十堰市Rh弱D和/或部分D變異型血型血清學檢測結果分析

十堰市Rh弱D和/或部分D變異型血型血清學檢測結果分析

舒群峰

(十堰市中心血站，湖北 十堰 442000)

摘要：目的了解十堰市無償獻血者中Rh弱D和/或部分D變異型所占比例。 方法在122 084名無償獻血者中采用微板法初篩出Rh(D)陰性獻血者442名，采用間接抗人球蛋白試驗(IAT)試管法確認Rh(D)陰性、弱D和/或部分D變異型，Rh因子血清學表型鑒定采用鹽水試管法。結果442名初篩Rh(D)陰性獻血者中采用IAT確認Rh(D)陰性427例，占總人數的0.35%；檢出Rh弱D和/或部分D 15例，檢出率分別為3.394%(15/442)和0.013%(15/122 084)，弱D和/或部分D僅檢出4種表型，分布比例分別為ccEe 40%、Ccee 40%、CcEe 13.33%、CCee 6.67%，不規則抗體檢測均為陰性。結論從獻血者角度講，D變異型個體所獻血液應該作為Rh陽性血液供應臨床；從受血者角度講，則應該輸Rh陰性血液。而一個個體可能在不同時間先后成為獻血者或受血者，因此正確鑒定弱D和部分D在內的D變異型并制定相應的輸血策略，對于輸血安全和合理用血有著重要的意義。

關鍵詞：弱D；部分D；D變異型；間接抗人球蛋白試驗

中圖分類號：

文章編號：1673-8640(2015)10-1004-04R446.11

文獻標志碼：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.10.010

基金項目：2013-2014湖北省衛生廳采供血管理科研項目(JX6C-47)

作者簡介：舒群峰，女，1973年生，副主任技師，主要從事血液免疫學檢驗工作。

收稿日期：(2015-02-15)

常規血清學鹽水法能檢出大部分D抗原陽性個體，但有一部分個體鹽水法檢測D抗原為陰性，只有采用間接抗人球蛋白試驗(indirect antiglobulin test，IAT)才可檢出陽性，這些個體為弱D表型，這種表型在中國人中約1/10 000，包括弱D型和部分D型[1]。為了解十堰市RhD陰性獻血者中Rh弱D和/或部分D變異型的分布，本研究對2010年至今的122 084名獻血者進行了分析。

材料和方法

一、研究對象

十堰市2010年至今參與無償獻血人員合計122 084名，初篩為Rh陰性的442名獻血者血液標本(以上均未計入重復獻血人次)。

二、試劑和儀器

RhD血型初篩和確認試劑：單克隆IgM-D(Biotest公司，批號：1905010等clone:BS226)；單克隆IgG-D1(上海血液生物醫藥有限公司，批號：20100210等clone:MS-26)，單克隆IgM/IgG混合抗-D2(法國DIAGAST公司，批號：410000等 clone:P3×61+P3×21223B10+P3×290+P3×35)，單克隆IgM/IgG混合抗-D3(英國BioSCot公司，批號：BMC0702C等clone:TH-28/MS-26)，單克隆IgM/IgG混合抗-D4(加拿大Dominion公司，批號：517031等 clone:D175-2/D415-1E4細胞系)，人源IgG-D5(成都輸血研究所，批號：20121104等，效價32)，人源IgG-D6(上海血液生物醫藥有限公司，批號：20090602等，效價256)，人源IgG-D7(自制，效價1024)；單克隆IgM-C、-c、-E、-e、抗體篩選細胞、多特異性抗人球蛋白試劑(20121207等)均由上海血液生物醫藥有限責任公司提供；STAR 2000全自動加樣儀(瑞士Hamilton公司)；16 μm階梯P3微孔板(日本Olympus公司)；AK數字血型儀及判讀軟件(深圳愛康公司)；KA-2200離心機(日本Kubota公司)；37 ℃恒溫水浴箱(上海博迅公司)。

三、方法

1.RhD陰性初篩方法采用梯形板鹽水法，STAR 2000全自動加樣儀分配獻血者預稀釋紅細胞和IgM-D試劑血清至16 μm階梯P3微孔板對應孔中，振蕩混勻，靜置60 min，用AK數字血型儀分析圖像并判讀Rh血型結果。

2.RhD陰性及弱D和/或部分D確認至少使用4種不同廠家批號的人源、單克隆IgG抗-D、IgM/IgG混合抗-D,對初篩為陰性標本進行確認(IAT法)，確認實驗同時加做試劑的陰、陽對照以證明確認實驗的有效性[2]。

