內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因G894T多態(tài)性與陰虛體質(zhì)型缺血性卒中的關(guān)系 ※

內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因G894T多態(tài)性與陰虛體質(zhì)型缺血性卒中的關(guān)系※

韓媛媛李雪青△

(河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院普外科，河北唐山063000)

【關(guān)鍵詞】卒中；一氧化氮合酶；基因；多態(tài)性，單核苷酸；陰虛；體質(zhì)學(xué)說(shuō)

doi：10.3969/j.issn.1002-2619.2015.06.018

【中圖分類號(hào)】R743.302.5；R394.33；R363.26

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1002-2619(2015)06-0850-03

通訊作者：△河北聯(lián)合大學(xué)中醫(yī)學(xué)院針灸推拿教研室，河北唐山063000

作者簡(jiǎn)介：韓媛媛(1971—)，女，副主任護(hù)師。研究方向：卒中的中醫(yī)體質(zhì)研究。

收稿日期：(2014-02-08)

※項(xiàng)目來(lái)源：河北省中醫(yī)藥管理局2013年度中醫(yī)藥類科研計(jì)劃課題(編號(hào)：2013073)

腦血管病是中老年人常見病、多發(fā)病、疑難病，以其高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率受到國(guó)內(nèi)外重視，成為中西醫(yī)治療研究的熱點(diǎn)。缺血性卒中約占全部卒中的70%[1]。我國(guó)調(diào)查顯示，缺血性卒中年發(fā)病率為109.7～217/10萬(wàn)，患病率為719～745.6/10萬(wàn)，死亡率116～141.8/10萬(wàn)[2-3]。流行病學(xué)研究表明，體質(zhì)相關(guān)基因在缺血性卒中發(fā)病中具有重要作用[4]。缺血性卒中除少數(shù)人是由于單基因病引起外，大部分是由體質(zhì)、遺傳等因素共同作用導(dǎo)致的復(fù)雜性疾病。

體質(zhì)因素決定著個(gè)體生理反應(yīng)的特異性及其對(duì)某種致病因子的易感性和所產(chǎn)生病變類型的傾向性。因此在很大意義上，糾正體質(zhì)偏頗是臨床研究的方向[5]。有統(tǒng)計(jì)顯示[6]，在168例以60~70歲為主的缺血性卒中患者中，陰虛體質(zhì)占20.2%。近年來(lái)研究表明，內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因多態(tài)性可能與缺血性卒中的發(fā)生密切相關(guān)。但是關(guān)于eNOS基因多態(tài)性與陰虛體質(zhì)導(dǎo)致缺血性卒中之間關(guān)系，國(guó)內(nèi)外未見報(bào)道。陰虛體質(zhì)、陰虛體質(zhì)缺血性卒中基因表達(dá)的差異研究將有助于從基因水平闡明缺血性卒中的發(fā)病機(jī)制，并進(jìn)行有效的早期干預(yù)。

1資料與方法

1.1病例選擇

1.1.1診斷標(biāo)準(zhǔn)陰虛體質(zhì)依據(jù)王琦《中醫(yī)體質(zhì)分類判定標(biāo)準(zhǔn)》[7]確診。缺血性卒中依據(jù)第四屆全國(guó)腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的“各類腦血管疾病診斷要點(diǎn)”確診[8]。

1.1.2排除標(biāo)準(zhǔn)排除心源性卒中、動(dòng)脈炎、腦血管畸形或腦腫瘤等其他病因及不明原因?qū)е碌娜毖宰渲校荒挲g<45歲，>70歲；短暫性腦缺血發(fā)作、可逆性神經(jīng)功能缺損；伴有心血管、肝腎、造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病；資料不全者；非陰虛體質(zhì)者。

1.2一般資料選取2012-06—2014-06在河北聯(lián)合大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科380例及河北省唐山市中醫(yī)醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科212例住院患者及體檢人員592例，依據(jù)診斷分為2組，即陰虛體質(zhì)組290例(符合陰虛體質(zhì)診斷標(biāo)準(zhǔn)，且無(wú)缺血性卒中)及陰虛體質(zhì)缺血性卒中組302例。2組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性(P>0.05)(見表1)。

