烏雞白鳳丸對大鼠實驗性前列腺炎纖維化的影響

烏雞白鳳丸對大鼠實驗性前列腺炎纖維化的影響

董亞楠1，張鑫2*

(1.鄭州澍青醫學高等專科學校，河南 鄭州 450064；2.河南科技大學醫學院，河南 洛陽 471003)

摘要：目的探討烏雞白鳳丸對大鼠實驗性前列腺炎纖維化的影響。方法采用消痔靈注射液前列腺內注射制作慢性非細菌性前列腺炎大鼠模型。觀察各組大鼠前列腺病理學改變及組織纖維化程度。結果烏雞白鳳丸能減輕慢性非細菌性前列腺炎大鼠前列腺的炎癥反應和纖維化程度(P<0.05)。結論烏雞白鳳丸有改善大鼠慢性非細菌性前列腺炎纖維化的作用，其機制可能與降低TGF-β1的表達有關。

關鍵詞：烏雞白鳳丸；慢性非細菌性前列腺炎；纖維化;大鼠

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.10.029

中圖分類號：R285.5文獻標志碼： A

文章編號：1003-5699(2015)10-1068-03

基金項目:河南省教育廳2011年度自然科學研究計劃(2011A360001)。

作者簡介:董亞楠(1987-)，女，碩士研究生，主要從事組織學科研工作研究。

收稿日期:(責任編輯：趙玉芝2014-11-11)

*通信作者:張鑫，電子信箱-xzzp@haust.edu.cn

Impact of Wujibaifengwan on prostatic fibrosis of rats with chronic nonbacterial prostatitis

DONG Yanan1,ZHANG Xin2*

(1.Zhengzhou Shuqing Medical College,Zhengzhou 450064,China;

2.Medical College of Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,Zhengzhou Province,China)

Abstract:ObjectiveTo study the impact of Wujibaifengwan on prostatic fibrosis of rats with chronic nonbacterial prostatitis (CNP).MethodsThe model of chronic nonbacterial prostatitis in rats was established by injecting into the prostates with Xiaozhiling solution.The prostatic pathological changes and fibrosis of rats were observed.ResultsThe inflammatory reactions and fibrosis of prostates in rats with chronic nonbacterial prostatitis had been improved after treated with Wujibaifengwan (P<0.05).ConclusionWujibaifengwan is effective to improve the fibrosis of rats with chronic nonbacterial prostatitis.The mechanism is probably related with the decrease production of TGF-β1.

Keywords:Wujibaifengwan;CNP;fibrosis;rat

烏雞白鳳丸處方來源于《壽世保元》中的烏雞丸，經加減化裁而成，它雖是傳統的婦科良方，但依據中醫學“異病同治”“證同治同”的原則，已廣泛地應用于婦科“經”“帶”疾病以外的其他疾病的治療[1-2]。臨床有應用烏雞白鳳丸治療前列腺炎的報道，但缺乏烏雞白鳳丸治療前列腺炎的機制研究[3-7]。本實驗主要通過觀察烏雞白鳳丸對消痔靈所致的慢性非細菌性前列腺炎(CNP)大鼠前列腺間質纖維化的影響并探討其作用機制，從而為其臨床應用提供實驗依據。

1材料與方法

1.1實驗動物清潔級健康雄性SD大鼠40只，體質量450～500 g，5月齡，由河南科技大學醫學院實驗動物中心提供。

1.2主要藥品及試劑烏雞白鳳丸購自北京同仁堂制藥廠；前列泰購自陜西功達制藥有限公司；消痔靈注射液購自吉林省集安益盛藥業股份有限公司；抗TGF-β1鼠源性單克隆抗體購自Santa Cruz；免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3儀器OLYMPUS光學顯微鏡，蛋白電泳儀及電轉儀。

1.4大鼠造模根據文獻[8-10]，實驗大鼠用1%戊巴比妥鈉腹腔注射,無菌條件下取下腹正中切口，提出膀胱及兩側精囊，暴露附于精囊內側的前列腺背葉，造模組(32只)分別注入25%的消痔靈注射液共0.25 mL，假手術組(8只)分別注入等量生理鹽水，腹腔噴慶大霉素注射液以防感染，縫合肌肉、皮膚。創口處涂紅霉素軟膏。

1.5分組與給藥1周后，將32只造模大鼠隨機分為4組:CNP模型對照組，烏雞白鳳丸低、高劑量組，前列泰治療對照組，各8只。假手術組、CNP模型組：以等量生理鹽水灌胃；烏雞白鳳丸低、高劑量組:以烏雞白鳳丸懸液5 mL/kg灌胃，分別相當于1、2 g/kg生藥；前列泰治療對照組：以前列泰膠囊用蒸餾水配制成混懸液5 mL/kg灌胃，相當于0.95 g/kg生藥。給藥1次/d，連用4周。

