胃炎飲對胃潰瘍大鼠胃黏膜前列腺素E2表達的影響

于文濤　方朝義　李　強　王少賢

(河北中醫(yī)學院，河北　石家莊　050091)

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胃炎飲對胃潰瘍大鼠胃黏膜前列腺素E2表達的影響

于文濤方朝義李強王少賢

(河北中醫(yī)學院，河北石家莊050091)

摘要〔〕目的探討胃炎飲對胃潰瘍模型大鼠胃黏膜前列腺素E2(PGE2)表達的影響。方法采用冰醋酸腐蝕法建立實驗性胃潰瘍大鼠模型，以奧美拉唑為對照，觀察胃炎飲對實驗性胃潰瘍大鼠胃黏膜潰瘍面積和胃黏膜PGE2表達及含量的影響。結果與假手術組比較，模型組大鼠胃黏膜PGE2表達平均光度明顯下降，平均灰度明顯升高，同時PGE2含量明顯下降(P<0.01)；與模型組比較，各用藥組潰瘍面積均明顯縮小，平均光度明顯升高，平均灰度明顯下降，PGE2含量明顯上升(P<0.05)；與奧美拉唑組比較，胃炎飲高劑量組潰瘍面積明顯縮小(P<0.05)，平均光度明顯升高，平均灰度明顯下降，PGE2含量明顯上升(P<0.05)。結論胃炎飲可促進胃潰瘍大鼠胃黏膜PGE2的合成和分泌，提高胃黏膜PGE2含量，增強胃黏膜防御功能，促進潰瘍愈合。

關鍵詞〔〕胃炎飲；實驗性胃潰瘍；前列腺素E2

第一作者：于文濤(1971-)，男，博士，副教授，碩士生導師，主要從事腦血管病及消化系統(tǒng)疾病證治規(guī)律研究。

胃潰瘍是由于胃酸分泌過多、幽門螺桿菌感染和胃黏膜保護作用減弱等多種因素導致胃酸和胃蛋白酶消化自身的胃壁，致使黏膜組織受損的疾病。胃炎飲為全國名老中醫(yī)藥專家楊牧祥教授的經(jīng)驗方，前期研究表明，該方藥治療多種慢性胃病均取得了理想療效〔1,2〕。本研究觀察了該藥對胃潰瘍大鼠胃黏膜前列腺素E2(PGE2)表達的影響。

1材料與方法

1.1動物與藥物選取清潔級雄性Wistar大鼠50只，體重200～220 g，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供。動物合格證編號：1205094。胃炎飲方：由柴胡、香附、川楝子、元胡、炒白術、茯苓、炙甘草、川連、陳皮、枳殼、姜半夏、姜竹茹等藥物組成，使用前水煎分別濃縮成含量為2.14 g生藥/ml(高劑量組)和1.07 g生藥/ml(低劑量組)的藥液。奧美拉唑腸溶膠囊：由哈藥集團三精制藥諾捷有限責任公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：1111304，批準文號：國藥準字p0064032，規(guī)格：每粒20 mg。使用前用蒸餾水配制成濃度為0.368 mg/ml的藥液。

1.2主要儀器RM-2125型切片機：德國LEICA公司。OLYMPUS 萬能顯微鏡：日本OLYMPUS公司。HMIAS2000高清晰度彩色醫(yī)學圖文分析系統(tǒng)(2004.1版本)：武漢千屏影像技術有限責任公司。FJ-2021γ-放射免疫計數(shù)器：西安二六二廠。

1.3主要試劑PGE2免疫組化試劑盒：購自Beijing Boisynthesis Biotechnology Co.LTD(bs-2639R)；PGE2放免試劑盒：北京東亞免疫技術研究所提供。

