園林生態股份有限公司, 北京 100012)

摘要：甜菜堿作為一種重要的滲透調節物質，與低溫脅迫下植物的抗逆性有著密切的聯系。為了探討不同濃度外源甜菜堿對低溫脅迫下結縷草相關生理指標的影響，本實驗以結縷草‘青島’品種為實驗材料，分別采用0，50，100和150 mmol/L 的甜菜堿進行葉面噴施，在8/2℃(白天/夜間)的培養箱中連續處理28 d，以正常管理(28/24℃)作為對照。結果表明：外源甜菜堿能夠有效緩解低溫脅迫下結縷草坪觀質量和葉綠素含量的下降，減少電解質滲透率和丙二醛含量的升高，顯著提高SOD、POD、CAT和APX的活性，從而降低H2O2和O2·-的累積，同時，外源甜菜堿還可以提高低溫脅迫下結縷草可溶性蛋白和脯氨酸的含量，增強滲透調節能力，進而增強結縷草對低溫脅迫的抵抗性。其中，外施100 mmol/L甜菜堿對提高結縷草的耐低溫能力的效果最為顯著。

關鍵詞：結縷草；低溫脅迫；甜菜堿；生理特性

Effects of exogenous glycine betaine on the physiological characteristics ofZoysiajaponicaunder low-temperature stress

LIANG Xiao-Hong1, AN Meng-Ying1, SONG Zheng2, XU Guang-Chen1, PUYANG Xue-Hua1*

1.InstituteofTurfgrassScience,BeijingForestryUniversity,Beijing100083,China; 2.BeijingOrientLandscapeEcologicalCo.,Ltd,Beijing100012,China

Abstract:Glycine betaine (GB) is an important compatible solute that is associated with stress tolerance in plants under low-temperature stress. To investigate the effect of exogenous GB on the physiological indexes of Zoysia japonica under low-temperature stress, GB at 0, 50, 100, and 150 mmol/L was applied as a foliar spray to ‘Qingdao’, a Z. japonica cultivar, before transferring the plants to growth chambers. The plants were grown under average temperatures of 8℃/2℃ (day/night) for 28 days in the low-temperature treatment, and under average temperatures of 28℃/24℃ (day/night) in the control. Exogenous GB alleviated the loss of turf quality and chlorophyll content, and reduced the increase in electrolyte leakage and malondialdehyde content in Z. japonica under low-temperature stress. Exogenous GB increased the activities of superoxide dismutase, peroxidase, catalase, and ascorbate peroxidase, leading to lower H2O2and O2·-contents. Also, exogenous GB enhanced the osmotic adjustment capacity of the plants by increasing the concentrations of proline and soluble protein. These results indicated that exogenous GB enhanced the resistance of Z. japonica to low-temperature stress, and 100 mmol/L exogenous GB was the most effective concentration.

Key words:Zoysia japonica; low-temperature stress; glycine betaine; physiological characteristics

結縷草屬(Zoysia)是一種隸屬禾本科(Gramineae)，虎耳草亞科(Chloridoideae)的多年生C4型草本植物，主要分布于亞洲東部地區，在澳洲、非洲等比較溫暖的地區也有分布，也是我國常用的多年生暖季型草坪草之一[1]。目前研究表明，結縷草屬主要包括11個種，若干個變種和變型，其中在我國自然分布的有5個種和2個變種，它們分別是結縷草(Zoysiajaponica)、中華結縷草(Zoysiasinica)、溝葉結縷草(Zoysiamatrella)、細葉結縷草(Zoysiatenuifolia)和大穗結縷草(Zoysiamacrostachya)5個種以及青結縷草(Zoysiajaponicavar.pollida)和長花結縷草(Zoysiasinicavar.nipponica)2個變種[2]。結縷草葉片厚硬而近革質，適宜溫暖濕潤性氣候，耐高溫、耐陰性及耐旱性較強，此外，結縷草還具有耐鹽堿，抗病蟲害，耐粗放管理，耐踐踏、耐貧瘠等優良特性，因此，結縷草具有很強的適應性和抗逆性，在我國被廣泛應用于城市園林綠化、水土保持、邊坡修復等諸多領域[2-4]。但是，結縷草也具有綠期短的缺點，在冬季會枯黃休眠，從而大大降低了其觀賞價值，限制了其在過渡帶及北方地區的推廣和使用[5]。因而，如何提高結縷草對低溫脅迫的抵抗性，延長結縷草的綠期，已經成為國內外眾多學者關注的問題之一。

