老年進(jìn)展性腦梗死患者外周血IL-6、IL-10、TNF-αmRNA表達(dá)變化及意義

孫志華，賀婕，曾小雁(中國(guó)石油天然氣集團(tuán)公司中心醫(yī)院，河北廊坊065000)

老年進(jìn)展性腦梗死患者外周血IL-6、IL-10、TNF-αmRNA表達(dá)變化及意義

孫志華，賀婕，曾小雁
(中國(guó)石油天然氣集團(tuán)公司中心醫(yī)院，河北廊坊065000)

摘要:目的觀察老年進(jìn)展性腦梗死患者外周血IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表達(dá)變化，并探討其意義。方法老年進(jìn)展性腦梗死患者48例(病例組)，其中輕度神經(jīng)功能缺損13例、中度神經(jīng)功能缺損22例、重度神經(jīng)功能缺損13例，大梗死病灶19例、中梗死病灶21例、小梗死病灶8例。熒光定量PCR檢測(cè)病例組與51例對(duì)照組外周血IL-6、IL-10、TNF-α mRNA。結(jié)果與對(duì)照組相比，病例組外周血IL-6、TNF-α mRNA表達(dá)水平高，IL-10 mRNA表達(dá)水平低( P均＜0.05)。與輕、中度神經(jīng)功能缺損者相比，重度神經(jīng)功能缺損者IL-6 mRNA表達(dá)水平高，IL-10 mRNA表達(dá)水平低( P均＜0.05)。與中、小梗死病灶者相比，大梗死病灶者IL-6 mRNA表達(dá)水平高，IL-10 mRNA表達(dá)水平低( P均＜0.05)。入院時(shí)外周血IL-6 mRNA表達(dá)水平與入院7 d時(shí)的神經(jīng)功能缺損評(píng)分呈正相關(guān)( r =0.431，P =0.020)，IL-10 mRNA表達(dá)水平與入院7 d時(shí)的神經(jīng)功能缺損評(píng)分呈負(fù)相關(guān)( r =－0.314，P =0.025)。結(jié)論老年進(jìn)展性腦梗死患者外周血IL-6、TNF-α mRNA表達(dá)水平升高，IL-10 mRNA表達(dá)水平降低，且IL-6、IL-10 mRNA表達(dá)水平與病情的嚴(yán)重程度有關(guān)。

關(guān)鍵詞:腦血管疾病;進(jìn)展性腦梗死;白細(xì)胞介素;腫瘤壞死因子α

隨著人口的老齡化，腦梗死的發(fā)病率在我國(guó)呈逐漸上升趨勢(shì)，給社會(huì)和家庭造成了沉重的負(fù)擔(dān)，其中進(jìn)展性腦梗死致死率和致殘率高，臨床處理更為棘手，嚴(yán)重影響了老年患者的生命安全和生活質(zhì)量。腦梗死是多因性疾病，隨著對(duì)腦梗死發(fā)病機(jī)制研究的逐漸深入，腦缺血與炎癥反應(yīng)的關(guān)系日益受到關(guān)注，而IL、腫瘤壞死因子、CRP等非特異性炎癥反應(yīng)指標(biāo)則成為研究的重點(diǎn)［1］。本研究觀察了老年進(jìn)展性腦梗死患者外周血IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表達(dá)變化，為臨床防治老年人群進(jìn)展性腦梗死提供理論依據(jù)。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2013年1月～2014年5月就診于中國(guó)石油天然氣集團(tuán)公司中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科的老年進(jìn)展性腦梗死患者48例(病例組)，其中男31例、女17例，年齡61～73歲。所選病例為年齡大于60歲的發(fā)病24 h內(nèi)入院的急性腦梗死患者，符合第四屆全國(guó)腦血管病會(huì)議修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)，均經(jīng)頭顱MRI證實(shí)，所有患者均為臨床首次發(fā)作。除外嚴(yán)重的心、肺、肝、腎功能不全，血液病，自身免疫疾病，重度感染等，并且發(fā)病前未應(yīng)用激素、免疫抑制劑等藥物。參照全國(guó)腦血管病會(huì)議通過(guò)的腦卒中神經(jīng)功能缺損程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)( 1995年制定)，所有入選病例均于入院時(shí)、入院第3天以及第7天進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，發(fā)病7 d內(nèi)神經(jīng)功能缺損癥狀進(jìn)行性加重，

