子宮內膜癌與PTEN、NDRG1的相關研究

步翠霞 王言奎

·論著·

子宮內膜癌與PTEN、NDRG1的相關研究

步翠霞 王言奎

目的研究子宮內膜癌中磷酸酯酶與張力蛋白同源物(PTEN)和分化相關基因1(NDRG1)的表達與臨床病理因素的關系。方法運用免疫組化SP方法檢測77例觀察組病例(均為子宮內膜癌患者)、55例對照組病例［正常子宮內膜40例(增殖期23例、分泌期17例)、子宮內膜不典型增生15例］中PTEN和NDRG1的表達情況,分析子宮內膜癌中二者與各臨床病理因素的關系。結果PTEN在正常子宮內膜中陽性表達率最高,為87.5%(35/40),在不典型增生內膜和子宮內膜癌中明顯降低,分別為60.0%(9/15)、14.3%(11/77)。而NDRG1在子宮內膜癌中陽性表達率為87.0%(67/77),明顯高于正常子宮內膜27.5%(11/40)和不典型增生內膜40.0%(6/15)(P＜0.01)。二者表達均與子宮內膜癌患者的年齡、臨床分期無相關性,而與細胞分化程度、肌層浸潤深度、有無淋巴結轉移有關。結論PTEN和NDRG1與子宮內膜癌的發生、發展、轉移有關。

子宮內膜癌；磷酸酯酶與張力蛋白同源物；分化相關基因1；免疫組化

子宮內膜癌是女性生殖道三大惡性腫瘤之一,近年來發病率在世界范圍呈上升趨勢,其病因至今不十分清楚。惡性腫瘤的發生、發展是一個多步驟、多基因的演變過程,抑癌基因失活和癌基因異常激活在此過程中可能起重要作用。進一步研究抑癌基因和癌基因在子宮內膜癌中的表達及相互作用,了解其與子宮內膜癌的發生、發展和預后的關系,有助于為子宮內膜癌患者預防、治療提供新的科學依據。本次研究采用免疫組化方法檢測子宮內膜癌中PTEN、NDRG1的表達,并探討其臨床意義,現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院婦產科2012年1月～2015年6月住院子宮內膜癌行手術的病例作為觀察組,共77例,患者年齡42～71歲。選擇對照組病例55例,其中正常子宮內膜40例(增殖期23例、分泌期17例)、子宮內膜不典型增生15例,患者年齡39～73歲。以上病例均經術后病理確診,臨床資料完整,均為生育后婦女,術前均未接受過化療、放療和激素等治療。

1.2 主要試劑 即用型鼠抗人單克隆PTEN抗體購自福建邁新公司；兔抗人NDRG1多克隆抗體購自上海雅吉公司的濃縮型試劑,稀釋倍數1：100；二抗、PBS沖洗液、DAB顯色試劑購自北京中杉生物技術有限公司。

1.3 實驗方法 PTEN和NFRG1均采用SP兩步免疫組化染色法：標本經10%甲醛固定,石蠟包埋,采用4 μm厚度連續切片,按照試劑盒說明書進行操作。常規石蠟切片脫蠟水化,高壓鍋抗原修復1min,PBS沖洗加入一抗,4℃冰箱過夜,次日PBS沖洗,加二抗室溫孵育30min,PBS沖洗后加DAB顯色,蘇木素復染5min,蒸餾水沖洗,中性樹膠封片。每批切片均用已知陽性切片作為陽性對照,PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.4 結果判定標準 PTEN陽性染色主要位于細胞核或細胞漿,呈黃色或棕黃色顆粒。NDRG1免疫組織化學陽性信號主要位于細胞質,部分位于細胞膜,呈淺黃色至棕黃色。請兩位病理科醫師采用雙盲法觀察切片,隨機選取5個高倍鏡視野(×400),每個視野計數100個細胞,觀察陽性細胞所占的百分比并進行判斷：陽性細胞率≤10%定義為陰性,陽性細胞率＞10%定義為陽性。

1.5 統計學方法 應用SPPS13.0統計學軟件對研究數據進行統計分析。計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 PTEN和NDRG1在子宮內膜組織中的表達情況 PTEN在正常子宮內膜中陽性表達率最高,為87.5%(35/40),在不典型增生內膜和子宮內膜癌中明顯降低,分別為60.0%(9/15)、14.3%(11/77)。而NDRG1在子宮內膜癌中陽性表達率為87.0%(67/77),明顯高于正常子宮內膜27.5%(11/40)和不典型增生內膜40.0%(6/15)(P＜0.01)。見表1。