甜菜堿(GB)是一種烷基烴類含氮化合物，屬于甘氨酸的季銨衍生物，它可以和多種氨基酸結合形成新的復合物，譬如甘氨酸甜菜堿、脯氨酸甜菜堿及組氨酸甜菜堿等，其中甘氨酸甜菜堿是結構最為簡單，研究最為廣泛的一類甜菜堿，它廣泛分布于動植物和微生物體內[6-7]。植物受到逆境脅迫時，甜菜堿可以作為滲透調節物質參與植物細胞的滲透調節，亦可作為滲透保護物質來提高生物大分子結構和功能的穩定性[8]。因此，在低溫和鹽漬等逆境脅迫下，甘氨酸甜菜堿可以提高植物的抗逆性，研究表明，外源甜菜堿可以提高小麥(Triticumaestivum)、大麥(Hordeumvulgare)、煙草(Nicotianatabacum)、黃瓜(Cucumissativus)、玉米(Zeamays)等多種植物對低溫脅迫的抵抗性[9-13]。然而，目前關于外源甜菜堿對提高草坪草抗寒性的相關研究較少，尤其是寒冷脅迫下，外源甜菜堿對結縷草生理代謝影響的報道甚少。因此，開展相關研究有利于進一步闡明甜菜堿對提高結縷草耐寒能力的生理機制，從而延長結縷草的綠期，為結縷草的進一步推廣和應用奠定理論基礎。

1材料與方法

1.1　實驗材料

本研究選擇結縷草‘青島’為研究對象，結縷草種子由青島海源草坪有限責任公司提供。2013年7月將種子播種于直徑16 cm，高度15 cm的塑料花盆中，播種量為20 g/m2，花盆中的基質為草炭∶蛭石∶沙=4∶2∶1的混合物。播種后的植物材料在溫室中培養4個月，溫室條件為光周期14 h，光合有效輻射(PAR)400 μmol/(m2·s)，溫度白天28℃，夜間24℃。在生長期間，每3 d澆水1次，每周采用半強度Hoagland營養液施肥1次[14]，成坪后每周修剪至約10 cm高。

1.2　低溫處理與取樣

在低溫處理前3周，所有的植物材料被轉移至培養箱中，培養箱的培養條件同溫室條件。在2周的適應生長后，即低溫脅迫處理前1周，處理組結縷草分別被噴施濃度為0，50，100，150 mmol/L的甜菜堿。低溫處理條件為光周期14 h，光合有效輻射(PAR)400 μmol/(m2·s)，溫度白天8℃，夜間2℃，低溫處理時間共28 d。以正常管理作為對照組。分別在低溫處理后的第0，7，14，21和28天取樣，液氮速凍后轉移至-80℃冰箱進行保存。

1.3　測定指標及方法

坪觀質量參照Turgeon[15]的方法，采用1~9分制進行評分；葉綠素含量采用95%乙醇提取測定[16]；電解質滲透率采用Blum和Ebercon[17]的方法測定；丙二醛含量采用Heath 和 Packer[18]的方法測定；過氧化氫含量的測定采用文獻[19]的方法；超氧陰離子含量采用Jiang 和Zhang[20]的方法測定；抗氧化酶活性的測定采用Zhang 和 Kirkham[21]的方法；可溶性蛋白含量的測定采用Bradford[22]的方法；脯氨酸含量采用李合生[23]的方法測定。

