小兒清肺分散片中黃芩苷溶出度測定方法

小兒清肺分散片中黃芩苷溶出度測定方法

孫妍，姚琳，李金山，王偉明

(黑龍江省中醫藥科學院中藥所，哈爾濱 150036)

摘要：目的建立小兒清肺分散片中黃芩苷的溶出度測定方法。方法采用HPLC法，建立黃芩苷的含量測定方法；采用單因素試驗法，以同一時間點的溶出度為指標，分別考察了溶出介質、溶出方式及轉速對黃芩苷溶出的影響。結果黃芩苷濃度在0.025～0.125 mg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系(r=0.999 9)，平均回收率為100.41%(n=9)，RSD=2.98%；小兒清肺分散片的溶出條件為采用槳法，以pH值為6.8磷酸鹽緩沖液為溶出介質，轉速為75 r/min，取樣時間為40 min。結論本方法操作簡便，結果準確，重復性好，可作為小兒清肺分散片的溶出度測定方法。

關鍵詞：小兒清肺分散片；黃芩苷；溶出度；色譜法，高壓液相

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.03.025

中圖分類號：R284文獻標志碼： A

文章編號：1003-5699(2015)03-0297-04

基金項目:黑龍江省中醫藥科研項目(ZHY12-W027)。

作者簡介:孫妍(1981-)，女，碩士研究生，主管藥師，主要從事中藥新藥及質量標準研究。

收稿日期:(責任編輯：張瑞彬2014-08-04)

Method for determination of Baicalin solubility of Xiaoer Qingfei Dispersible Tablet

SUN Yan,YAO Lin,LI Jinshan,WANG Weiming

(Heilongjiang Academy of Traditional Chinese Medicine,Harbin 150036,China)

Abstract:ObjectiveTo establish the method for determination of Baicalin solubility of Xiaoer Qingfei Dispersible Tablet.MethodsHPLC methed was used to determine the content of baicalin;By single factor experiment,at the same time with the solubility as index,investigating the stripping medium,stripping method,stripping speed respectively that effect of baicalin stripping.ResultsBaicalin was linear in the range of 0.025～0.125 mg/mL(r=0.999 9),and the average recovery was 100.41% (n=9) with RSD=2.98%;The digestion conditions of Xiaoer Qingfei Dispersible Tablet is using the paddle,with pH 6.8 artificial intestinal solution,stripping speed 75 r/min,the sampling time is 40 min.ConclusionThis method is accurate,reliable,specific and reproducible,and can be used for the stripping method of Xiaoer Qingfei Dispersible Tablets.

Keywords:Xiaoer Qingfei Dispersible Tablet;Baicalin;solubility;HPLC

小兒清肺分散片[1]是由小兒清肺片改劑型而成，小兒清肺片為我院研制的純中藥制劑，用于小兒風熱閉肺所致的喘咳及支原體引起的上呼吸道感染等病癥，經多年臨床驗證，對小兒支原體肺炎療效確切、抗復發、抗耐藥作用強、毒副作用小。基于小兒清肺片抗肺炎支原體肺炎的確切療效及支原體肺炎發病迅速的特點，本研究旨在開發具有抗肺炎支原體肺炎作用的速釋制劑。分散片適合于老、幼和吞咽困難的患者[2-3]。分散片能否迅速顯效的決定因素是其有效成分的溶出和吸收的速度[4]，為更好地控制藥品質量，本試驗參照《中國藥典》2010年版2部附錄XC溶出度測定法,采用高效液相色譜法，建立小兒清肺分散片中黃芩苷的溶出度測定方法。

1實驗材料

YP202N型電子天平(上海精密科學儀器有限公司)，日本SCL-10A島津高效液相色譜儀，島津SPD-10A紫外檢測器，BP211D型十萬分之一分析天平(賽多利斯有限公司),KQ-300DB型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，RC806溶出試驗儀(天津市天大天發科技有限公司)。

黃芩苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：715-200111)，小兒清肺分散片(自制，批號：130601、130602、130603)，小兒清肺片(黑龍江省中醫藥科學院制劑室，批號：130501、130502、130503)，甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2含量測定方法的建立[5-10]

2.1色譜條件色譜柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)；檢測波長：280 nm；流速:1.0 mL/min；進樣量：10 μL。理論板數按黃芩苷峰計算應不低于2 000。

2.2對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品12.5 mg，置100 mL量瓶中,加50%甲醇適量，超聲使其溶解，放置至室溫，加入50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.125 mg/mL的對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備取小兒清肺分散片約0.2 g，研細，精密稱定，置100 mL量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理(功率300 W，頻率40 kHz)30 min,放置至室溫，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4陰性對照溶液的制備取按處方比例配制的缺黃芩藥材的陰性樣品，同2.3項下供試品溶液制備方法制成黃芩陰性對照溶液。

2.5干擾試驗精密吸取對照品溶液、陰性對照溶液、供試品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，按2.1項下色譜條件進行測定，結果陰性對照液在與黃芩苷對照品色譜的相應位置上無干擾峰，可見方中其他成分及輔料對測定無干擾。

2.6線性關系考察分別精密吸取2.2項下對照品液5，10，15，20，25 mL于25 mL容量瓶中，用50%甲醇液稀釋至刻度，得到濃度分別為0.025，0.05，0.075，0.1，0.125 mg/mL的對照品溶液，按2.1項下色譜條件，分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，以黃芩苷峰面積積分值(Y)為縱坐標，黃芩苷進樣濃度(X)為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程:Y=4 255 613X-224 135.8(r=0.999 9)。表明黃芩苷在0.025～0.125 mg/mL之間呈良好的線性關系。

