對CHB和HBV相關性肝硬化患者進行外周血Th17細胞頻率檢測的臨床意義分析

張利霞 張中平 許麗娟

(常州市武進人民醫院消化內科 江蘇 常州 213017)

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染導致的慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）是我國的常見病、高發病。最新的研究結果表明，由CD4+T細胞介導的獲得性免疫應答在肝細胞損傷與肝組織炎癥發生發展的過程中扮演了重要的角色。輔助性T細胞17（Th17）是一種CD4+T細胞，具有促進白細胞介素-17（IL-17）的生成、促進肝臟疾病的發生與發展等作用[1]。“外周血Th17細胞頻率”即Th17細胞在人體外周血中表達的頻率。在本次研究中，我們主要分析對CHB和HBV相關性肝硬化患者進行外周血Th17細胞頻率檢測的臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究中的患者均為我院2013年10月～2015年10月收治的30例CHB患者與30例HBV相關性肝硬化患者。這些患者的病情均符合《慢性乙型肝炎防治指南》（2010年版）中關于CHB或HBV相關性肝硬化的診斷標準[2]。將這些患者按照病情的不同分為CHB組（n=30）及HBV相關性肝硬化組（n=30）。將同期在我院進行體檢的30名健康人納入正常組。在CHB組患者中，有男性16例、女性14例，其平均年齡為（49.26±8.37）歲。在HBV相關性肝硬化組患者中，有男性17例、女性13例，其平均年齡為（48.83±9.26）歲。在正常組受試者 中，有男性15例、女性15例，其平均年齡為（48.94±9.30）歲。各組受試者的年齡、性別等一般資料相比較，差異無統計學意義（p＞0.05），具有可比性。本次研究已通過我院醫學倫理委員會的批準，相關的受試者均對本次研究知情且自愿參與本次研究。

1.2 檢測指標 抽取各組受試者的空腹肘靜脈血3mL，使用FACSCalibur流式細胞儀（美國BD公司生成）檢測其外周血中Th17細胞的頻率[5]。將各組受試者的血液標本置于離心機中分離出血漿，采用酶聯免疫吸附法（ELISA法）檢測其血漿中IL-17的水平。使用C8000型全自動生化分析儀（美國雅培公司生成）檢測各組受試者的血清谷丙轉氨酶（ALT）、總膽紅素（TBIL）等肝功能指標。使用ABI Prism 7300型熒光定量PCR儀（美國應用生物系統公司生成）及DA7600型全自動熒光定量PCR儀（美國羅氏公司生成）檢測各組受試者HBV的血清學標志物及HBV DNA載量等指標。

1.3 統計學分析 采用SPSS18.0統計軟件對本研究中的數據進行分析，計量資料用（±s）表示，采用t檢驗，計數資料用（%）表示，采用χ2檢驗，采用Pearson法或Spearman法進行相關性分析。檢驗水準的設定為α=0.05，P＜0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 對各組受試者外周血Th17細胞頻率的分析 與CHB組患者相比，HBV相關性肝硬化組患者的外周血Th17細胞頻率較高，差異有統計學意義（P＜0.05）。與正常組受試者相比，CHB組患者的外周血Th17細胞頻率較高，差異有統計學意義（P＜0.05）。詳情見表1。

表1 對各組受試者外周血Th17細胞頻率的分析（±s ）

表1 對各組受試者外周血Th17細胞頻率的分析（±s ）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與CHB組比較，#P＜0.05。

組別例數外周血Th17細胞頻率（%）CHB組302.14±0.33*HBV相關性肝硬化組302.51±0.29*#正常組301.09±0.17#

2.2 對各組受試者血漿IL-17水平的分析 與CHB組患者相比，HBV相關性肝硬化組患者血漿IL-17的水平較高，差異有統計學意義（P＜0.05）。與正常組受試者相比，CHB組患者血漿IL-17的水平較高，差異有統計學意義（P＜0.05）。詳情見表2。

表2 對各組受試者血漿IL-17水平的分析（±s ）

表2 對各組受試者血漿IL-17水平的分析（±s ）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與CHB組比較，#P＜0.05。

組別例數血漿IL-17的水平（pg/mL）CHB組3021.69±4.33*HBV相關性肝硬化組3032.48±8.15*#正常組3011.65±3.30#

2.3 對各組受試者其他檢測指標的分析 與HBV相關性肝硬化組患者相比，CHB組患者ALT的水平、HBV DNA的載量較高，其TBIL的水平較低，差異有統計學意義（P＜0.05）。兩組患者ALT的水平、TBIL的水平均高于正常組患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。詳情見表3。

表3 對各組受試者其他檢測指標的分析（±s）

表3 對各組受試者其他檢測指標的分析（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與CHB組比較，#P＜0.05。