3.血清學表型鑒定分別用單克隆IgM抗-C、抗-c 、抗-E 和抗-e 試劑對RhD陰性及弱D和/或部分D標本進行Rh因子血清學分型。

4.不規則抗體篩選使用試劑篩選細胞和新鮮自制3～5人份混合O型Rh陽性紅細胞對初篩為Rh陰性標本進行不規則抗體篩選。除初篩試驗之外，所有試驗均在潔凈玻璃試管中反應。

結果

122 084名無償獻血者中初篩RhD陰性獻血者442名，占總人數的0.362%；經4種不同性質抗D確認RhD陰性427例，占總獻血人數的0.348%，與全國漢族人群中RhD陰性 0.2%～0.5%相吻合[3]。427名IAT法Rh(D)陰性共檢出8種表型，分別為ccee(57.14%)、Ccee(30.21%)、CCee(6.09%)、ccEe (3.98%)、CcEe(1.64%)、ccEE (0.47%)、CCEe(0.23%)、CcEE (0.23%)，未檢出CCEE表型，其分布比例與文獻[4-5]報道基本一致，均以表型ccee最多，Ccee次之。采用IAT法檢出血清學弱D和/或部分D 15例，檢出率分別為3.394%(15/442)和0.013%(15/122 084)；弱D和/或部分D僅檢出4種表型，分別為ccEe 40%、Ccee 40%、CcEe 13.33%、CCee 6.67%，在各自相應初篩Rh(D)陰性表型中所占比例依次為ccEe 26.09%、CcEe 22.22%、Ccee 4.44%、CCee 3.70%。8種表型分布結果見表1。

表1　RhD陰性及變異型表型分布

15例弱D和/或部分D中女性9名(60%)、男性6名(40%)，均未檢出不規則抗體。15名血清學弱D和/或部分D獻血者與不同抗-D血清鹽水立即離心及IAT法反應結果見表2。

表2　15例血清學弱D和/或部分D獻血者與不同抗-D血清鹽水立即離心及IAT反應結果

續表2

討論

十堰市血清學弱D和/或部分D檢出率分別為3.394%(15/442)和0.013%(15/122 084)，檢出率與吳筱瑩等[1]報道基本一致，低于涂同濤等[6]報道的檢出率，這可能與本站采用的Rh血型初篩方法有關，本站獻血者ABO、Rh血型初篩方法為微板鹽水法，微型板形狀由U型、V型過渡至目前UV結合型3種不同板底，由全自動加樣儀分配試劑和紅細胞，離心、沉降，最后由血型儀判讀結果。表中血員碼為00130815的獻血者因懷孕在醫院產檢時紙板法檢測為RhD陰性，醫院建議該孕婦前往血站做相關血型血清學檢查，自述2013年曾參與無償獻血，調出血型檢測原始資料，當時血型儀判讀為RhD陽性，遂抽血IAT法檢測為弱D。后經家系調查，其弟為RhD陰性，其父與該孕婦一致為弱D，其母為正常RhD陽性。另1名血員碼00064807獻血者第1、2次獻血時，同樣是血型儀判讀為RhD陽性，此次獻血血型檢測結果報告時，血型儀判讀為RhD陰性，IAT確認為弱D。有報道梯度板法對抗原性較弱的亞型、不規則抗體檢出能力強[7]。但是對凝集強度的分級觀察顯然不是很準確，致使凝集強度低于3～4+的弱凝集被忽略，勢必造成ABO亞型、弱D的誤判，例如00130815的獻血者被判讀為RhD陽性。同時梯度板法也存在一定的漏檢情況，如本研究00064807獻血者被判讀為RhD陰性。ABO血型可以通過正反定型來互認。可是D抗原的檢測卻無法互認，當鹽水法檢測為RhD陰性或凝集弱時則需要使用不同性質、不同生產廠家抗-D試劑IAT法確認，同時做好試劑的陰、陽對照。

表1中15例弱D和/或部分D僅檢出ccEe、Ccee、CcEe和CCee 4種表型，RhD陰性表型最多的ccee中未檢出1例弱D和/或部分D，與劉巧等[8]報道一致。而僅占初篩Rh(D)陰性獻血者5.2%的ccEe表型中26.09%為弱D和/或部分D，提示十堰地區此4種表型的初篩Rh(D)陰性獻血者在IAT確認時應仔細觀察凝集強度，防止漏檢。