1.4　數據分析

實驗設置4個重復，采用Excel 2013和SPSS 18.0進行統計分析，并使用Excel 2013作圖。

2結果與分析

2.1　外源甜菜堿對低溫脅迫下結縷草傷害指標的影響

2.1.1坪觀質量和葉綠素含量低溫脅迫導致結縷草的坪觀質量和葉綠素含量呈顯著下降趨勢(P<0.05)，在第28天時，結縷草坪觀質量為4.7分，處于不可接受狀態，葉綠素含量與對照相比下降了71.71%(圖1)。與單獨低溫脅迫相比，外施3種不同濃度的甜菜堿都在一定程度上緩解了坪觀質量和葉綠素含量的下降，其中，外施100 mmol/L甜菜堿的緩解效果最為顯著，而外施150 mmol/L甜菜堿緩解作用較小，尤其是對葉綠素含量的影響。在第28天時，100 mmol/L甜菜堿預處理的結縷草坪觀質量得分為6.7分，依然處于可接受狀態，葉綠素含量相比單獨低溫脅迫升高了1.21倍。

圖1　外施不同濃度甜菜堿對低溫脅迫下結縷草坪觀質量和葉綠素含量的影響Fig.1　Effects of exogenous glycine betaine (GB) with different concentrations on turf quality and chlorophyll content of Z. japonica under low-temperature stress　CK(對照組)=常溫+0 mmol/L 甜菜堿；T0=低溫脅迫+0 mmol/L甜菜堿；T1=低溫脅迫+50 mmol/L甜菜堿；T2=低溫脅迫+100 mmol/L甜菜堿；T3=低溫脅迫+150 mmol/L甜菜堿。圖中上方的垂直線條表示同一時間下不同處理之間的標準誤(P<0.05)。下同。CK (control)=normal temperature+0 mmol/L GB; T0=low temperature+0 mmol/L GB; T1=low temperature+50 mmol/L GB; T2=low temperature+100 mmol/L GB; T3=low temperature+150 mmol/L GB. Vertical bars on the top indicate least significant difference values (P<0.05) for treatment comparison at a given day of treatment. The same below.

2.1.2電解質滲透率和丙二醛含量由圖2可知，低溫脅迫導致結縷草的電解質滲透率和丙二醛含量呈顯著上升趨勢(P<0.05)，到第28天時，單獨低溫脅迫的結縷草電解質滲透率和丙二醛含量與對照相比分別增加了185.84%和99.47%。外施3種不同濃度的甜菜堿都在一定程度上緩解了低溫脅迫引起的電解質滲透率和丙二醛含量的上升，而且，外施100 mmol/L甜菜堿的緩解效果最為顯著。在第28天時，與單獨低溫脅迫相比，100 mmol/L甜菜堿預處理的結縷草電解質滲透率和丙二醛含量分別降低了44.9%和23.6%。

圖2　外施不同濃度甜菜堿對低溫脅迫下結縷草電解質滲透率和丙二醛含量的影響Fig.2　Effects of exogenous glycine betaine with different concentrations on electrolyte leakage and MDA content of Z. japonica under low-temperature stress

2.2　外源甜菜堿對低溫脅迫下結縷草抗氧化響應指標的影響

2.2.1過氧化氫和超氧陰離子含量低溫脅迫導致結縷草的H2O2含量和O2·-含量呈顯著上升趨勢(P<0.05)，到第28天時，單獨低溫脅迫的結縷草H2O2含量和O2·-含量與對照相比分別升高了1.61和1.32倍(圖3)。與單獨低溫脅迫相比，外施3種不同濃度的甜菜堿都顯著降低了H2O2含量和O2·-含量，其中，外施100 mmol/L甜菜堿的緩解效果最為明顯。在第28天時，相比單獨低溫脅迫，100 mmol/L甜菜堿預處理的結縷草H2O2含量和O2·-含量分別下降了44.4%和40.0%。

圖3　外施不同濃度甜菜堿對低溫脅迫下結縷草H2O2含量和O2·-含量的影響Fig.3　Effects of exogenous glycine betaine with different concentrations on H2O2 and O2·- content of Z. japonica under low-temperature stress

