血小板源性生長因子D基因多態性與冠狀動脈粥樣硬化斑塊穩定性的關系

高靜，陳玉東,劉相飛

(勝利油田中心醫院，山東東營257034)

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血小板源性生長因子D基因多態性與冠狀動脈粥樣硬化斑塊穩定性的關系

高靜，陳玉東,劉相飛

(勝利油田中心醫院，山東東營257034)

摘要：目的分析血小板源性生長因子D(PDGF-D)基因多態性與冠狀動脈粥樣硬化斑塊穩定性的關系。方法疑診冠心病患者349例，其中經冠脈動脈造影確診冠心病237例(觀察組)、排除冠心病112 例(對照組)，觀察組確診后行血管內超聲檢查判斷斑塊穩定性，兩組均采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性方法檢測PDGF-D rs7950273位點基因型。結果觀察組rs7950273位點CC、GG基因型頻率分別為26.2%、18.1%，C等位基因頻率為54.1%；對照組分別為14.2%、34.8%、39.7%，P均<0.05。觀察組易損斑塊者CC基因型、C等位基因頻率分別為31.5%、57.9%，混合斑塊者分別為31.3%、58.4%，均高于穩定斑塊者的12.3%、43.1%(P均<0.05)，易損斑塊與混合斑塊者比較P均>0.05。結論冠狀動脈粥樣硬化斑塊越不穩定，PDGF-D rs7950273位點CC基因型頻率和C等位基因頻率越高；PDGF-D rs7950273位點C等位基因可能是冠狀動脈粥樣硬化斑塊不穩定的遺傳易感基因。

關鍵詞：血小板源性生長因子D；基因多態性；冠心病；動脈粥樣硬化斑塊

冠狀動脈粥樣硬化斑塊(以下簡稱斑塊)破裂和血栓形成是導致急性心血管事件的病理基礎。血小板源性生長因子D(PDGF-D)是血清中的一種強有絲分裂原分子，與其受體結合后促進血管平滑肌細胞(VSMC)增生、遷移，促進新生血管形成[1]。研究表明，冠心病患者血清PDGF-D水平明顯升高，是ACS發生的獨立預測因素[2]。PDGF-D基因多態性與冠狀動脈斑塊穩定性是否存在關聯，尚未見報道。2013年1月～2014年12月，我們檢測了PDGF-D rs7950273位點基因多態性，分析其與冠狀動脈斑塊穩定性的關系。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇我院同期收治的并久居本地的疑診冠心病患者349例，其中經冠脈動脈造影(CAG)確診冠心病237例(觀察組)，男158例、女79例，吸煙78例，高血壓病128例，糖尿病76例；排除冠心病112 例(對照組)，男75例、女37例，吸煙37例，高血壓病61例，糖尿病35例。所有研究對象排除嚴重肝腎功能不全、腫瘤、吸毒或酗酒、既往血運重建、存在導致預期壽命≤6個月的嚴重疾病。

1.2斑塊穩定性檢查方法CAG確診冠心病后行血管內超聲(IVUS)檢查，根據血管內超聲虛擬組織學成像技術(VH-IVUS)將斑塊分為穩定斑塊、易損斑塊、混合斑塊[3]。

1.3PDGF-D基因多態性檢測方法采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)方法。入院后即刻EDTA抗凝管采集3 mL靜脈血于-80 ℃冰箱備用，用血液基因組DNA提取試劑盒提取DNA。采用Oligo 6.0軟件設計并合成PDGF-D rs7950273位點上、下游引物，分別為5′-GCCACA-TTTAGCCATTCT-3′、5′-TGTTGGGATGAAGAAAGG-3′，PCR擴增片段長度是320 bp。取PCR擴增產物，用限制性內切酶BsmAⅠ進行酶切。用3%瓊脂糖凝膠電泳對酶切后的PCR擴增產物進行分離，凝膠成像儀器進行拍照，進而得到基因型。CC基因型出現320 bp 1條條帶，GG基因型出現192、128 bp 2條條帶，雜合子CG基因型出現320、192、128 bp 3條條帶)。

1.4 統計學方法采用SPSS17.0統計軟件。各基因型頻率及等位基因頻率分布差異行χ2檢驗，用 Hardy-Weinberg遺傳平衡定律進行等位基因確認。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1斑塊穩定性檢查結果 觀察組中，穩定斑塊65例、易損斑塊89例、混合斑塊83例。

2.2PDGF-D基因多態性及其與冠狀動脈斑塊穩定性的關系兩組PDGF-D rs7950273位點的基因型頻率均符合Hardy-Weinberg平衡，無統計學差異。兩組PDGF-D基因rs7950273位點基因型及等位基因分布比較，見表1。

表1　兩組PDGF-D基因rs7950273位點基因型

注：與對照組比較，*P<0.05；與觀察組易損斑塊、混合斑塊比較，#P<0.05。

3討論

遺傳因素在冠心病的發生、發展過程中居于極其重要的地位,其在冠心病發病中的貢獻可達50%[4～7]。目前認為，冠心病是遺傳-遺傳、遺傳-環境因素共同作用的結果。單核苷酸多態性(SNP)主要表現為基因組核苷酸水平上的變異導致DNA序列多態性，在人類遺傳學研究中有重要意義[8]。自2002年開始[9]，以SNP為基礎的全基因組相關分析成為冠心病遺傳易感性研究的主流方法。與以往的候選基因研究及家系研究相比，其研究范圍更廣，所獲結果更可靠，且不同研究所得數據可實現共用，進一步提高了檢驗效力[10，11]。

RPDGF-D是由平滑肌細胞、成纖維細胞、內皮細胞、巨噬細胞等分泌后，從無活性酶原形式經水解形成同源二聚體PDGF-DD，再與細胞表面的受體結合，導致自身和受體磷酸化反應，參與多種信號轉導通路，從而促進成纖維細胞、平滑肌細胞及血管內皮細胞和神經元等細胞增殖與分化，在動脈粥樣硬化、動脈損傷后的修復、纖維增生性疾病和惡性腫瘤的發生中起重要作用[12～14]。研究已證實，PDGF-D參與動脈粥樣硬化的發生、發展過程，而動脈粥樣硬化是冠心病重要的發病機制，提示PDGF-D可能是誘發冠心病的候選基因。Awazu等[14]對PDGF-D rs3809021、rs7950273位點與腦卒中的關聯性及功能進行了研究，但未見PDGF-D與冠心病的相關性研究。本研究發現，PDGF-D rs7950273位點的CC基因型和C等位基因頻率觀察組顯著高于對照組，觀察組易損斑塊和混合斑塊者均顯著高于穩定斑塊者，提示PDGF-D rs7950273位點基因多態性與冠心病的發病和斑塊不穩定可能相關，該位點C等位基因可能是冠狀動脈斑塊不穩定的遺傳易感基因。其具體機制可能與 C 等位基因干預了PDGF-D 基因rs7950273蛋白翻譯效率，影響PDGF-D的表達有關。

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收稿日期：(2015-08-12)

通信作者：陳玉東

基金項目：山東省醫藥衛生科技發展計劃項目(2011HW075)。

中圖分類號：R541.4

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2015)46-0066-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.46.029