反相液相色譜法測定鹽酸氨溴素吸入溶液中苯扎氯銨的含量

反相液相色譜法測定鹽酸氨溴素吸入溶液中苯扎氯銨的含量

卜宇倩*蔣宇丹**邵佶祥

( 上海禾豐制藥有限公司 上海 201206)

摘 要目的：建立鹽酸氨溴素吸入溶液中苯扎氯銨含量的反相液相色譜測定方法。方法：采用Agilent Zorbax SBC18色譜柱（4.6 mm × 250 mm，5 mm）；以0.02 mol/L庚烷磺酸鈉（含0.1%三乙胺，用磷酸調節pH至3.0±0.1）-乙腈（35∶65）為流動相；檢測波長208 nm；進樣體積20 ml。結果：苯扎氯銨濃度在3.32～7.74 mg/ml范圍內線性關系良好，平均回收率為99.2%。結論：該方法快速、簡便、準確、專屬性強、重復性好，可適用于鹽酸氨溴索吸入溶液中苯扎氯銨的含量測定。

關鍵詞苯扎氯銨 鹽酸氨溴索吸入溶液 反相液相色譜法

Determination of benzalkonium chloride in ambroxol hydrochloride inhalation solution by RP-HPLC

BU Yuqian*, JIANG Yudan**, SHI Jianguo

(Shanghai Harvest Pharmaceutical Co. Ltd., Shanghai 201206, China)

ABSTRACTObjective: To establish a RP-HPLC method for the quantitative analysis of benzalkonium chloride in ambroxol hydrochloride inhalation solution. Methods: RP-HPLC was performed on a column of an Agilent Zorbax SB- C18(4.6 mm × 250 mm，5 mm) with a mobile phase of 0.02 mol/L sodium 1-heptanesulfate solution (containing 0.1% triethylamine, adjusted pH to 3.0±0.1 by phosphate)-acetonitrile (35∶65) and at UV detection wavelength of 208 nm. Results: The standard curve was linear over the range of 3.32~7.74 mg/ml with the average recovery 99.2% (n=9). Conclusion: This method is fast, simple, accurate, sensitive with good reproducibility and can be applied in the determination of benzalkonium chloride in ambroxol hydrochloride inhalation solution.

KEY WORDSbenzalkonium chloride；ambroxol hydrochloride inhalation solution；RP-HPLC

鹽酸氨溴索（ambroxol hydrochloride）是目前臨床作用較強的黏液溶解型祛痰藥，廣泛應用于各種急、慢性呼吸道疾病引起的痰液黏稠，咳痰困難。其霧化吸入溶液中含有防腐劑苯扎氯銨。《中國藥典》2010年版規定應測定藥物制劑中抑菌劑的含量[1]和抑菌劑的抑菌效力[1]附錄215-216，但目前《中國藥典》2010年版收載的苯扎氯銨含量測定方法為萃取后氧化還原反應[1]430-431，方法繁瑣，不利于微量苯扎氯銨的測定。本文參考文獻建立反相液相色譜法測定鹽酸氨溴素吸入溶液中苯扎氯銨的含量[2-7]。該方法快速、準確、重復性好，可用于產品質量控制。

1 儀器與試藥

Agilent L1260液相色譜儀，VWD檢測器、自動進樣器（安捷倫科技有限公司，美國）。Sartorius CPA225D電子天平（賽多利斯科學儀器有限公司，德國）。

苯扎氯銨對照品（中國藥品生物制品檢定研究所，批號：100549-201102，每1 ml含苯扎氯銨11.10 mg）。

鹽酸氨溴素吸入溶液（上海禾豐制藥有限公司，規格：2 ml：15 mg，批號：140604、140605、140606）。乙腈、庚烷磺酸鈉為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Agilent Zorbax SB- C18色譜柱(4.6 mm × 250 mm，5 mm)； 以0.02 mol/L庚烷磺酸鈉（含0.1%三乙胺，用磷酸調節pH至3.0±0.1）-乙腈（35∶65）為流動相；檢測波長208 nm；進樣體積20 ml。

2.2 溶液配制

對照品溶液：精密量取苯扎氯銨對照品溶液1 ml，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ml，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，制成5.55 mg/ml的溶液。

供試品溶液：精密量取鹽酸氨溴索吸入溶液1 ml，置50 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，制成含5 mg/ ml的溶液。

2.3 專屬性試驗

按處方量，不加苯扎氯銨，配制空白輔料溶液，按2.2項下方法配制溶液，結果顯示，鹽酸氨溴索吸入溶液中鹽酸氨溴索及其他輔料對本方法中苯扎氯銨的測定均無干擾，該方法具有較強專屬性（圖1）。

2.4 線性范圍

精密量取苯扎氯銨對照品溶液1 ml，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻；分別精密量取3.0、4.0、5.0、6.0和7.0 ml，置100 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標，苯扎氯銨兩峰面積之和為縱坐標，進行線性回歸，計算得回歸方程為：Y=16.70X–12.29，r=0.999 3。結果表明，苯扎氯銨在3.32～7.74 mg/ml 濃度范圍內的線性良好。

2.5 重復性試驗

取同一批供試品，分別按2.2配制6份供試品溶液并測定，測得苯扎氯銨平均含量為0.22 mg/ml，RSD為1.9%（n=6）（表1）。表明本方法重復性良好。

圖1 苯扎氯銨色譜圖

表1 重復性試驗結果

2.6 回收率試驗

分別按處方量配制含苯扎氯銨80%、100%、120%

的鹽酸氨溴索吸入溶液，按2.2配制供試品溶液，按2.1項下方法測定，計算回收率，平均回收率為99.2%，RSD=0.21%（n=9）。

2.7 樣品測定

取樣品按2.2項下方法制備供試品溶液，各20 ml注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以兩峰面積之和計算含量。測定三批鹽酸氨溴索吸入溶液中苯扎氯銨的含量分別為0.22、0.23和0.24 mg/ml。

3 討論

有文獻報道采用毛細管電泳法和紫外分光光度法測定苯扎氯銨[8-10]，但這些方法繁瑣；也有文獻采用蒸發光散色檢測器進行含量測定[11]，但該法重復性較差；還有文獻采用氰基柱進行檢查[12]，但該色譜柱為非通用色譜柱。本文方法采用高效液相色譜法，紫外分光光度檢測器，通用C18柱，方法快速、簡便、重復性好、專屬性強。

經紫外掃描，苯扎氯銨水溶液在208 nm有最大吸收波長，故采用該波長進行測定。

苯扎氯銨為同系物混合物[13]，美國藥典收載的苯扎氯銨含有n-C12H25、n-C14H29、n-C16H33三種同系物[14]。而國內目前只有一家企業生產，主要以n-C12H25取代同系物為主，有時也含有較少量n-C14H29取代同系物。中國藥品生物制品檢定研究所提供的苯扎氯銨對照品溶液每1 ml中含苯扎氯銨為11.10 mg，n-C12H25取代同系物為66.27%，n-C14H29取代同系物為33.33%，液相色譜圖中兩個同系物分別出峰，計算含量時需將二者相加計算。

參考文獻

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收稿日期：（2014-12-09）

通訊作者：**蔣宇丹(1978-)，女 ，高級工程師，從事藥物分析研究。Tel：(021)58993670；E-mail：jjjyyyddd@sina.com

作者簡介：*卜宇倩（1979-），女，工程師，從事藥品制劑研究。E-mail：2583804461@qq.com

文章編號：1006-1533(2015)09-0077-03

文獻標識碼：A

中圖分類號：TQ460.72; O657.72