聯(lián)用超聲快速石臘病理切片制備法和免疫組化染色法診斷腫瘤性疾病的效果分析

包文劼

（江蘇省溧陽市中醫(yī)院 江蘇 溧陽 213300）

醫(yī)院的病理科（Pathology department）承擔(dān)著對患者的病情進(jìn)行病理診斷的工作，主要通過對其進(jìn)行組織活檢、穿刺細(xì)胞學(xué)檢查等手段為其提供明確的病理診斷結(jié)果[1]。過去，臨床上常用常規(guī)的石蠟切片制備法及染色法對患者的腫瘤進(jìn)行診斷，但診斷的準(zhǔn)確率較低。超聲快速石臘病理切片制備法操作起來簡便快捷、切片質(zhì)量好，組織染色清晰，是目前臨床上診斷腫瘤常用的制片方法。免疫組織化學(xué)（Immunohistochemical staining，IHC）染色法是利用免疫學(xué)原理中抗原和抗體間專一性的結(jié)合反應(yīng)，檢測患者細(xì)胞或組織中是否有目標(biāo)抗原的存在。此方法不僅可以測知抗原的表現(xiàn)量也可以觀察抗原所表現(xiàn)的位置[2]。此方法因具有專一性、靈敏度高、簡便快速和成本低廉等優(yōu)勢，近年來被廣泛地應(yīng)用于臨床。為了探討聯(lián)用超聲快速石臘病理切片制備法和免疫組織化學(xué)染色法診斷腫瘤性疾病的臨床效果，我們對近年來我院病理科收取的100例患者手術(shù)切除標(biāo)本的臨床資料進(jìn)行回顧性研究。現(xiàn)將研究結(jié)果報告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究的對象為2013年5月～2015年12月期間我院病理科收集的100例患者的手術(shù)切除標(biāo)本及其檢測資料。這些患者的病情均經(jīng)綜合檢查和手術(shù)探查后被確診為腫瘤性疾病。本次研究所選患者的納入標(biāo)準(zhǔn)是：①無血液系統(tǒng)疾病或凝血功能障礙的患者。②無肝腎功能衰竭的患者。本次研究所選患者的排除標(biāo)準(zhǔn)是：①存在精神障礙的患者。②處于妊娠期和哺乳期的患者。在這100例患者中，有男性患者58例、女性患者42例。他們的年齡在28歲～65歲之間，平均年齡為（42.5±2.5）歲。

1.2 診斷方法

我們對每例病理標(biāo)本均取材2塊，取材的病理組織大小為1cm×1cm×0.2cm。我們對其中1塊標(biāo)本聯(lián)用常規(guī)石蠟切片制備法和蘇木精——伊紅染色法進(jìn)行檢測，對另一塊標(biāo)本聯(lián)用超聲快速石臘病理切片制備法和免疫組織化學(xué)染色法進(jìn)行檢測。

1.2.1 聯(lián)用常規(guī)石蠟切片制備法和蘇木精——伊紅染色法對組織標(biāo)本進(jìn)行檢測的方法是：①進(jìn)行常規(guī)石蠟切片制備。②將制備的切片浸入到二甲苯中，維持10 min。③將切片分別置入濃度為100%的酒精、95%的酒精、90%的酒精和80%的酒精中各浸泡1 min，然后使用純凈水沖洗切片1 min。④將切片浸入蘇木素染液浸染15 min，然后使用純凈水沖洗1 min。⑤使用濃度為1%的鹽酸酒精將切片分化30 s，然后用流水沖洗15 min。⑥用濃度為1%的伊紅酒精侵染切片5 min。⑦用濃度為90%或95%的酒精分化切片30 s。⑧將切片分別置入濃度為100%的酒精、碳酸二甲苯、二甲苯中各浸泡1 min，然后用中性樹膠封固。⑨采用德國美天旎生物技術(shù)公司生產(chǎn)的gentleMACS全自動組織處理器進(jìn)行處理。