2.2.2抗氧化酶活性由圖4可知，低溫脅迫顯著提高了結縷草4種抗氧化酶的活性(P<0.05)。低溫脅迫處理條件下，超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)和抗壞血酸過氧化物酶(APX)的活性分別在第14，28，21和28天時達到峰值，與對照相比其活性分別提高了151.09%，67.18%，110.99%和72.22%。與單獨低溫脅迫處理相比，外施3種不同濃度的甜菜堿均在不同程度上提高了4種抗氧化酶的活性，其中100 mmol/L 的外源甜菜堿作用效果最為顯著，而150 mmol/L的外源甜菜堿作用效果較小，尤其是對CAT和APX活性的影響。相比單獨低溫脅迫，100 mmol/L甜菜堿預處理的結縷草SOD、POD、CAT和APX的活性分別在第14，28，21和28天時增加了82.5%，47.4%，77.2%和68.5%。

圖4　外施不同濃度甜菜堿對低溫脅迫下結縷草抗氧化酶活性的影響Fig.4　Effects of exogenous glycine betaine with different concentrations on antioxidant enzyme activity of Z. japonica under low-temperature stress

2.3　外源甜菜堿對低溫脅迫下結縷草滲透調節指標的影響

2.3.1可溶性蛋白含量低溫脅迫下結縷草的可溶性蛋白含量呈現先增加后下降的趨勢，其含量在第14天時達到峰值，與對照相比增加了94.74%(圖5)。同單獨低溫處理相比，外施100 mmol/L甜菜堿顯著提高了結縷草的可溶性蛋白含量，在第14天時增加了72.7%， 而外施50和150 mmol/L甜菜堿對低溫脅迫下結縷草可溶性蛋白含量的影響并不顯著。

圖5　外施不同濃度甜菜堿對低溫脅迫下結縷草可溶性蛋白含量的影響Fig.5　Effects of exogenous glycine betaine with different concentrations on soluble protein content of Z. japonica under low-temperature stress

2.3.2脯氨酸含量從第14天開始，低溫脅迫顯著提高了結縷草的脯氨酸含量(P<0.05)，在第21天時，單獨低溫脅迫的結縷草脯氨酸含量達到峰值，與對照相比提高了22.46倍，此后其含量開始呈現下降趨勢(圖6)。在第28天時，與單獨低溫脅迫處理相比，外施50和100 mmol/L的甜菜堿分別使脯氨酸含量提高了1.65和3.73倍，而外施150 mmol/L的甜菜堿與單獨低溫脅迫處理相比沒有顯著差異。

圖6　外施不同濃度甜菜堿對低溫脅迫下結縷草脯氨酸含量的影響Fig.6　Effects of exogenous glycine betaine with different concentrations on proline content of Z. japonica under low-temperature stress

3討論與結論

坪觀質量是評價草坪質量好壞最直接的指標，更是評價草坪優劣的綜合性指標[24]。從本研究的結果可以看出，低溫脅迫會顯著降低結縷草的坪觀質量，而外施甜菜堿則可有效的緩解低溫脅迫對坪觀質量的影響，使結縷草保持較高的坪觀質量。葉綠素是植物光合作用中不可缺少的重要物質，更是反應葉片受傷程度最為直接的指標[25-26]。本實驗中，低溫脅迫顯著降低了結縷草的葉綠素含量，這與前人的研究結果相一致[27-28]。這可能是由于低溫脅迫不僅破壞了葉綠體的超微結構，導致光合色素降解，而且抑制了葉綠素的合成，從而降低了葉綠素的含量。外施甜菜堿則顯著緩解了低溫脅迫下結縷草葉綠素含量的降低，說明外施甜菜堿可以保護低溫脅迫下結縷草的葉綠體結構，從而使結縷草的葉綠素含量保持較高水平。

細胞膜系統是植物感受低溫最敏感的部位，也是植物抵抗低溫傷害的關鍵結構。電解質滲透率和丙二醛含量通常可以有效地反映出細胞膜系統的傷害程度和膜脂的過氧化程度[29-30]。本研究表明，低溫脅迫顯著增加了結縷草細胞膜的電解質滲透率和丙二醛含量，說明低溫脅迫導致了膜脂過氧化反應，破壞了結縷草的細胞膜系統。研究表明，甜菜堿能夠防止細胞膜的熱變性，降低原生質膜從液晶相轉變為凝膠相的溫度，從而對低溫脅迫下的細胞膜的完整性起到保護作用[31]。也有研究指出，甜菜堿可以穩定低溫脅迫下的細胞膜結構是由于甜菜堿的季銨化陽離子特性可以結合細胞膜上的羥基陰離子[32]。本實驗中，外施甜菜堿顯著降低了低溫脅迫下結縷草的電解質滲透率和丙二醛含量，說明外施甜菜堿能夠緩解低溫脅迫下結縷草的膜脂過氧化反應，對結縷草細胞膜系統的完整性起到了一定的保護作用，進而提高了結縷草對低溫脅迫的抵御能力。

