棉花中脫葉劑哈威達檢測方法研究

孫近　晏新程　李丹　曾蓉

摘要：以乙腈為提取液，通過超聲波輔助萃取，離心凈化，C18柱為分析柱，乙腈與水溶液為流動相，在205nm的檢測波長下，用高效液相色譜法定量測定棉花中哈威達殘留量的方法。檢測結果表明，該方法靈敏度高、準確性好，檢出限為0.033mg/kg，回收率在98.2%～108.3%，相對標準偏差（RSD）1.68%～4.08%。本研究不僅建立了簡便、快速、準確的棉花中哈威達殘留量的檢測方法，同時對該方法的準確度和精密度等進行了較為全面的評價，為制定國家棉花中哈威達殘留量的檢測方法標準提供了依據，打下了基礎。

關鍵詞：哈威達；殘留；棉花；高效液相色譜

作為紡織品的主要原材料，棉花在紡織品中起著支柱的作用。目前，棉花生產中農藥的使用必不可少。哈威達作為棉花生產中一種有效的脫葉劑，能促進棉葉脫落，提高機械采收效率并降低籽棉含雜率[1]，其與乙烯利一起廣泛應用于各國棉田。

哈威達，英文名dimethipin [2]，別名噻節因，落長靈，是一種植物生長調節劑，是目前各國應用的一種脫葉劑。哈威達通過殺傷或殺死植物的綠色組織，同時刺激傷害乙烯的產生，誘導棉鈴開裂和葉柄離層的形成[1]，從而起到催熟和脫葉作用。其應用于棉花脫葉時間偏晚，因此可能在棉花中殘留。該化合物比較穩定不易分解，哈威達對人畜有一定毒性。目前國內還沒有成熟的棉花中脫葉劑哈威達殘留量的檢測方法，更缺少對檢測方法的準確度和精密度等做全面的評價。課題組在前期系統研究哈威達溶解性、熱穩定性等物理化學性質的基礎上，著重研究了棉花中殘留哈威達的萃取、濃縮、凈化條件，建立了用高效液相色譜法檢測棉花中哈威達殘留量的分析方法，并對方法進行了較為全面的評估。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與儀器

1.1.1 材料和試劑

哈威達標準品 （純度>99%，Sigma）；高純水；乙腈：分析純和色譜純（Sigma）。色譜純乙腈通過0.45μm孔徑的油相膜過濾；高純水，通過0.45μm孔徑的水相膜過濾。

1.1.2 儀器

液相色譜儀：Agilent1260Qua型HPLC系統。色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18，5μm，4.6mm×150mm。電子天平（精確到0.1mg）、超聲波振蕩儀、恒溫水浴振蕩器、離心機、旋轉蒸發儀等。

1.2 分析方法

1.2.1 樣品前處理

稱取棉花樣品（3±0.01）g于反應器中，加入150mL已預熱到（45±2）℃的乙腈溶液，將反應器密閉，用力振搖，使所有試樣浸于液體中，置于已恒溫至（45±2）℃的水浴中保溫30 min后，使所有試樣充分潤濕。然后，將反應器置于（45±2）℃超聲波浴中處理30 min，擠干，抽濾，收集濾液于圓底燒瓶中。濾渣收集到反應器中，再加入100mL乙腈溶液，將反應器置于（45±2）℃超聲波浴中處理10 min，擠干，抽濾，收集濾液于上述圓底燒瓶中。

用3×10 mL乙腈溶液分3次洗滌抽濾裝置中的濾渣，收集濾液于上述圓底燒瓶中。將上述收集的盛有乙腈提取液的圓底燒瓶置于真空旋轉蒸發器上，于45℃左右的溫度低真空下，濃縮至近干。準確移取1.0mL乙腈（色譜純）加入濃縮至近干的圓底燒瓶中，混勻，靜置[3]。

如定容溶液渾濁，采用離心處理，取其上清液上機分析。

1.2.2 高效液相色譜分析

Agilent1260Qua型HPLC系統，包含在線脫氣機、四元梯度泵和柱溫箱、DAD檢測器。色譜柱： Agilent Eclipse XDB-C18，5μm，4.6mm×150mm；檢測波長： 205nm，柱溫為30℃，進樣量10μL，用乙腈：水=20：80作為流動相，流速1mL/min，檢測時間8min。采用外標法峰面積定量。