1.2.2 聯(lián)用超聲快速石臘病理切片制備法和免疫組織化學(xué)染色法對組織標(biāo)本進(jìn)行檢測的方法是：進(jìn)行超聲快速石臘病理切片制備所使用的儀器是上海比朗儀器制造有限公司生產(chǎn)的BILON92-IID超聲處理儀。超聲處理儀的水槽溫度以65℃～70℃為宜。進(jìn)行超聲快速石臘病理切片制備的方法是：①進(jìn)行固定處理。將病理組織浸入到25 ml濃度為4%的中性緩沖甲醛液中，進(jìn)行固定處理2 min，待組織呈現(xiàn)灰白色時繼續(xù)將其固定2 min。②進(jìn)行脫水兼透明處理。用吸水紙除去病理組織表面的殘夜，然后將其投入到25 ml的丙酮中5 min，反復(fù)處理2次。③進(jìn)行浸蠟處理。用吸水紙除去病理組織表面的殘夜，然后將其浸入到蠟液之中，至病理組織完全下沉并不再向外冒泡為止。④進(jìn)行包埋處理。采用預(yù)制的蠟塊將病理組織包埋后進(jìn)行急速冷卻，并快速對其進(jìn)行切片、烤片、染色、封固[3]。對組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色的方法是：①在高溫高壓的環(huán)境下對切片進(jìn)行抗原修復(fù)，等待2 min，待其自然冷卻后用純凈水進(jìn)行沖洗。②使用磷酸緩沖鹽溶液沖洗切片3次，每次沖洗1 min。去除該溶液后向切片滴加50μl的第一抗體，在37℃的條件下孵育60 min。③使用磷酸緩沖鹽溶液沖洗切片3次，每次沖洗1 min。去除該溶液后向其中滴加50μl的第二抗體，在室溫的條件下孵育30 min。④使用磷酸緩沖鹽溶液沖洗切片3次，每次沖洗1 min。去除該溶液后向其中滴加新鮮的DAB（二氨基聯(lián)苯胺）染色液。在顯微鏡下觀察后對其進(jìn)行脫水透明處理，并采用中性樹膠進(jìn)行封片。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

我們采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對本研究中的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗。當(dāng)P＜0.05時視為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

我院對這100例患者進(jìn)行綜合檢查的結(jié)果是：患有乳腺腫瘤的22例、患有胃腫瘤的19例、患有甲狀腺腫瘤的17例、患有卵巢腫瘤的15例、患有肺腫瘤的12例、患有腦腫瘤的8例、患有子宮腫瘤的7例。聯(lián)用常規(guī)的石蠟切片制備法和蘇木精——伊紅染色法對腫瘤進(jìn)行診斷的準(zhǔn)確率為82%，聯(lián)用超聲快速石臘病理切片制備法和免疫組織化學(xué)染色法對腫瘤進(jìn)行診斷的準(zhǔn)確率為96%，二者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。詳情見表1。

表1 用兩種診斷方法對腫瘤進(jìn)行診斷準(zhǔn)確率的比較[n(%)]

3 討論

將超聲處理儀應(yīng)用于快速石臘病理切片制備中，是利用裝有組織的有機溶劑或石蠟在高速震蕩下產(chǎn)生的周期性縮張運動，使組織的水分更易被有機溶液置換出來，使加速融化的石蠟更易浸透病理組織內(nèi)部，最終實現(xiàn)縮短制片時間的目的。進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色監(jiān)測能夠識別病理組織中的蛋白質(zhì)、多肽、核酸、多糖、激素、病原體、神經(jīng)介質(zhì)、腫瘤的標(biāo)記物等[4]各種生物成分，而且能夠檢查出具有抗原性或半抗原性的物質(zhì)，從而對腫瘤的性質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確的定位[5]。因此，聯(lián)用超聲快速石臘病理切片制備法和免疫組織化學(xué)染色法對腫瘤進(jìn)行診斷不僅能夠縮短制片的時間，還可以提高診斷的準(zhǔn)確率，為臨床診療工作提供準(zhǔn)確、科學(xué)的診斷依據(jù)。

綜上所述，聯(lián)用超聲快速石臘病理切片制備法和免疫組織化學(xué)染色法診斷腫瘤性疾病的準(zhǔn)確率較高。此診斷方法值得在臨床上推廣應(yīng)用。

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