低溫脅迫下植物體內積聚的活性氧是導致膜脂過氧化反應，細胞膜結構遭到破壞的重要原因，其中H2O2和O2·-是2個最常見的活性氧[33-34]。本研究表明，低溫脅迫顯著提高了結縷草的H2O2和O2·-含量，說明低溫脅迫使得自由基的產生和清除處于失衡的狀態，植物體內積聚了大量的H2O2和O2·-，造成了結縷草細胞膜的膜脂過氧化反應，進而導致丙二醛含量的上升。因此，提高植物的抗氧化代謝能力來清除活性氧對植物抵御低溫脅迫至關重要。酶促防御系統中，SOD負責將O2·-歧化成為H2O2，而CAT和POD則分別在葉綠體和細胞質將H2O2降解為無毒害作用的水分子和氧氣，同時APX則參與抗壞血酸-谷胱甘肽循環，催化抗壞血酸和H2O2反應從而協助清除植物體內的H2O2[35]。本實驗中，外施甜菜堿顯著提高了低溫脅迫下4種抗氧化酶的活性，從而降低了H2O2和O2·-含量。研究表明，甜菜堿可以防止蛋白質結構受到其他物質的破壞，穩定蛋白質的四級結構，尤其是在脅迫條件下，甜菜堿可以作為一種低分子量的伴侶分子來起到對酶蛋白構象的穩定作用，并使酶蛋白處于激活且有功能的狀態，增強酶的活力[36-37]。因此，外施甜菜堿可以有效激活結縷草的酶促防御系統，增強低溫脅迫下結縷草的抗氧化酶活性，從而清除低溫脅迫誘導出的多余的活性氧，進而提高了結縷草抵御低溫脅迫的能力。

可溶性蛋白和脯氨酸是植物體內的2種重要的滲透調節劑。可溶性蛋白和脯氨酸本身都具有很強的親水性，其含量的增加會提高細胞內束縛水的含量，進而保護細胞膜免受脫水的傷害，來達到提高植物抵御低溫脅迫能力的目的[38]。本研究表明，低溫脅迫顯著增加了結縷草的可溶性蛋白和脯氨酸含量，并且外施甜菜堿進一步增加了其含量。相關研究指出，增加的可溶性蛋白很可能是一些植物抵御低溫脅迫相關的或有專一性的功能蛋白酶[39]。也有研究表明，甜菜堿可能在加速低溫脅迫下受到損傷的蛋白質的從頭合成過程中起到一定作用[40]。因此，外施甜菜堿能夠通過可溶性蛋白和脯氨酸的滲透調節作用，進一步提高結縷草對低溫脅迫的抵抗性。

綜上所述，外源甜菜堿能夠有效緩解低溫脅迫下結縷草坪觀質量和葉綠素含量的降低，減少電解質滲透率和丙二醛含量的升高，一方面是通過提高結縷草的抗氧化代謝能力，增強了SOD、POD、CAT和APX的活性，從而清除了多余的H2O2和O2·-，進而保護了細胞膜結構的穩定性，提高了結縷草抵御低溫脅迫的能力；另一方面是通過提高可溶性蛋白和脯氨酸的滲透調節能力，增強胞內滲透勢，減少細胞失水，進而提高結縷草對低溫脅迫的抵抗性。其中，外施100 mmol/L甜菜堿對提高結縷草抵御低溫脅迫能力的效果最為顯著。

References：

[1]Editorial Committee of Flora Reipublicae Popularis Sinicae. Flora Reipublicae Popularis Sinicae[M]. Beijing: Science Press, 1990.

[2]Dong H D, Gong L J. Ecology ofZoysiajaponicaand the Exploitation and Application of Its Resources in China[M]. Beijing: China Forestry Publishing House, 2001.