1.4模型建立50只大鼠隨機抽取8只作為假手術組，余42只參與正式造模。造模方法參照文獻〔3〕。大鼠術前禁食24 h，10%水合氯醛按每3 ml/kg體重腹腔注射麻醉，待大鼠失去意識后，于劍突下腹中線打開腹腔，暴露出胃，在胃前壁近幽門處，用浸有100%冰醋酸、直徑為5 mm的圓形濾紙接觸2次(注意避開血管)，每次30 s，棉簽吸干，生理鹽水沖洗，逐層縫合，手術過程按無菌操作。假手術組麻醉開腹，暴露胃壁，用生理鹽水代替冰醋酸浸濕濾紙接觸2次，每次30 s，縫合。

1.5分組及給藥在造模術后第3天，剔除死亡大鼠，將造模成功存活大鼠隨機抽取32只，分為模型組、胃炎飲高劑量組、胃炎飲低劑量組、奧美拉唑組，每組8只。各藥物治療組按體重分別灌胃給藥，胃炎飲高劑量組灌服濃度為2.14 g生藥/ml的胃炎飲方藥液10 ml/kg，胃炎飲低劑量組灌服濃度為1.07 g生藥/ml胃炎飲方藥液10 ml/kg，奧美拉唑組灌服濃度為0.368 mg/ml的奧美拉唑液10 ml/kg。各用藥組從造模術后第3天開始治療，假手術組、模型組灌胃等容積的生理鹽水，1次/d，治療天數(shù)為14 d。

1.6潰瘍面積檢測最后一次灌胃給藥后禁食24 h，斷頭處死，無菌操作剖腹取胃，沿胃大彎剪開，冰生理鹽水漂洗胃內(nèi)容物，把胃黏膜展平于平板上，濾紙吸干，肉眼觀察胃前壁近幽門的冰醋酸腐蝕處大體形態(tài)，用游標卡尺測量潰瘍的最大長徑和垂直最大寬徑，計算潰瘍面積(長×寬=面積)和潰瘍抑制率。

1.7各組大鼠胃黏膜PGE2表達的檢測采用免疫組化檢測PGE2表達情況。一抗為羊抗大鼠PGE2單克隆抗體、二抗為生物素化馬抗羊IgG。采用HMIAS=2000高清晰度彩色醫(yī)學圖文分析系統(tǒng)對染色陽性部位進行平均光度值和平均灰度值測定。平均光度值反映PGE2陽性表達強度，平均灰度值反映PGE2陰性表達強度。首先以高倍鏡(×400)在每張片子上隨機選取3個視野，系統(tǒng)自動計算其平均光度值和平均灰度值，每組取8個數(shù)據(jù)進入統(tǒng)計分析。

1.8各組大鼠胃黏膜PGE2含量檢測從靠近潰瘍灶或愈合處周圍剪取胃組織，稱重后移入玻璃勻漿管中，冰盤上勻漿，充分研碎，采用放免法檢測胃黏膜PGE2含量。

1.9統(tǒng)計學處理采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件行單因素方差分析及LSD法。

2結果

2.1大體形態(tài)觀察模型組大鼠胃黏膜潰瘍處呈圓形或橢圓形凹陷，狀若火山口，邊緣整齊，潰瘍底部覆蓋有灰白色炎性滲出物和壞死物，潰瘍周圍黏膜組織皺襞變粗，部分潰瘍組織與周圍組織粘連。各治療組大鼠潰瘍形態(tài)與模型組相似，但面積較小，滲出物和壞死物較少。假手術組大鼠胃黏膜未見異常。

2.2各組大鼠潰瘍面積及潰瘍抑制率比較與模型組比較，各用藥組潰瘍面積均明顯縮小(P<0.05)；與奧美拉唑組比較，胃炎飲高劑量組潰瘍面積明顯縮小(P<0.05)；與胃炎飲低劑量組比較，胃炎飲高劑量組潰瘍面積明顯縮小(P<0.05)；胃炎飲高劑量組潰瘍抑制率高于胃炎飲低劑量組和奧美拉唑，說明高劑量胃炎飲對潰瘍療效優(yōu)于低劑量和奧美拉唑。見表1。