1.3 定量方法和計算公式

定量方式采用外標法。試樣中哈威達殘留量的計算公式如下：

2 結果與分析

2.1 線性關系與檢出限

用乙腈將脫葉劑哈威達標準品（Sigma）配制成儲備液，以流動相乙腈稀釋至所需濃度的系列標準溶液，分別取上述系列標準溶液在1.2.2測定條件下進行測試，測試結果以峰面積Area-哈威達濃度（Amt）作標準曲線。測得標準曲線方程為Area=32.54×Amt+2.36 （γ=0.99954）。

從表1和圖1可以看出，哈威達濃度在0.5?g/mL～20.0?g/mL之間線性關系良好，范圍寬，完全可以滿足試驗要求，即本試驗可以用外標法進行定量。

方法檢出限的測定能反映分析方法的精度，定量檢出限的測定能反映方法定量的低限和準確程度。根據特征色譜峰信噪比S/N≥3為方法檢出限。配制濃度為0.5?g/mL的哈威達標準溶液，以乙腈/水溶液為流動相，進樣量為10μL。在該條件下利用此方法得到的信噪比為152.3。因此可以根據定量方法計算出該方法的檢測限低于0.033mg/kg。

2.2 方法精密度與穩定性

采用上述儀器設備條件和參數，利用濃度為10.0?g/mL的哈威達標準溶液與空白交叉進樣，重復測量10次后計算相對標準偏差（RSD），試驗結果如表2所示。結果表明，該方法的系統精密度變異系數為0.44，系統精密度比較高。同時，利用濃度為10.0?g/mL的哈威達標準溶液分別在4℃下放置0、1、2、4天進行測試，測試結果見表3，穩定性試驗表明該方法具備較好的穩定性。

2.3 樣品測定與回收率試驗

2.3.1 回收率試驗

根據建立的檢測方法進行回收率測試，在不含哈威達的棉花樣品中分別加入濃度為1.0?g/mL、2.0?g/mL、10.0?g/mL的哈威達標準品1mL，測試結果見表4。其回收率在98.2%～108.3%之間，變異系數在1.68%～4.08%之間，說明該方法測定具有較高的回收率和穩定性。

2.3.2 國內外棉花樣品測定

采用上述分析方法中的樣品前處理和儀器分析條件，對不同國家和地區的棉花8個樣品進行分析，均檢測出含有哈威達，可能是課題組選取的棉花樣品是采用手摘或者使用了其他脫葉劑。

3 結論

在前期對多種萃取劑的選擇和結合哈威達物質的熱穩定性分析研究基礎上，本方法研究采用乙腈作為提取劑，在超聲波條件下對棉花中哈威達殘留量進行提取，通過離心凈化，利用高效液相色譜-二極管陣列檢測器（HPLC/DAD）對棉花中哈威達殘留量進行檢測。檢測結果表明色譜峰分離完全，精密度高，檢測限低，線性范圍寬，回收率符合殘留量檢測的要求，完全適用于測定棉花中哈威達殘留量的要求。本研究不僅建立了簡便、快速、準確的棉花中哈威達殘留量的檢測方法，同時對該方法的準確度和精密度等進行了較為全面的評價，為下一步制定國家棉花中噻苯隆殘留量的檢測方法標準提供了依據，打下了基礎。

參考文獻：

[1] 田曉莉，段留生，李召虎. 棉花化學催熟與脫葉的生理基礎. 植物生理學通訊. 2004， 40（16）：758-762.

[2] Thomas L. Potter， Luz Marti， Sally Belflower， and Clint C. Truman. Multiresidue Analysis of Cotton Defoliant， Herbicide， and Insecticide Residues in Water by Solid-Phase Extraction and GC-NPD， GC-MS， and HPLC-Diode Array Detection. J. Agric. Food Chem. 2000， （48）： 4103-4108.

[3] 曾蓉，孫近，趙瑞方，等.棉花中脫葉劑噻苯隆檢測方法研究[J].標準科學，2010，（5）：22-25.

（作者單位：四川省纖維檢驗局）endprint