2.2 子宮內膜癌中PTEN、NDRG1表達與患者臨床病理特征的關系 將子宮內膜癌的所有病例按照年齡、細胞分化程度、肌層浸潤深度、有無淋巴結轉移、臨床分期進行分項,比較PTEN和NDRG1在不同項目中的表達情況, PTEN和NDRG1均與子宮內膜癌患者的年齡、臨床分期無相關性,而與細胞分化程度、肌層浸潤深度、有無淋巴結轉移有關。PTEN在子宮內膜癌中高、中分化表達情況高于低分化；深肌層浸潤中表達低于淺肌層浸潤；有淋巴結轉移的表達低于無轉移。而NDRG1的表達正好相反,在子宮內膜癌中高、中分化表達高于低分化；深肌層浸潤中表達高于淺肌層浸潤；有淋巴結轉移的表達高于無轉移。見表2。

3 討論

子宮內膜癌病變發展復雜,此過程中伴有多種基因和蛋白表達的失調。PTEN是第一個被發現的具有雙特異磷酸酶活性的抑癌基因［1］,不僅能誘導細胞凋亡、抑制細胞分裂,而且作用于細胞生理多方面(包括細胞的轉移、分化)。NDRG1作為一種細胞分化相關基因,與腫瘤的發生、發展及轉移有密切聯系,且能被多種分化調節劑誘導表達［2］,對腫瘤的治療具有潛在作用。

本實驗中作者應用免疫組化的方法研究了PTEN和NDRG1在子宮內膜癌中的表達,結果發現：PTEN的表達缺失和NDRG1的陽性表達,在正常子宮內膜、不典型增生內膜、子宮內膜癌中有明顯升高趨勢。另外發現：PTEN表達與子宮內膜癌細胞分化程度呈正相關,即子宮內膜細胞惡性程度越高、分化程度越低,PTEN的陽性率越低,即PTEN的表達缺失越明顯。而NDRG1隨著子宮內膜細胞惡性程度的增加,陽性表達趨勢升高,兩者表達趨勢相反。

Bandyopadhyay等［2］研究了PTEN與NDRG1的表達關系,認為PTEN上調NDRG1基因,NDRG1基因是PTEN作用的靶基因之一,PTEN表達增加可提高NDRG1的表達。今后PTEN和NDRG1可作為腫瘤相關基因的候選基因,有望為腫瘤的臨床診治、預防及個體化治療等提供新的方法。聯合檢測NDRG1和PTEN的表達可能對判斷腫瘤的生物學行為具有重要價值。與傳統的放化療相比,腫瘤誘導分化治療避免了殺傷正常細胞的不良反應,治療腫瘤具有較好的前景［3,4］。隨著研究的不斷深入,PTEN和NDRG1的功能以及二者在子宮內膜癌中發生、發展、治療和預后中的作用會進一步明確。

［1］Tortes J,Pulido R.The tumor suppressor PTEN is phosphorylated by the protien kinase CK2 at its C terminus.Implications for PTEN stability to preteasome mediated degration.J Biol Chem,2001,276(2):993-998.

［2］Bandyopadhyay S,Pai SK,Hirota S,et al.PTEN up-regulates the tumor metastisis suppressor gene Drg-1 in prostate and breast cancer.Cancer Res,2004,64(21):7655.

［3］王震,王國英,王芳.分化相關基因NDRG1與腫瘤.中華病理學雜志,2003,32(2):162-164.

［4］王立瑋.分化相關基因NDRG1與腫瘤相關性的研究進展.實用腫瘤學雜志,2007,21(5):481-485.

Correlation research of endometrial cancer,PTEN and NDRG1

BU Cui-xia,WANG Yan-kui.Department of Obstetrics and Gynecology,Qingdao University Affiliated Hospital of Medical School,Qingdao 266003,China

ObjectiveTo research relationship between expressions of phosphatase and tensin homolog (PTEN) and N-myc downstream-regulated gene 1 (NDRG1) in endometrial cancer and clinical pathological factors.MethodsExpressions of PTEN and NDRG1 were detected by immunohistochemical SP method in observation group with 77 patients (all the cases with endometrial cancer) and control group with 55 patients ［40 cases with normal endometrium (23 cases at proliferating phase and 17 cases at secretory phase),15 cases with atypical endometrial hyperplasia］.Relationship between PTEN,NDRG1 and clinical pathological factors was analyzed.ResultsPTEN had the highest positive expression rate in normal endometrium as 87.5% (35/40),and its rates in atypical endometrial hyperplasia and endometrial cancer were obviously lower as 60.0% (9/15) and 14.3% (11/77).NDRG1 had much higher positive expression rate in endometrial cancer as 87.0% (67/77) than 27.5% (11/40) in normal endometrium and 40.0% (6/15) in atypical endometrial hyperplasia (P＜0.01).Their expressions were not correlated with age and clinical phase of endometrial cancer patients,while they all had correlation with cell differentiation,myometrial invasion,and lymphatic metastasis.ConclusionPTEN and NDRG1 are correlated with occurrence,development and metastasis of endometrial cancer.

Endometrial cancer; Phosphatase and tensin homolog; N-myc downstream-regulated gene 1; Immunohistochemistry

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.07.001

2015-12-24］

266003 青島大學醫學院附屬醫院婦產科

王言奎