中國人群的弱D主要為弱D15型，因此當弱D15型個體輸注D陽性血液時可能產生抗-D[9]。部分D由于缺乏相應抗原表位當輸注正常D陽性血液時可產生針對相應表位的抗-D，因此對弱D和/或部分D表現型進行分子生物學分類，可對不同類型表現型制定正確的輸血策略[10]。表2中15例血清學弱D和/或部分D與不同性質抗D、不同反應介質(鹽水和IAT)中凝集強度由“O～4+”不盡相同，要區分弱D型和部分D型, 或鑒定具體哪一種部分D型時, 需要采用 “D抗原表位檢測試劑盒”(一般含有8～10種D抗原不同表位的抗體), 或者采用PCR檢測試劑盒或基因序列分析[11]。15例中哪幾例是弱D，哪幾例是部分D，本站目前還沒有能力檢測，但15例均未檢出不規則抗體。15例中有10例是80年代后出生的獻血者，其中女性有6例，作為獻血者，她們所獻出的血液無需區分弱D或部分D，均應當作Rh(D)陽性血液發往臨床供Rh(D)陽性患者使用；可是，她們也許因為妊娠成為1名受血者，就像表中血員碼00130815的獻血者，妊娠期間貧血，胎兒發育緩慢行剖宮產手術需要備血，直接輸注Rh陰性血液當然是安全的，但是稀有的血源和昂貴的費用也會影響及時的救治。而危及生命的緊急情況，即使是Rh陰性孕婦在沒有產生相應抗體的情況下也可能輸Rh陽性血液。有文獻報道, 在德國經過細致的研究和臨床觀察, 建立了對占白色人種弱 D 型 90 % 的弱 D1、2、3型輸用 RhD 陽性血的輸血規則[12]。從獻血者角度講，D變異型個體所獻血液應該做為Rh陽性血液供應臨床；從受血者角度講，則應該輸Rh陰性血液。而1個個體可能在不同時間先后成為獻血者或受血者，因此正確鑒定弱D和部分D在內的D變異型并制定相應的輸血策略，對于輸血安全和合理用血有著重要的意義。

參考文獻

[1]吳筱瑩,何穎軍,徐紅先,等.RHD1227A型弱D的D抗原表位分析[J].中國現代醫學雜志，2011,21(24):2977-2980.

[2]舒群峰,劉冬,崔萍.無償獻血者檢出RhD抗原變異體1例[J].檢驗醫學與臨床,2012,9(14):1784-1786.

[3]趙桐茂.人類血型遺傳學[M].北京:科學出版社,1987:103-109.

[4]盧海燕,姜利軍.Rh(D)陰性獻血者資料庫的建立及其構成狀況[J].檢驗醫學,2013,28(5):438-441.

[5]陳榮倉,陳筱華,林碧,等.RhD陰性血型抗原分析在臨床輸血安全中的應用研究[J].檢驗醫學,2011,26(2):105-107.

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[11]邵超鵬,莊乃保.血型變異型與臨床輸血[J].中國輸血雜志,2009,22(7):591-594.

[12]FLEGEL WA，WAGNER FF,MüLLER TH,et al. Rh phenotype prediction by DNA typing and its application to practice [J].Transfus Med, 1998,8(4):281-302.

(本文編輯：范基農)

《檢驗醫學》舉辦2015年“檢驗醫學新技術”國家級繼續教育項目的通知

《檢驗醫學》將于2015年度舉辦“檢驗醫學新技術”[Ⅰ類10分，項目編號：2015-11-00-281 (國)，由上海市臨床檢驗中心主辦]國家級繼續教育項目。具體實施方案如下：

1. 學員對象從事醫學檢驗或其他相關專業技術工作的衛生技術人員。

2. 繼續教育內容臨床檢驗與血液學檢驗、免疫學檢驗、微生物學檢驗、生物化學檢驗、分子生物學檢驗、實驗室管理等檢驗醫學領域的新技術、新進展，均出自期刊發表的文章。

3. 學員報名步驟欲參加繼續教育項目者，請將回執復印、填寫后寄回(回執請見本刊第840頁，信封上注明“參加繼續教育”)；也可以登錄期刊網站(http://www.shjyyx.com)，在“編輯部公告”中下載、填寫回執，并將回執用E-mail發至編輯部。編輯部以收到學員報名的回執和教育費用的次序作登記注冊和編號。

4. 考試方法編輯部將試卷寄給注冊過的學員(試卷復印無效)，考試合格者參照國家《繼續教育學分授予方法》授予繼續教育學分證書。

5. 時間安排2015年4月1日至10月30日。

6. 收費標準300元。

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