組別例數ALT（U/L）TBIL（μmol/L）HBV DNA載量（IU/mL）CHB組30182.84±17.35*35.59±11.36*5.94±0.81 HBV相關性肝硬化組3065.72±10.41*#329.50±83.82*#3.73±0.59#正常組3020.39±4.55#12.29±4.07#--

2.4 對各組受試者的外周血Th17細胞頻率與其他指標相關性的分析 進行相關性分析的結果顯示，各組受試者的外周血Th17細胞頻率與其IL-17的水平呈正相關（P＜0.05），與其ALT的水平、TBIL的水平及HBV DNA的載量無明顯的相關性（P＞0.05）。詳情見表4。

表4 對各組受試者的外周血Th17細胞頻率與其他各項指標相關性的分析

3 討論

乙肝是臨床上最常見的病毒性肝炎，具有病程長、治療周期長、易復發等特點，可對患者的健康及生活造成嚴重的影響。乙肝患者在發病的早期其臨床癥狀較隱匿，其病情需經肝功能檢查、病毒載量檢測等多項檢查才能得到確診。如何及早確診乙型肝炎患者的病情，改善其預后，阻止其病情進展為肝硬化是進行臨床研究的重要課題。研究發現，CHB患者的機體對HBV的清除能力不足是導致HBV感染持續存在的主要原因，其機體的免疫機制異常與其Th1和Th2細胞的免疫應答失調具有一定的關聯性。最新的研究成果表明，CHB患者外周血中Th1細胞的占比與健康人相比無明顯的差異性，且與其病情的嚴重程度無明顯的關聯性。可見，慢性HBV感染不是由單一因素導致的，此病患者可能是在較多免疫機制的影響下發生持續的肝臟損傷[3]。

Th17是有促炎作用的CD4+T淋巴細胞亞群，具有促進人體內IL-17等炎癥介質的分泌等作用。本次研究的結果顯示，HBV相關性肝硬化組患者外周血中Th17細胞的頻率顯著高于CHB組患者，CHB組患者外周血中Th17細胞的頻率顯著高于正常組受試者。可見，隨著HBV感染者肝臟損傷程度的加劇，其外周血Th17細胞頻率及外周血、肝組織內IL-17的水平可逐漸上升。IL-17除具有促炎的作用外，還可誘導IL-6、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、趨化因子、金屬蛋白酶的生成，加速局部組織中炎癥細胞的浸潤與組織損傷。本研究的結果顯示，各組受試者的外周血Th17細胞頻率與IL-17的水平呈正相關（P＜0.05）。可見，Th17細胞可促進IL-17的表達，在肝臟損傷的發生發展中可發揮重要的作用。有學者發現，人的外周血Th17細胞頻率與ALT的水平有一定的相關性[4]。但本研究的結果顯示，各組受試者的外周血Th17細胞頻率與ALT、TBIL的水平及HBV DNA的載量均無明顯的相關性。這可能與本研究的樣本量有限且納入的CHB患者病情較輕，其外周血Th17細胞頻率與ALT的水平等肝功能指標的關聯性不明顯有關。Wang等人[5]指出，患者發生肝損傷的部位中Th17細胞的含量可顯著增多且其含量與發生炎癥反應的程度呈正相關。可見，對Th17細胞進行靶向調節有望為治療CHB及HBV相關性肝硬化新的策略。

綜上所述，隨著CHB及HBV相關性肝硬化患者肝損傷程度的加重，其外周血中Th17細胞的頻率可顯著增高。Th17細胞誘導的IL-17分泌增多可能是導致肝損傷發生發展的主要原因。

[1]王愛珍, 彭國平. 慢性乙肝患者外周血 Treg/Th17 及相關細胞因子的變化[J]. 中國現代醫生, 2013, 51(4): 108-110.

[2]金磊, 張紀元, 孫紅啟, 等. Th17 細胞在乙肝肝硬化患者中的免疫致病機制研究[J]. 解放軍醫學雜志, 2013, 38(1): 62-65.

[3]劉艷瓊, 楊小安, 鄒勇, 等. 慢乙肝患者外周血中 Th17細胞趨化因子受體的表達水平[J]. 中華實驗和臨床病毒學雜志,2014, 28(3): 161-163.

[4]林偉研, 倪進東,唐豪,等.Th17細胞因子IL-17A與乙肝疫苗無/弱應答關聯的研究[J]. 實用預防醫學, 2014, 21(8):904-905.

[5]Wang B, Zhao X P, Fan Y C, et al. IL-17A but not IL-22 suppresses the replication of hepatitis B virus mediated by over-expression of MxA and OAS mRNA in the HepG2.2.15 cell line[J]. Antiviral research, 2013, 97(3): 285-292.