1.6取材末次給藥24 h后，處死大鼠，取前列腺組織，切取單側部分新鮮前列腺組織做Western Blotting；切取部分前列腺組織放入10%的中性福爾馬林溶液中固定24 h，做石蠟切片。

1.7檢測指標

1.7.1病理學觀察肉眼觀察各組大鼠前列腺組織的顏色、硬度、大小、完整性等一般情況。取材、HE染色，光鏡下觀察大鼠前列腺的炎癥情況。

1.7.2Masson染色常規Masson染色，光學顯微鏡觀察拍照，用Image-proplus 6.0圖像分析軟件進行自動測量分析，前列腺纖維化相對面積=前列腺藍染面積/視野總面積×100%。

2結果

2.1病理學觀察假手術組大鼠前列腺表面紅潤，腺體組織柔軟有彈性，結構完整，與周圍組織無黏連，易與周圍組織剝離;CNP模型組腺體呈暗紅色或棕黃色，質地較硬，彈性較差，與周圍組織黏連，體積較正常組較大，不易剝離；給藥各組與CNP模型組相比,前列腺質地相對較軟，彈性較好，顏色鮮紅，與周圍組織的黏連程度較輕，個別大鼠前列腺組織與假手術組近似。光鏡下可見，假手術組前列腺腺泡上皮無增生或萎縮現象，腺腔不規則，腺腔內有少量正常分泌物，間質無炎癥細胞浸潤；CNP模型組前列腺腺腔擴張,上皮變矮，排列較規則，腔內分泌物增多，間質疏松水腫、血管擴張充血、有大量炎癥細胞浸潤；烏雞白鳳丸低劑量組、高劑量治療組腺腔輕度擴張，腺上皮萎縮改善，腔內有少量分泌物，炎癥明顯消退；前列泰治療對照組腺上皮有輕度萎縮，腺腔擴張，腔內分泌物較多，個別切片可見到少量炎癥細胞浸潤。

2.2Masson染色結果如圖1，光鏡下可見:假手術組大鼠前列腺間質內纖維結締組織很少;CNP模型組大鼠前列腺組織間質內纖維結締組織大量增生；治療之后，前列腺間質內纖維結締組織增生減輕。用圖像分析系統對Masson染色結果進行半定量分析，結果見表1。

表1　各組大鼠前列腺纖維化相對面積比較 ± s, n=8)

注：與假手術組比較，##P<0.01；與CNP模型組比較，△P<0.05

注：A：假手術組；B：CNP模型組；C：烏雞白鳳丸低劑量組；D：烏雞白鳳丸高劑量組；E：前列泰治療對照組 圖1　烏雞白鳳丸對CNP大鼠前列腺組織纖維化的影響(Masson染色，400×)

3討論

慢性前列腺炎是一種十分常見的男性泌尿生殖系疾病，其中90%左右為慢性非細菌性前列腺炎[11]。慢性前列腺炎病理變化主要為前列腺腺泡萎縮、腺腔縮小、腔內分泌物減少、間質內炎性細胞浸潤和纖維組織增生，隨著病情的進展，后期前列腺常常發生纖維化、質地較硬、周圍炎性黏連重、解剖層次不清，可能是導致藥物不易進入前列腺組織，療效較差的一個重要原因[12-13]。本實驗結果顯示,在慢性非細菌性前列腺炎模型大鼠的前列腺組織內有明顯的炎癥浸潤和大量的纖維結締組織增生，表明模型復制成功。

烏雞白鳳丸以烏雞為主藥，配以當歸、白芍、人參、黃芪、地黃、丹參等組成，具有理血通經、活血化瘀、抗炎、改善微循環等作用[14-15]。在本實驗中，烏雞白鳳丸治療組與慢性非細菌性前列腺炎模型組相比,前列腺組織纖維化情況有了明顯的改善,表明烏雞白鳳丸可以改善慢性非細菌性前列腺炎大鼠前列腺的纖維化程度，從而治療慢性非細菌性前列腺炎。研究表明[16-18]，TGF-β1是一類強效的致纖維化因子，在器官纖維化中發揮重要的作用。免疫組織化學和Western Blotting的結果一致顯示TGF-β1在慢性非細菌性前列腺炎模型組大鼠前列腺組織中的表達量顯著高于假手術組大鼠，經烏雞白鳳丸治療后，大鼠前列腺組織中TGF-β1的表達量顯著低于模型組，并且烏雞白鳳丸高劑量組TGF-β1的表達量低于烏雞白鳳丸低劑量組。因此，我們認為烏雞白鳳丸可以通過改善前列腺組織的纖維化來治療慢性非細菌性前列腺炎，其機制可能與烏雞白鳳丸降低前列腺組織內TGF-β1的表達有關。

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