耐藥性癲癇患者腦脊液中HSPBAP1表達及意義

孫紀軍　劉力峰　陶樹新　單廣振　王　敏　夏章勇　馬紅玲　徐　飛

山東聊城市人民醫院神經內科　聊城　252000

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耐藥性癲癇患者腦脊液中HSPBAP1表達及意義

孫紀軍劉力峰陶樹新單廣振王敏夏章勇馬紅玲徐飛

山東聊城市人民醫院神經內科聊城252000

【摘要】目的探討耐藥性癲癇患者腦脊液中熱休克蛋白27相關蛋白1(heat shock 27kDa associated protein 1，HSPBAP1)表達的臨床意義。方法 采集36例耐藥性癲癇患者的腦脊液標本，應用酶聯免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)方法檢測腦脊液HSPBAP1的表達，并與16例對照組進行比較。結果耐藥性癲癇患者腦脊液HSPBAP1表達量較對照組明顯增加(P<0.05)。結論耐藥性癲癇患者腦脊液HSPBAP1表達量明顯升高，其可能通過抑制熱休克蛋白27(heat shock protein 27，HSP27)的神經元保護作用，導致神經元凋亡及海馬苔蘚纖維發芽。

【關鍵詞】耐藥性癲癇；腦脊液；熱休克蛋白27相關蛋白1

早期研究[1]發現，耐藥性癲癇患者腦組織中HSPBAP1表達量明顯升高，鑒于耐藥性癲癇患者腦組織標本取材困難、不易獲得，而腦脊液獲得較容易，因此，本研究旨在對耐藥性癲癇患者腦脊液HSPBAP1進行檢測，以探討其在耐藥性癲癇鑒別診斷方面的臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料收集2005-2015年就診于重慶醫科大學附屬第一醫院神經內科及山東省聊城市人民醫院神經內科住院病人的腦脊液標本。耐藥性癲癇患者納入標準：(1)有癲癇發作的典型表現和腦電圖特征表現，規律服用2種或2種以上一線抗癲癇藥(如卡馬西平、苯妥英鈉、丙戊酸等)，血藥濃度在正常高線，與用藥前基線比較，發作頻率無明顯減少；(2)無明顯病因可尋，神經系統檢查無局灶性神經系統陽性體征，或雖有體征但與癲癇發作無關；(3)頭顱CT/MRI檢查除海馬硬化外，無其他異常發現；(4)病人的發作類型符合國際抗癲癇聯盟2001年有關癲癇發作類型的規定；(5)病人及其家屬術前簽注知情同意書。共入選36例，男19例，女17例；平均年齡(22.18±8.92)歲；病程2.5～30 a，平均(9.54±5.48)a。正常對照組腦脊液標本選取因鑒別診斷需要行腰椎穿刺術檢查，最后確診為癔病患者。納入標準：(1)無家族性遺傳病及其他神經系統疾病史；(2)腦電圖檢查無異常發現；(3)血液分析、頭顱CT/MRI檢查未見明顯異常；(4)無癲癇史及抗癲癇藥物服用史；(5)經患方知情同意。其中男4例，女12例；平均年齡(26.79 ±9.63)歲。本研究實施謹遵赫爾辛基宣言，并獲得相關單位倫理委員會批準。

1.2方法2組均采集腦脊液3 mL于清潔干燥試管中，置于-80 ℃冰箱保存待檢。所有腦脊液標本均凍融1次。標本檢測采用酶聯免疫吸附雙抗夾心法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)定量，兔抗人HSPBAP1多克隆抗體試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，操作步驟按照試劑盒說明進行。

2結果

耐藥性癲癇組腦脊液中HSPBAP1水平(9501.83±245.09)，明顯高于對照組的(483.02±11.38)，差異有統計學意義(P<0.05)。

3討論

HSPBAP1是在2001年報道發現的一種新的蛋白質，研究發現，除人腦組織外，HSPBAP1在人的其他組織中均有表達[2]。在我們早期研究發現，HSPBAP1在耐藥性癲癇腦組織中表達明顯增多，提示HSPBAP1高表達成為癲癇，尤其是耐藥性癲癇的一個重要生物學標志[1]，與本研究結果相符。

HSP27能特異性抑制細胞色素C-caspase家族介導的細胞凋亡過程，阻止caspases級聯反應的發生；以及Fas介導的依賴Daxx(一種Fas死亡結構域相關蛋白)的JNK/SAPK信號傳導通路，誘導神經元凋亡[3]；同時還能快速、顯著的抑制KV誘導癇性放電的傳播和癇性發作[4]。HSP27能通過提高細胞對應激反應的耐受性，從而抑制神經元凋亡[5]；維持谷胱苷肽活性，抵抗活性氧對神經元的氧化損傷[6-7]；調控微絲動力學，介導細胞骨架重構等[8]。