[3]Liu J X, He S A, Liu Y D. Characteristics and economic value of warm season turfgrasses in east China. Grassland of China, 1997, (4): 62-66, 78.

[4]Wang Y, Li J L, Jiang T,etal. Effect of pre-treatments with SA, H2O2and 6-BA on chilling tolerance inZoysiamatrella. Acta Prataculturae Sinica, 2010, 19(2): 76-81.

[5]Wang D, Xuan J P, Guo H L,etal. Seasonal changes of freezing tolerance and its relationship to the contents of carbohydrates, proline, and soluble protein ofZoysia. Acta Prataculturae Sinica, 2011, 20(4): 98-107.

[6]Lu J, Yin H, Zhang P. Research progress and application prospect analysis in tobacco on glycine betaine. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2012, 28(19): 85-89.

[7]Wei J X. Physiological Effects of Exogenous Glycine Betaine on Cold Resistance in Banana Seedlings[D]. Danzhou: South China University of Tropical Agriculture, 2007.

[8]Li Y H, Zou Q. Genetic engineering of enzymes related to glycine betaine synthesis in plants. Plant Physiology Communications, 2002, 38(5): 500-504.

[9]Kamata T, Uemura M. Solute accumulation in wheat seedlings during cold acclimation: Contribution to increased freezing tolerance. Cryoletters, 2004, 25(5): 311-322.

[10]Kishitani S, Watanabe K, Arakawa S,etal. Accumulation of glycinebetaine during cold acclimation and freezing tolerance in leaves of winter and spring barley plants. Plant, Cell and Environment, 1994, 17(1): 89-85.

[11]Wang C, Ma X L, Hui Z,etal. Glycine betaine improves thylakoid membrane function of tobacco leaves under low-temperature stress. Photosynthetica, 2008, 46(3): 400-409.

[12]Li Y Y. Study on the Enhancement of Cold Resistance in Cucumber Seedlings by Exogenous Glycine Betaine[D]. Guangzhou: South China Normal University, 2003.

[13]Huang L H. Effect of exogenous betaine on cold resistance of corn seedlings. Hubei Agricultural Sciences, 2006, 45(2): 168-170.

[14]Hoagland D R, Arnon D I. The water culture method for growing plants without soil. California Agricultural Experiment Station Circular, 1950, 347: 1-32.

[15]Turgeon A J. Turfgrass Management (8th Ed.)[M]. Pearson Prentice Hall, Upper Saddle River, NJ, 2008.

[16]Smethurst C F, Shabala S. Screening methods for waterlogging tolerance in lucerne: comparative analysis of waterlogging effects on chlorophyll fluorescence, photosynthesis, biomass and chlorophyll content. Functional Plant Biology, 2003, 30(3): 335-343.

[17]Blum A, Ebercon A. Cell membrane stability as a measure of drought and heat tolerance in wheat. Crop Science, 1981, 21(1): 43-47.

[18]Heath R L, Packer L. Photoperoxidation in isolated chloroplasts: I. Kinetics and stoichiometry of fatty acid peroxidation. Archives of Biochemistry and Biophysics, 1968, 125(1): 189-198.

[19]Velikova V, Yordanov I, Edreva A. Oxidative stress and some antioxidant systems in acid rain-treated bean plants: protective role of exogenous polyamines. Plant Science, 2000, 151(1): 59-66.

[20]Jiang M Y, Zhang J H. Effect of abscisic acid on active oxygen species, antioxidative defense system and oxidative damage in leaves of maize seedlings. Plant and Cell Physiology, 2001, 42(11): 1265-1273.

[21]Zhang J X, Kirkham M B. Enzymatic responses of the ascorbate-glutathione cycle to drought in sorghum and sunflower plants. Plant Science, 1996, 113(2): 139-147.

[22]Bradford M M. A rapid and sensitive method for the quantitative determination of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry, 1976, 72: 248-254.

[23]Li H S. Experimental Principle and Technology of Plant Physiology and Biochemistry[M]. Beijing: Higher Education Press, 2000.

[24]Zheng H J, Hua L, Gao Z G. A study on indices system and assessment of turf quality. Journal of Capital Normal University (Natural Science Edition), 2003, 24(1): 78-82.