2.7精密度試驗精密吸取濃度為0.05 mg/mL黃芩苷對照品溶液，按2.1項下色譜條件連續進樣6次，每次10 μL,記錄黃芩苷峰面積積分值，RSD為0.51%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.8穩定性試驗取同一批小兒清肺分散片供試品(130601)，按2.3項下的方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件，分別于0，2，4，6，8，10 h進樣，每次10 μL，記錄黃芩苷的峰面積積分值，RSD為0.52%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內穩定性良好。

2.9重復性試驗取同一批小兒清肺分散片供試品(130601),分別精密稱取6分，按2.3項下的方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定黃芩苷的含量，結果均值為33.63 mg/g，RSD為0.26%(n=6)。

2.10加樣回收試驗取已知含量的小兒清肺分散片(批號130601)9分，研細，精密稱定，分別精密加入黃芩苷對照品，按2.3項下的方法配制供試品溶液，并按2.1項下色譜條件測定黃芩苷含量，計算回收率和相對標準偏差。結果見表1。

表1　黃芩苷的加樣回收率試驗結果( n=9)

3溶出度測定方法的建立[11-15]

3.1溶出介質的選擇分別以pH值為1.0的人工胃液、2.8的鹽酸溶液、4.5的乙酸銨冰乙酸溶液及pH值為6.8磷酸鹽緩沖液900 mL作溶出介質,轉速為75 r/min，溫度為(37±0.5)℃，在30 min時精密吸取5 mL溶出介質，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定，計算黃芩苷溶出度。結果表明黃芩苷在人工腸液中有較好的溶出效果，故選擇pH值為6.8的人工腸液作為溶出介質。

3.2溶出方式的選擇分別以籃法和槳法進行實驗，以pH值為6.8磷酸鹽緩沖液900 mL為溶出介質，轉速為75 r/min，溫度為(37±0.5)℃，在30 min時精密吸取5 mL溶出介質,0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定，計算黃芩苷溶出度。結果槳法的黃芩苷峰面積優于籃法，故采用槳法進行溶出度試驗。

3.3轉速的選擇以pH值為6.8磷酸鹽緩沖液900 mL作為溶出介質，溫度為(37±0.5)℃，采用槳法進行試驗，轉速分別為50，75，100 r/min，在30 min時精密吸取5 mL溶出介質，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定,計算黃芩苷溶出度。結果表明，轉速為100 r/min時，溶出效果最好，但轉速為75 r/min和100 r/min時溶出度差別不大，所以選擇轉速為75 r/min，進行溶出度實驗。

3.4小兒清肺分散片溶出度驗證試驗依照《中國藥典》2010版2部附錄XC溶出度第2法進行測定，分別取小兒清肺分散片6片，加入900 mL的經脫氣處理的pH值為6.8磷酸鹽緩沖液,轉速為75 r/min，溫度為(37±0.5)℃，分別于5，10，15，20，30，40 min精密吸取5 mL溶出介質，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液,同時補加同溫介質5 mL；另取小兒清肺分散片20片,研細，精密稱取適量(相當于1片的平均重量)，加入溶出介質超聲處理30 min，濾過，取續濾液作為對照液。取上述溶液，按2.1項下色譜條件，分別測定黃芩苷的峰面積，用兩者之比計算每片的溶出度，繪制溶出曲線。見圖1。

3.5小兒清肺片的溶出度試驗依照《中國藥典》2010版2部附錄XC溶出度第2法測定，取小兒清肺片6片,加入900 mL的經脫氣處理的人工腸液，轉速為75 r/min，溫度為(37±0.5)℃，分別于5，10，15，20，30，40 min精密吸取5 mL介質，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液，同時補加同溫介質5 mL；另取小兒清肺片20片，研細，精密稱取適量(相當于1片的平均重量)，加入溶出介質超聲處理30 min，濾過，取續濾液作為對照液。取上述溶液，按2.1項下色譜條件，分別測定黃芩苷的峰面積，用兩者之比計算每片的溶出度，繪制溶出曲線。見圖1。

圖1　小兒清肺片、小兒清肺分散片的累計溶出度曲線

3.6溶出度指標的制定分別取小兒清肺分散片3批(批號:130601、130602、130603)，每批6片，按3.4項下溶出度測定方法試驗。結果顯示，3批小兒清肺分散片在溶出介質中溶出行為相似，且小兒清肺分散片在40 min時累計溶出率超過90%。為控制本品質量，適當延遲溶出度取樣時間及限度，初步確定為40 min時溶出不低于85%。

4討論

溶出度的檢查方法主要包括轉籃法、槳法和小杯法等。片劑多采用槳法，因為中藥分散片分散后成混懸細顆粒壯溶液，槳法可以避免混懸液堵塞轉籃網的篩孔，且試驗也證明槳法比轉籃法更適用于中藥固體制劑。 小兒清肺分散片是由小兒清肺片改劑型而成，小兒清肺分散片在15 min累計溶出度達到70%以上，而小兒清肺片在15 min時累計溶出度剛剛達到40%。制成分散片，崩解迅速、有利于藥物的溶出，有利于提高藥物的血藥濃度及生物利用度，方便臨床用藥，拓展了小兒清肺片的劑型應用范圍。

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