在耐藥性癲癇發病機制的研究中發現，神經元自我保護作用的降低是一個重要原因，而熱休克蛋白功能異常是其中一個首要因素。研究發現，HSPBAP1與HSP27的功能活性相關，HSPBAP1能抑制HSP27內源性神經元自身保護作用，誘導神經元凋亡[9]。耐藥性癲癇病理生理研究中最為重要的發現即為神經元凋亡或壞死。在紅藻氨酸點燃的癲癇動物模型中，癇性發作能啟動caspase3的活化，誘導凋亡程序的啟動，導致海馬CA1、CA3區的30%～50%神經元發生凋亡或壞死，成為癲癇耐藥性形成的基礎[3，5]。

另外，HSPBAP1還能阻礙磷酸化后HSP27對肌動蛋白聚合作用的抑制，抑制微絲的去組裝，促進神經元軸突、樹突的延伸，觸發齒狀回顆粒細胞軸突芽胞形成和苔蘚纖維異常發芽，最終導致興奮性突觸的重構和病理性神經網絡重組，苔蘚纖維芽生是異常神經網絡的重要標志，被認為是耐藥性癲癇發病機制之一。耐藥性癲癇患者的“風暴區”(海馬齒狀回)有明顯的病理性芽生，芽生所形成的苔蘚纖維突入齒狀回分子層中，與多種細胞建立了側支聯系，組成了新的循環通路；在有苔蘚纖維形成的動物腦組織切片上應用興奮性氨基酸微滴可使稍遠的齒狀回細胞興奮性增加，神經元網絡的重組不僅改變了癇樣電流傳播的途徑，而且繞過了許多一線抗癲癇藥作用的環節，導致癲癇耐藥的形成。

鑒于耐藥性癲癇腦組織取材困難，而腦脊液取材較容易，基于以前腦組織的研究，我們利用ELISA法測定耐藥性癲癇患者腦脊液中HSPBAP1高表達，為臨床上癲癇的鑒別診斷提供生物學標志，從而探索開發耐藥性癲癇腦脊液差異表達蛋白的“診斷試劑盒”提供理論依據。目前國際上還沒有一種類似的檢驗方法，因而，本研究結果可以推廣到臨床癲癇的鑒別診斷中，從而獲得較大的經濟和社會效益。

4參考文獻

[1]Xi ZQ，Sun JJ，Wang XF，et al.HSPBAP1 is found extensively in the anterior temporal neocortex of patients with intractable epilepsy[J].Synapse，2007，61(9)：741-747.

[2]Jiang M，Ma Y，Cheng H，et al.Molecular cloning and characterization of a novel human gene(HSPBAP1)from human fetal brain[J].Cytogenet Cell Genet，2001，95(1/2)：48-51.

[3]Charette SJ，Lavoie JN，Lambert H，et al.Inhibition of Daxx-Mediated Apoptosis by Heat Shock Protein 27[J].Mol Cell Biol，2000，20(20)：7 602-7 612.

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[5]Wagstaff MJ，Colla?o-Moraes Y，Smith J，et al.Protection of Neuronal Cells from Apoptosis by Hsp27 Delivered with a Herpes Simplex Virus-based Vector[J].J Biol Chem，1999，274(8)：5 061-5 069.

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[9]Liu C，Gilmont RR，Benndorf R，et al.Identification and Characterization of a Novel Protein from Sertoli Cells，PASS1，That Associates with Mammalian Small Stress Protein hsp27[J].J Biol Chem，2000，275(25)：18 724-18 731.

(收稿2015-12-07)

The expression of HSPBAP1 in cerebrospinal fluid in patients with drug-refractory epilepsy and its clinical significance

SunJijun，LiuLifeng，TaoShuxin，ShanGuangzhen，WangMin，XiaZhangyong，MaHongling，XuFei

DepartmentofNeurology，thePeople’sHospitalofLiaochengCity，Liaocheng252000，China

【Abstract】Objective To study the expression of heat shock 27kDa associated protein 1 (HSPBAP1) in the cerebrospinal fluid of drug-refractory epilepsy and discuss its clinical significance.Methods Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)was used to test the expression of HSPBAP1 in the cerebrospinal fluid of patients with drug-refractory epilepsy (n=36) and normal controls (n=16).Results The expression level of HSPBAP1 of patients was significantly higher than that of normal controls (P<0.05).Conclusion The expression of HSPBAP1 over-expresses in patients with drug-refractory epilepsy，which can result in neural apoptosis and make mossy fiber of hippocampus sprout through inhibiting the neuroprotective effect of heat shock protein 27 (HSP27).

【Key words】Drug-refractory epilepsy；Cerebrospinal fluid；HSPBAP1

【中圖分類號】R742.1

【文獻標識碼】A

【文章編號】1673-5110(2016)12-0017-02