[25]Zhang R H, Guo D W, Zhang X H,etal. Effects of nitrogen on photosynthesis and antioxidant enzyme activities of maize leaf under drought stress. Journal of Maize Sciences, 2012, 20(6): 118-122.

[26]Dai Y C, Huang L, Chen L B. Identification and exploitation of chilling-resistance physiology in rice Xiang 25 (indica type) seeding upon five resistants. Journal of Natural Science of Hunan Normal University, 2000, 23(3): 88-94.

[27]Liang G J, Zhong J B, Shao L. Effects of “Leaf-Growing-Reagent for warm-season turf” on cold-resistance and chlorophyll content ofZoysiatenuifoliain winter. Pratacultural Science, 2004, 21(8): 85-88.

[28]Liu Y Q, Gao P, Lu L M,etal. Research progress of low-temperature stress and cold-resistance on turfgrass. Shandong Agricultural Sciences, 2012, 44(3): 53-57.

[29]Cai S Z, Pan Y Z, Chen Q B,etal. Effects of low temperatures on physiological and biochemical indexes and growth ofAsarumsplendens. Acta Prataculturae Sinica, 2010, 19(1): 95-102.

[30]Guo Y P, Mi F G, Yan L J,etal. Physiological response to drought stress and drought resistances evaluation of different Kentucky bluegrass varieties. Acta Prataculturae Sinica, 2014, 23(4): 220-228.

[31]Hincha D K. High concentrations of the compatible solute glycinebetaine destabilize model membrances under stress conditions. Crybiology, 2006, 53(1): 58-68.

[32]Coughlan S J, Heber U. The role of glycinebetaine in the protection of spinach thylakoids against freezing stress. Planta, 1982, 156(1): 62-69.

[33]Wang Y, Li J L, Deng L,etal. Effect of H2O2on the antioxidative system and chilling tolerance in Manilagrass (Zoysiamatrella). Chinese Journal of Grassland, 2010, 32(2): 92-97.

[34]Sun Y J, Jin P, Shan T M,etal. Effect of glycine betaine treatment on postharvest chilling injury and active oxygen metabolism in loquat fruits. Food Science, 2014, 35(14): 210-215.

[35]Foyer C H, Noctor G. Redox sensing and signaling associated with reactive oxygen in chloroplasts, peroxisomes and mitochondria. Physiologia Plantarum, 2003, 119(3): 355-364.

[36]Batenan J B, Evans G F, Brown P R,etal. Dielectric properties of the system bovine albumin urea: Betaine in aqueous solution. Physics in Medicine and Biology, 1992, 37(1): 175-182.

[37]Nomura M, Takabe T, Sugiyama T,etal. Transgenically produced glycinebetaine protects ribulose 1,5-bisphodphate carboxylase/oxygenase from inactivation in Synechococcus sp. PCC7942 under salt stress. Plant and Cell Physiology, 1998, 39(4): 425-432.

[38]Ren J, Huang Z L, Zeng L X,etal. A review of physiological reaction mechanism of plants exposed to low temperature stress. World Forestry Research, 2014, 26(6): 15-20.

[39]Zhang Y. Studies on the Low-temperature Physiology in Rice and Its Chilling Resistance[D]. Yanbian: Yanbian University, 2007.

[40]Alia, Kondo Y, Sakamoto A,etal. Enhanced tolerance to light stress of transgenicArabidopsisplants that express thecodAgene for a bacterial choline oxidase. Plant Molecular Biology, 1999, 40(2): 279-288.

參考文獻：

[1]中國植物志編委會. 中國植物志[M]. 北京: 科學出版社, 1990.

[2]董厚德, 宮莉君. 中國結縷草生態學及其資源開發與應用[M]. 北京: 中國林業出版社, 2001.

[3]劉建秀, 賀善安, 劉永東. 華東地區暖地型草坪草特征特性及其經濟價值. 中國草地, 1997, (4): 62-66, 78.

[4]王艷, 李建龍, 姜濤, 等.SA、H2O2和6-BA預處理對溝葉結縷草耐寒性的影響. 草業學報, 2010, 19(2): 76-81.