神經(jīng)功能缺損評(píng)分較入院時(shí)增加3分以上，除外腦梗死后出血、發(fā)生其他新梗死灶或因嚴(yán)重的內(nèi)科合并癥導(dǎo)致的病情加重。根據(jù)入院第7天的神經(jīng)功能缺損評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)定輕度功能缺損( 6～16分) 13例、中度功能缺損( 17～30分) 22例、重度功能缺損( 31～45分) 13例。病例組于入院第7天復(fù)查頭MRI檢查，依據(jù)Pullicino公式計(jì)算腦梗死患者梗死體積，其中大梗死病灶(病灶＞10 cm3) 19例、中梗死病灶(病灶5～10 cm3) 21例、小梗死病灶(病灶＜5 cm3) 8例。收集同時(shí)期來(lái)我院體檢的患有高血壓、糖尿病、高脂血癥、高黏血癥等基礎(chǔ)疾病者51例作為對(duì)照組，其中男32例、女19例，年齡62～79歲。兩組年齡、性別、伴隨疾病等情況比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。

1.2外周血IL-6、IL-10、TNF-α mRNA檢測(cè)方法病例組入院當(dāng)日、對(duì)照組體檢當(dāng)天空腹抽取靜脈血5 mL。靜脈血采集后立即進(jìn)行裂解、純化、沉淀、洗滌等過(guò)程，提取總RNA。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的反應(yīng)總體積10 μL，總RNA模板250～300 ng，PCR儀上42℃反應(yīng)30 min，然后99℃加熱5 min，冰浴保存。熒光定量PCR反應(yīng)總體積25 μL，反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性4 min; 94℃變性15 s，72℃延伸15 s，40個(gè)循環(huán)，每一次循環(huán)后72℃采集熒光強(qiáng)度數(shù)據(jù)。65～94℃，每0.5℃讀取1次制備溶解曲線。取PCR反應(yīng)產(chǎn)物用瓊脂凝膠100 MV電泳30 min，用UVI凝膠成像系統(tǒng)照相，用凝膠圖像分析軟件(英國(guó)Phoretix)測(cè)定電泳條帶的光密度值(即OD值)，用目的基因光密度的數(shù)值與內(nèi)參β-actin的比值即為mRNA表達(dá)水平。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以珋x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法;相關(guān)性分析采用Spearman法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

兩組外周血IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表達(dá)水平比較見(jiàn)表1。不同神經(jīng)功能缺損程度患者外周血IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表達(dá)水平比較見(jiàn)表2。不同梗死體積患者外周血IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表達(dá)水平比較見(jiàn)表3。入院時(shí)外周血IL-6 mRNA表達(dá)水平與入院7 d時(shí)的神經(jīng)功能缺損評(píng)分呈正相關(guān)( r =0.431，P = 0.020)，IL-10 mRNA表達(dá)水平與入院7 d時(shí)的神經(jīng)功能缺損評(píng)分呈負(fù)相關(guān)( r = －0.314，P = 0.025)，TNF-α mRNA表達(dá)水平與入院7 d時(shí)的神經(jīng)功能缺損評(píng)分無(wú)相關(guān)性( r =0.18，P ＞0.05)。

表1　兩組外周血IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表達(dá)水平比較(±s)

表1　兩組外周血IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表達(dá)水平比較(±s)