2.3各組大鼠胃黏膜PGE2表達的比較與假手術組比較，模型組大鼠PGE2表達平均光度明顯下降，平均灰度明顯升高(P<0.01)；經(jīng)用藥治療后，各治療組與模型組比較，平均光度明顯升高，平均灰度明顯下降(P<0.01或P<0.05)；各治療組間比較，胃炎飲高劑量組較對照組平均光度明顯升高，平均灰度明顯下降(P<0.05)，胃炎飲高劑量組較胃炎飲低劑量組平均光度明顯升高(P<0.05)。見表2，圖1。

表1　各組大鼠潰瘍面積和潰瘍抑制率比較±s,n=8)

與模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與奧美拉唑組比較：3)P<0.05；與胃炎飲高劑量組比較：4)P<0.05，下表同

表2　各組大鼠胃黏膜PGE2表達的比較

假手術組

模型組

胃炎飲高劑量組

胃炎飲低劑量組

奧美拉唑組

2.4各組大鼠胃黏膜PGE2含量的比較與假手術組比較，模型組大鼠胃黏膜PGE2含量明顯下降〔(108.12±26.52) vs (211.25±24.28)pg/mg,P<0.01〕；與模型組比較，各治療組均可明顯升高PGE2含量(P<0.01)；各治療組間比較，胃炎飲高劑量組PGE2含量〔(190.37±24.34)pg/mg〕明顯高于奧美拉唑組〔(156.50±23.42)pg/mg〕和胃炎飲低劑量組〔(164.25±17.71)pg/mg,P<0.05〕。

3討論

胃潰瘍的病位在胃，與肝脾等臟腑功能失調(diào)密切相關，主要病機為肝郁脾虛，胃失和降，故以疏肝健脾，和胃降逆為主要治法。“胃炎飲”由柴胡、香附、川楝子、元胡、炒白術、茯苓、炙甘草、川連、陳皮、枳殼、姜半夏、姜竹茹等藥物組成。方中柴胡為君藥，疏肝解郁，理氣止痛；香附、川楝子、元胡為臣藥，重在理氣止痛，并加強柴胡疏肝解郁作用；炒白術、茯苓、炙甘草健脾益氣，扶土抑木，川連清利濕熱，以防肝郁化火，并佐制香附辛燥太過，四藥共為佐藥；枳殼、陳皮理氣和中，姜竹茹、姜半夏和胃降逆，四藥共為使藥。上藥合用，共達疏肝健脾，和胃降逆的作用。PGE2是公認的胃黏膜修復和保護因子，具有防止各種有害物質(zhì)對消化道上皮細胞損傷作用。PGE2可通過促進胃黏膜黏液分泌、增加黏膜血流量、刺激胃上皮細胞再生和黏膜基底細胞向表面移行以及抑制胃酸分泌、清除氧自由基、刺激及穩(wěn)定溶酶體膜等多種機制來保護胃黏膜〔4，5〕。研究表明，通過提高胃潰瘍小鼠模型胃黏膜PGE2含量，可降低潰瘍指數(shù)，促進潰瘍愈合〔6〕。本研究結果顯示，潰瘍形成過程中，胃黏膜合成分泌PGE2功能受損，胃炎飲可促進胃潰瘍大鼠胃黏膜PGE2的合成和分泌，提高胃黏膜PGE2含量，增強胃黏膜防御功能，促進潰瘍愈合。

參考文獻4

1楊牧祥，于文濤，王秉岳，等.胃炎飲治療膽汁反流性胃炎116例臨床療效觀察〔J〕.中國現(xiàn)代藥物應用，2009；3(15)：73-4.

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〔2014-06-09修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

通訊作者：方朝義(1965-)，男，博士，教授，主要從事呼吸系統(tǒng)及消化系統(tǒng)疾病研究。

基金項目：河北省中醫(yī)藥管理局科研計劃資助項目(No.2011008)

中圖分類號〔〕R573.1〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)21-6043-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.21.017