黃龍止咳口服液對模型動物炎癥及遲發型超敏反應的影響

黃龍止咳口服液對模型動物炎癥及遲發型超敏反應的影響

陶迪1，司振陽2*，隆紅艷2,張驃2

(1.南京中醫藥大學，南京 210029;2.南京市中醫院，南京 210001)

摘要：目的研究黃龍止咳口服液的抗炎、抗過敏作用。方法建立角叉菜膠致大鼠足趾腫脹模型，測量并比較致炎后不同時間點大鼠的足趾周長，觀察黃龍止咳口服液的抗炎作用。采用2，4-二硝基氯苯(DNCB)背部皮下致敏、耳廓發敏的方法建立遲發型超敏反應小鼠模型，觀察黃龍止咳口服液的抗過敏作用。結果抗炎實驗表明，黃龍止咳口服液對角叉菜膠所致大鼠足爪炎性水腫有顯著抑制作用，能抑制炎癥的發展，加速其消退，并顯示一定的量-效關系?？惯^敏實驗表明，與對照組比較,黃龍口服液各劑量組均可使DNCB所致的小鼠耳腫脹程度明顯減輕。結論黃龍止咳口服液具有顯著的抗炎和抗過敏作用。

關鍵詞：黃龍止咳口服液;抗炎;抗過敏;祛風解痙;宣肺化痰;清熱降逆

DOI::10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.07.019

中圖分類號：R392.8文獻標志碼： A

文章編號：1003-5699(2015)07-0710-03

基金項目:江蘇省中醫藥局科技項目(LZ13100)。

作者簡介:陶迪(1988-),女,碩士研究生，主要從事小兒肺系疾病研究。

收稿日期:(責任編輯：張瑞彬2014-10-20)

*通信作者:司振陽,電話-1391295104,電子信箱-sizhenyang@126.com

Huanglongzhike oral liquid on model animal inflammation and influence

of delayed-type hypersensitivity

TAO Di1,SI Zhenyang2*,LONG Hongyan2,ZHANG Biao2

(1.Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210029，China;

2.Chinese Medicine Hospital of Nanjing，Nanjing 210001,China)

Abstract:ObjectiveTo study the anti-inflammatory,anti-allergic effect of huanglong cough oral liquid.MethodsEstablish carrageenan to toes swelling of rats’ model,measure and compare the different time points after inflammatory rats toes circumference,anti-inflammatory effect of observation of huanglong cough oral liquid.The 2.4-2 nitrochlorobenzene (DNCB) back under the skin sensitization,auricle of sensitive method to establish delayed-type hypersensitivity in mice model,to observe the allergy of huanglong cough oral liquid.ResultsAnti-inflammatory experiments show that the huanglong cough oral liquid diagonal inflammatory edema caused by carrageenan in rats foot claw has significant inhibitory effect,can restrain the development of inflammation,accelerate its faded,and displays a certain amount-effect relationship.Allergy experiments show that,compared with control group,the yellow dragon oral liquid in each dose group can make the mouse ear swelling caused by DNCB significantly reduce.ConclusionHuanglong cough oral liquid has significant anti-inflammatory and anti-allergic effects.

Keywords:Huanglongzhike oral liquid;anti-inflammatory;anti-allergy;expelling wind to relieve convulsion;ventilating the lung and resolving phlegm;reducing fever and lowering the adverse

黃龍止咳口服液由炙麻黃、地龍、杏仁、紫蘇子、桑白皮、前胡、旋覆花、蟬蛻共8味藥組成,具有祛風解痙、宣肺化痰、清熱降逆之功。臨床研究結果表明[1]，黃龍止咳口服液治療小兒咳嗽變異性哮喘(風熱夾痰證)在改善患兒總體療效、主癥、次癥及證候等諸方面均優于對照組。為進一步研究提供實驗依據，以冀探明其臨床療效的藥理學基礎及作用機理，本文報告黃龍止咳口服液的抗炎及抗遲發型超敏反應的作用。

1實驗材料

1.1動物及分組SPF級SD大鼠，60只，雄性，體質量(180±10)g；SPF級ICR小鼠,60只，雌雄各半，體質量(20±2)g，均購于北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號:SCXK(京)2012-0001，適應性飼養1周后用于實驗。大鼠與小鼠各隨機均分為6組:空白對照組，黃龍止咳口服液低、中、高劑量組，先聲咳喘寧組和布地奈德組，每組10只。

1.2試驗藥品與儀器黃龍止咳口服液由炙麻黃、地龍、杏仁、紫蘇子、桑白皮、前胡、旋覆花、蟬蛻共8味藥組成,中藥湯劑飲片來源于南京市中醫院中藥房,用蒸餾水煎至生藥1.5 g/mL，實驗時以蒸餾水按劑量配制成所需濃度。先聲咳喘寧(江蘇先聲制藥有限公司,國藥準字Z32020967)，普米克令舒(吸入用布地奈德混懸液，批號3144771)，角叉菜膠(美國SIGMA公司，批號1001660420)，2，4-二硝基氯苯(DNCB，南京都萊生物技術有限公司，批號：J130920)，超聲霧化器402AI型(江蘇魚躍醫療設備股份有限公司)，METTLER TOLEDO電子天平PL83-S/01(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司制造)，打孔器。

2實驗方法

2.1對角叉菜膠所致大鼠足腫脹的影響造模方法[2]:實驗前每只大鼠右后爪踝關節處用油性筆畫一清晰橫線，先測出各鼠正常的鼠爪周長。各組藥物以蒸餾水配成相應濃度的混懸液，空白對照組予等體積蒸餾水，布地奈德組配等量生理鹽水霧化吸入，各組均給藥6 d，1次/d。第6天各組(正常組除外)均在給藥1 h后于右后肢足跖部皮下注射1%角叉菜膠0.1 mL/只，造模成功標準以與正常組腫脹度比較有顯著差異為準，誘發足趾炎性腫脹。致炎前及致炎后1，2，4，6 h分別測量大鼠右后足周長，以致炎前后周長之差為腫脹指標。腫脹度計算公式為：腫脹度=致炎后足趾周長-致炎前足周長。