注:與對(duì)照組比較，*P＜0.05。

組別　IL-6 mRNA　 IL-10 mRNA　 TNF-αmRNA病例組　1.18±0.49*　0.38±0.39*　1.52±1.09*對(duì)照組0.86±0.78　 0.69±0.41　 1.12±0.69

表2　不同神經(jīng)功能缺損程度患者外周血IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表達(dá)水平比較(±s)

表2　不同神經(jīng)功能缺損程度患者外周血IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表達(dá)水平比較(±s)

注:與中度神經(jīng)功能缺損、輕度神經(jīng)功能缺損比較，*P＜0.05。

神經(jīng)功能缺損程度　IL-6 mRNA　 IL-10 mRNA TNF-αmRNA重度神經(jīng)功能缺損　1.32±0.43*0.51±0.39*1.52±1.09中度神經(jīng)功能缺損　0.86±0.78　 0.69±0.41　 1.42±0.89輕度神經(jīng)功能缺損0.76±0.42　 0.68±0.51　 1.43±0.67

表3　不同梗死體積患者外周血IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表達(dá)水平比較(±s)

表3　不同梗死體積患者外周血IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表達(dá)水平比較(±s)

注:與中梗死病灶、小梗死病灶比較，*P＜0.05。

梗死體積　IL-6 mRNA　 IL-10 mRNA　 TNF-αmRNA大梗死病灶　1.18±0.49*　0.37±0.39*1.52±1.09中梗死病灶　0.81±0.78　 0.69±0.41　 1.42±0.89小梗死病灶0.69±0.21　 0.72±0.32　 1.44±0.65

3　討論

進(jìn)展性腦梗死預(yù)后較差，是老年患者的重要死亡原因。什么原因引起腦梗死進(jìn)展加重仍是迫切需要解決的難題。腦缺血損傷后，腦組織中常駐的免疫細(xì)胞及外周血中免疫細(xì)胞被激活，并刺激外周免疫器官，從而有大量炎癥因子釋放入血［2～4］，其外周血、骨髓、淋巴器官等也發(fā)生了相應(yīng)的免疫炎癥改變［5］。炎癥細(xì)胞因子作為免疫活性分子，在腦梗死的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮了重要的作用［2，3］。IL-1β、IL-6、TNF-α、CRP等成為研究最多的與腦梗死相關(guān)的強(qiáng)效炎癥因子，而IL-10作為強(qiáng)力抗炎因子，其在抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊炎癥反應(yīng)以及在預(yù)防缺血性卒中發(fā)生中的作用逐漸得到關(guān)注，故本研究選取了IL-6、TNF-α、IL-10這3個(gè)炎癥因子作為研究對(duì)象。

動(dòng)脈粥樣硬化是腦梗死的主要病因。動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制至今仍未最終闡明，任何一種學(xué)說(shuō)均不能全面合理解釋動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展。Ross［6］首次提出炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用。目前很多學(xué)者認(rèn)為動(dòng)脈粥樣硬化的形成是血管炎癥后損傷的一種表現(xiàn)，由血管內(nèi)皮功能障礙和炎癥反應(yīng)相互作用形成。IL-6在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛存在，腦組織急性缺血壞死能激活大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并產(chǎn)生大量的IL-6。IL-6是一種重要的炎癥介質(zhì)，可刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放白細(xì)胞趨化因子，引起血管內(nèi)皮損傷，增加血腦屏障的通透性，具有多種生物學(xué)效應(yīng)，其主要介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)及炎癥過(guò)程。江秀龍［7］對(duì)60例腦梗死患者研