[5]王丹, 宣繼萍, 郭海林, 等. 結縷草的抗寒性與體內碳水化合物、脯氨酸、可溶性蛋白季節動態變化的關系. 草業學報, 2011, 20(4): 98-107.

[6]盧軍, 殷紅, 張平. 甜菜堿的研究進展及其在煙草中應用前景分析. 中國農學通報, 2012, 28(19): 85-89.

[7]韋建學. 外源甜菜堿對香蕉幼苗抗冷生理效應的影響[D]. 儋州: 華南熱帶農業大學, 2007.

[8]李永華, 鄒琦. 植物體內甜菜堿合成相關酶的基因工程. 植物生理學通訊, 2002, 38(5): 500-504.

[12]李蕓瑛. 外源甜菜堿提高黃瓜幼苗抗冷性研究[D]. 廣州: 華南師范大學, 2003.

[13]黃麗華. 甜菜堿對玉米幼苗抗寒性的影響. 湖北農業科學, 2006, 45(2): 168-170.

[23]李合生. 植物生理生化實驗原理和技術[M]. 北京: 高等教育出版社, 2000.

[24]鄭海金, 華珞, 高占國. 草坪質量的指標體系與評價方法. 首都師范大學學報(自然科學版), 2003, 24(1): 78-82.

[25]張仁和, 郭東偉, 張興華, 等. 干旱脅迫下氮肥對玉米葉片生理特性的影響. 玉米科學, 2012, 20(6): 118-122.

[26]戴玉池, 黃亮, 陳良碧. 5種抗寒劑對早稻相早秈25號幼苗的耐寒生理鑒定及其利用. 湖南師范大學自然科學學報, 2000, 23(3): 88-94.

[27]梁廣堅, 鐘鏡波, 邵玲. 暖地型草坪草綠葉生長劑對細葉結縷草抗寒性和葉綠素含量的影響. 草業科學, 2004, 21(8): 85-88.

[28]牛永強, 高鵬, 路來明, 等. 草坪草的低溫脅迫及抗寒性的研究進展. 山東農業科學, 2012, 44(3): 53-57.

[29]蔡仕珍, 潘遠智, 陳其兵, 等. 低溫脅迫對花葉細辛生理生化及生長的影響. 草業學報, 2010, 19(1): 95-102.

[30]郭郁頻, 米福貴, 閆利軍, 等. 不同早熟禾品種對干旱脅迫的生理響應及抗旱性評價. 草業學報, 2014, 23(4): 220-228.

[33]王艷, 李建龍, 鄧蕾, 等. H2O2對溝葉結縷草抗氧化系統及其耐寒性的影響. 中國草地學報, 2010, 32(2): 92-97.

[34]孫玉潔, 金鵬, 單體敏, 等. 甜菜堿處理對枇杷果實采后冷害和活性氧代謝的影響. 食品科學, 2014, 35(14): 210-215.

[38]任軍, 黃志霖, 曾立雄, 等. 低溫脅迫下植物生理反應機理研究進展. 世界林業研究, 2014, 26(6): 15-20.

[39]張巖. 水稻低溫生理及抗冷性的研究[D]. 延邊: 延邊大學, 2007.

梁小紅, 安勐潁, 宋崢, 徐廣臣, 濮陽雪華. 外源甜菜堿對低溫脅迫下結縷草生理特性的影響. 草業學報, 2015, 24(9): 181-188.

LIANG Xiao-Hong, AN Meng-Ying, SONG Zheng, XU Guang-Chen, PUYANG Xue-Hua. Effects of exogenous glycine betaine on the physiological characteristics ofZoysiajaponicaunder low-temperature stress. Acta Prataculturae Sinica, 2015, 24(9): 181-188.

通訊作者*Corresponding author. E-mail: puyangxuehua@163.com

作者簡介：梁小紅(1979-)，女，遼寧本溪人，實驗師。E-mail: liang81511@163.com

基金項目：國家863計劃-花卉、牧草、竹藤功能基因組學研究與應用項目(2013AA102607)資助。

收稿日期：2014-10-21；改回日期：2014-11-18

DOI：10.11686/cyxb2014431http://cyxb.lzu.edu.cn