抑郁對急性心肌梗死大鼠心肌細胞凋亡的影響

賀振燕++胡雪烈++徐亞熙++吳光焰++朱振葉

[摘要] 目的探討抑郁對急性心肌梗死后大鼠心肌細胞凋亡的影響。方法30只SD大鼠隨機分為三組，假手術(shù)組，心肌梗死對照組，心肌梗死抑郁組，每組10只。制備相應(yīng)模型并干預(yù)后，用TUNEL法檢測心肌細胞凋亡，用免疫組織化學(xué)法檢測心肌細胞Bc1-2、Bax蛋白的表達。結(jié)果心肌梗死抑郁組和心肌梗死對照組大鼠心肌細胞凋亡率以及心肌細胞Bcl-2、Bax蛋白表達均高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），心肌梗死抑郁組大鼠心肌細胞凋亡指數(shù)以及心肌細胞Bax蛋白表達高于心肌梗死對照組，而心肌細胞Bcl-2蛋白表達低于心肌梗死對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P

[關(guān)鍵詞] 抑郁；心肌梗死；大鼠；凋亡；B細胞淋巴瘤/白血病基因-2；BCl-2相關(guān)基因X

中圖分類號：R542.2

文獻標識碼：A

文章編號：1009-816X（2015）06-0457-02

急性心肌梗死嚴重威脅人類健康，嚴重影響患者生活質(zhì)量，心功能不全是心肌梗死發(fā)展的主要結(jié)局，其間發(fā)生一系列的變化：如心肌壞死，心肌重塑等。近年來大量的研究發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死后細胞凋亡在這個過程中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。近年研究還表明，抑郁已成為急性心肌梗死的獨立危險因素，急性心肌梗死后，尤其是冠狀動脈支架植入者，術(shù)后出現(xiàn)抑郁較常見，再住院率高，備受關(guān)注。本文旨在探討抑郁對急性心肌梗死心肌細胞的潛在作用機制，為心肌梗死后心臟康復(fù)方案的介入提供實驗數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料：

1.1.1 實驗動物：健康雄性SD大鼠，共30只，體重250g左右，購于上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司（國家嚙齒類實驗動物種子中心）。

1.1.2 主要試劑：原位末端標記（terminal deoxynu- cleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling，TUNE）細胞凋亡原位檢測試劑盒（武漢博士德公司）；B細胞淋巴瘤/白血病基因-2（B-cell lymphonma/leukemia gene 2.Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)基因X（Bcl-2 Assaci-ated X protein，Bax）抗體、免疫組化試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。

1.2 實驗方法：

1.2.1 大鼠急性心肌梗死模型的制作：1.5%戊巴比妥溶液腹腔注射麻醉大鼠后，行氣管插管連接呼吸機，于左側(cè)第4肋間開胸，暴露心臟并結(jié)扎左冠狀動脈前降支，檢測肢導(dǎo)心電圖ST明顯抬高或Q波出現(xiàn)即可認為心肌梗死動物模型造模成功。

1.2.2 大鼠抑郁模型的制作：根據(jù)文獻，心肌梗死模型造模成功后大鼠孤養(yǎng)，隨機選取以下各種刺激：冰水游泳、禁食、電擊足底、夾尾、鼠籠傾斜、停水、懸吊、40度環(huán)境，制作大鼠抑郁模型。參照文獻，少動并有焦慮及抑郁樣癥狀的大鼠作為抑郁癥大鼠成功制備標準。

1.2.3 分組雄性SD大鼠30只，隨機抽取10只大鼠作為假手術(shù)組，其余20只進行急性心肌梗死造模。假手術(shù)組手術(shù)步驟同急性心肌梗死模型組，但不結(jié)扎冠狀動脈。大鼠心肌梗死模型制作成功1周后，隨機分成兩組，心肌梗死對照組（n=10）：不給予任何刺激，群養(yǎng)每籠5只；心肌梗死抑郁組（n=10）瓢養(yǎng)，按照上述大鼠抑郁模型方案制作。

1.2.4 檢測指標及方法：①心肌細胞凋亡檢測應(yīng)用TUNEL法原位標記凋亡細胞核。嚴格按照試劑盒說明書進行。心肌細胞凋亡率：視野內(nèi)凋亡心肌細胞核數(shù)/視野內(nèi)所有細胞核數(shù)×100%。②Bcl-2和Bax蛋白的檢測采用SP免疫組織化學(xué)染色法，參照免疫組化試劑盒說明書，嚴格按照SP試劑盒操作步驟行免疫組織化學(xué)染色，每張切片隨機取5個高倍視野（×400），計數(shù)每個高倍視野內(nèi)的陽性細胞數(shù)和細胞總數(shù)，求其平均值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理：使用SPSS18.0版統(tǒng)計軟件，計量資料以（x±s）表示，多組間比較用方差分析和q檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

抑郁對心肌梗死大鼠心肌細胞凋亡指數(shù)及Bcl-2、Bax表達的影響：心肌梗死對照組與心肌梗死抑郁組大鼠心肌細胞凋亡指數(shù)均高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），心肌梗死抑郁組大鼠心肌細胞凋亡指數(shù)高于心肌梗死對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。心肌梗死抑郁組與心肌梗死對照組大鼠心肌細胞Bcl-2和Bax蛋白表達均高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），心肌梗死抑郁組大鼠心肌細胞Bax蛋白表達高于心肌梗死對照組，而Bcl-2蛋白表達低于心肌梗死對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），見表1。

3 討論

急性心肌梗死后心肌細胞壞死，致心肌細胞數(shù)量急劇減少，并發(fā)生形態(tài)學(xué)改變，加致血流動力學(xué)障礙，最終導(dǎo)致心功能受損。心肌梗死后患者心理壓力大，生活質(zhì)量下降，但其心理狀況很少被重視，導(dǎo)致抑郁發(fā)病率增高。Alcantara等研究，抑郁可增加急性心肌梗死患者的死亡率。心肌梗死后抑郁生活狀態(tài)，導(dǎo)致心功能進一步下降，給社會和家庭造成沉重的負擔。急性心肌梗死后多種因素誘導(dǎo)心肌細胞凋亡，從而加速心室重構(gòu)，加快心功能惡化進程。目前研究認為細胞凋亡基因Bcl-2，Bax起重要的決定作用。Bcl-2抑制細胞凋亡，Bax基因高度表達會加速細胞凋亡。Bcl-2及Bax比值增大說明細胞凋亡被抑制程度高，反之則細胞凋亡程度高。本研究顯示：心肌梗死抑郁組大鼠心肌細胞Bcl-2蛋白表達低于心肌梗死對照組，而Bax蛋白表達高于心肌梗死對照組。從而得出抑郁可增加急性心肌梗死大鼠心肌細胞凋亡，其作用可能與促進促凋亡基因Bax表達、抑制抗凋亡基因Bcl-2的表達有關(guān)，由此為早期心臟心理康復(fù)介入提供實驗數(shù)據(jù)，也可作為進一步研究具體機制的基礎(chǔ)。