究后發(fā)現(xiàn)，腦梗死組中IL-6水平明顯高于健康對(duì)照組，并提出IL-6與易損斑塊形成高度相關(guān)。TNF-α是一種重要的前炎癥細(xì)胞因子，由血管內(nèi)皮細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等細(xì)胞分泌，不僅調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答功能，還能介導(dǎo)產(chǎn)生許多炎癥介質(zhì)，并且在抗感染、內(nèi)皮損傷反應(yīng)中也發(fā)揮了重要的作用。當(dāng)腦組織急性缺血時(shí)，TNF-α在腦內(nèi)表達(dá)增多，其在腦梗死發(fā)病以及隨后的病理過(guò)程中可通過(guò)多種途徑發(fā)揮重要的神經(jīng)毒性作用。TNF-α是缺血性腦卒中重要的炎癥介質(zhì)，TNF-α水平明顯降低可減輕炎癥反應(yīng)，并改善神經(jīng)功能缺損程度［8］。TNF-α含量增高也是急性腦梗死發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［9］。IL-6與TNF-α互相作用、互相協(xié)調(diào)、互相滲透。IL-10是一種多效性的細(xì)胞因子，能抑制許多炎癥因子的釋放，阻止動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生并發(fā)揮保護(hù)作用。IL-10在腦缺血過(guò)程中，具有神經(jīng)保護(hù)作用，可以通過(guò)多種機(jī)制抑制缺血后的炎癥反應(yīng)［10］。目前對(duì)于腦缺血后外周血中IL-10的動(dòng)態(tài)變化尚無(wú)統(tǒng)一認(rèn)識(shí)。Nayak等［11］發(fā)現(xiàn)，血清中IL-10水平在腦梗死24 h內(nèi)下降。既往的絕大多數(shù)文獻(xiàn)鮮有針對(duì)特定老年人群的研究，本研究發(fā)現(xiàn)，老年進(jìn)展性腦梗死患者外周血IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表達(dá)水平較正常升高，提示炎癥反應(yīng)在腦梗死進(jìn)展加重的過(guò)程中起著重要的作用，是腦梗死進(jìn)展加重的危險(xiǎn)因素。

有研究［12］顯示，腦梗死患者IL-6的變化情況與梗死范圍相關(guān)，并在一定程度上反映出神經(jīng)功能缺損程度及恢復(fù)情況。亦有研究［13，14］表明，腦梗死后TNF-α水平與病情的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。在一項(xiàng)中風(fēng)患者與血清炎癥標(biāo)志物關(guān)系的隊(duì)列研究［15］中，不同炎癥因子均上調(diào)并且表現(xiàn)出與功能狀態(tài)相關(guān)的變化規(guī)律，但僅發(fā)現(xiàn)IL-6與腦卒中嚴(yán)重程度和預(yù)后獨(dú)立相關(guān)。同組資料顯示，不同梗死面積、不同神經(jīng)功能缺損程度的老年進(jìn)展性腦梗死患者，在發(fā)病初期，炎癥因子的基因表達(dá)水平越異常，則疾病的進(jìn)展惡化越嚴(yán)重。且相關(guān)性分析顯示，IL-6基因表達(dá)的升高以及IL-10基因表達(dá)的下降與腦組織大面積梗死、重度神經(jīng)功能缺損等有密切的關(guān)系。推測(cè)其可能的原因及機(jī)理為腦缺血損傷后外周血中的免疫細(xì)胞被大量激活，刺激免疫組織器官產(chǎn)生并釋放大量的炎癥因子入血，炎癥因子的濃度越高，其在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的炎癥反應(yīng)越強(qiáng)烈，血管壁的損傷越重，血管閉塞的程度越重，造成的神經(jīng)功能缺損則愈加突出。

可見(jiàn)，老年進(jìn)展性腦梗死患者外周血IL-6、TNF-α mRNA表達(dá)水平升高，IL-10 mRNA表達(dá)水平降低，且IL-6、IL-10 mRNA表達(dá)水平與病情的嚴(yán)重程度有關(guān)。

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·綜述·

收稿日期:( 2015-05-19)

文章編號(hào):1002-266X( 2015) 31-0089-03

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

中圖分類(lèi)號(hào):R743.3

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.31.037