2.2對DNCB所致小鼠遲發型超敏反應的影響造模方法[3]：各組灌胃給藥1次/d，連續9 d。采用首次給藥第2天小鼠背部皮下注射1.25% DNCB丙酮液20 μL/只致敏，末次給藥后1 h，在小鼠右耳兩面涂抹1.25% DNBC丙酮液20 μL/只進行攻擊,誘發小鼠遲發型超敏反應模型。攻擊后24 h，頸椎脫臼處死小鼠，用直徑8 mm打孔器于左右耳相同部位打下圓形耳片，精密稱重后分別計算小鼠耳腫脹度及腫脹抑制百分率。計算公式:腫脹度(mg)=右耳片重量-左耳片重量;抑制率(%)=(空白對照組平均腫脹度-各給藥組平均腫脹度)/空白對照組平均腫脹度×100%。

3實驗結果

3.1黃龍止咳口服液對角叉菜膠所致大鼠足腫脹的影響結果見表1。黃龍高劑量組在致炎后1、2、4、6 h抗炎作用均優于黃龍中、低劑量組，表明隨著黃龍劑量的增加，其抗炎作用在逐漸增強，提示黃龍止咳口服液對角叉菜膠所致大鼠足爪炎性水腫有顯著抑制作用，能抑制炎癥的發展,加速其消退,并顯示一定的量-效關系。

表1　黃龍止咳口服液對角叉菜膠所致大鼠足腫脹的影響 ± s, n=10)

注：與空白對照比較，##P<0.01

3.2黃龍止咳口服液對2，4-二硝基氯苯(DNCB)所致小鼠遲發型超敏反應的影響結果見表2。與空白對照組比較,黃龍各劑量組均可使DNCB所致的小鼠耳腫脹程度明顯減輕。說明在致敏前至激發后全程給藥的情況下，黃龍止咳口服液對DNCB所致小鼠遲發型超敏反應有顯著抑制作用，隨劑量加大，作用增強。

組 別劑量/(g生藥/kg)腫脹度/mg抑制率/%空白對照組 —12.4±2.7 黃龍低劑量組8.4610.3±1.6# 16.9黃龍中劑量組16.929.4±1.7##24.2黃龍高劑量組33.848.1±1.4##34.6先聲咳喘寧組6.1mL/kg7.6±1.6##38.7布地奈德組 0.3mg/kg11.9±2.2 4.1

注：與空白對照比較，#P<0.05,##P<0.01

4討論

目前對咳嗽變異性哮喘(CVA)的發病機制尚不明確，現代醫學認為，兒童CVA的發病機制可能為[4]變應原致敏引起的多種炎癥細胞、炎癥介質、細胞因子共同參與相互作用所致的慢性非特異性炎癥，其間接表現為氣道高反應性。臨床上用抗生素治療無效，用支氣管擴張劑可緩解。 黃龍止咳口服液是治療小兒咳嗽變異性哮喘(風熱夾痰證)的臨床經驗用方。現代藥理學[5]認為，麻黃中麻黃堿是平喘的有效成分，有松弛支氣管平滑肌的作用，而揮發油具有很強的抑制流感病毒的作用。孫曉東等[6]通過動物實驗證實地龍對豚鼠過敏性哮喘有部分緩解作用，而且地龍作為一種外源蛋白，在發揮平喘功能的同時不會引起過敏反應；杏仁的胃蛋白酶水解產物及苦杏寧球蛋白和苦杏寧白蛋白，具有明顯抑制實驗動物的炎癥反應的作用[7]。蘇子[8]具有祛痰鎮咳的作用，并能使過敏反應受到抑制。馮冰虹等[9]證實，桑白皮的氯仿提取物和堿提取物鎮咳、祛痰作用明顯。前胡經化學純化后可提取多種有效化合物成分，其中最為主要的化合物為香豆素類[10]，有活血平壓、降氣化痰等功效，臨床多用于治療風熱郁肺、干咳痰黃、胸悶嘔逆等癥[11]。蟬蛻[12]對組胺參與的致喘模型有明顯的平喘作用，緩解慢性炎癥、改變“微觀血瘀”狀態，進而緩解支氣管平滑肌的痙攣。旋覆花黃酮[13]有顯著保護由組胺引起的豚鼠支氣管痙攣性哮喘的作用，同樣有對抗組胺引起的離體豚鼠氣管痙攣的作用。

角叉菜膠致大鼠足腫脹模型是一個經典的炎癥模型，常用于抗炎藥物的篩選及評價，其應用十分廣泛。遲發型超敏反應運動模型類似于人類發生的病理生理過程，是評價藥物療效的較為理想的模型之一。本實驗根據該藥的功能主治進行了抗炎、抗過敏等藥效學試驗研究，設置高、中、低3個劑量組，結果黃龍各劑量組均可明顯減輕角叉菜膠所致的大鼠足腫脹及DNCB所致的小鼠耳腫脹程度，與對照組比較有顯著性差異；中、高劑量組給藥2 h后可明顯減輕角叉菜所致的大鼠足腫脹，與對照組比較差異有顯著性。隨著黃龍止咳口服液對角叉菜膠所致的大鼠足腫脹及DNCB所致小鼠遲發型超敏反應抑制作用不斷增強，顯示一定的量-效關系。提示黃龍止咳口服液具有良好的抗炎、抗過敏作用，為其臨床應用提供了藥理學實驗依據。

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