表1　2組一般資料比較

1.3研究方法取2組研究對(duì)象外周靜脈血5 mL，根據(jù)血細(xì)胞脫氧核糖核酸(DNA)快速提取法提取基因DNA。采用探針熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)技術(shù)擴(kuò)增eNOS基因中含有G894T多態(tài)性的核苷酸序列(參照文獻(xiàn)[9]eNOS基因的DNA序列，利用引物設(shè)計(jì)軟件Primer Premier)。采用兩步法PCR擴(kuò)增程序：預(yù)變性95 ℃ 10 s，95 ℃ 5 s，60 ℃ 32 s，40個(gè)循環(huán)。將擴(kuò)增產(chǎn)物與生物素標(biāo)記的eNOS基因探針進(jìn)行雜交，經(jīng)顯色后判斷多態(tài)性結(jié)果。

2結(jié)果

2組eNOS基因G894T多態(tài)性位點(diǎn)基因型和等位基因分布頻率見表2。

表2　2組eNOS基因G894T多態(tài)性位點(diǎn)基因型和

由表2可見，陰虛體質(zhì)缺血性卒中組eNOS基因G894T突變位點(diǎn)基因型和等位基因分布頻率與陰虛體質(zhì)組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3討論

缺血性卒中屬中醫(yī)學(xué)“中風(fēng)”范疇，起病急驟，“如矢石之中的，若暴風(fēng)之疾速”，與“風(fēng)”之“善行而數(shù)變”的特征相似，由多種因素長(zhǎng)期作用而致。《靈樞·刺節(jié)真邪》載：“虛邪偏客于身半，其入深，內(nèi)居營(yíng)衛(wèi)，榮衛(wèi)稍衰，則真氣去，邪氣獨(dú)留，發(fā)為偏枯。”認(rèn)為邪踞正損是中風(fēng)發(fā)生的根本。《素問·生氣通天論》曰：“陽(yáng)氣者，大怒則形氣絕，而血菀于上，使人薄厥。”卒中的發(fā)生一個(gè)量變到質(zhì)變的過(guò)程，我們往往只看到質(zhì)變，而忽視了最為重要的量變。從長(zhǎng)期陰虛體質(zhì)偏頗到亞健康狀態(tài)，再到二者長(zhǎng)期交互作用出現(xiàn)體內(nèi)陰陽(yáng)失衡，并逐漸消耗體內(nèi)正氣，導(dǎo)致正氣虧虛，在某種特殊條件下，“陽(yáng)氣暴走于上”而突然發(fā)病。體質(zhì)取決于先天而難以改變，但是可以改變由于體質(zhì)偏頗導(dǎo)致的對(duì)某種疾病發(fā)生的易感性，這是卒中的一個(gè)研究方向。

目前，對(duì)于多個(gè)關(guān)于基因變異與心腦血管疾病的關(guān)系已有報(bào)道，但一氧化氮(NO)為心腦血管發(fā)病機(jī)制的探討開辟了新的研究領(lǐng)域。研究發(fā)現(xiàn)，至少有 3 種一氧化氮合酶(NOS) 同功酶，分別為神經(jīng)元型 NOS(nNOS)、誘導(dǎo)型 NOS(iNOS) 和eNOS。人eNOS含有1 203個(gè)氨基酸。NOS 3位于內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜上，某些生理活性物質(zhì)與內(nèi)皮細(xì)胞膜上的相應(yīng)受體結(jié)合后，NOS 3催化L-精氨酸生成內(nèi)皮細(xì)胞衍生性NO。近年來(lái)研究較熱的一個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)是第8號(hào)外顯子處的G894T(rs1799983)突變，從而使得298位編碼蛋白的谷氨酸被天冬氨酸取代。此位點(diǎn)是外顯子8上第894位核苷酸存在的G→T變異[10]。Markus等[11]對(duì)G894T多態(tài)性與缺血性卒中的關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)，GG、GT、TT 3種基因型頻率在病例組和對(duì)照組G894T等位基因頻率分布均無(wú)顯著性差異。法國(guó)Elbaz對(duì)460病例對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)[12]，GG基因型在無(wú)腦血管病對(duì)照組中的分布頻率為35.4%，腦梗死患者為46.1%，而腔隙性腦梗死患者中更高，說(shuō)明G894T多態(tài)性與缺血性卒中，尤其是腔隙性腦梗死發(fā)病有關(guān)。有關(guān)eNOS基因G894T多態(tài)性與腦血管疾病之間的關(guān)系雖然研究頗多，但尚無(wú)定論。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，eNOS基因G894T多態(tài)性基因型和等位基因在陰虛體質(zhì)人群和陰虛體質(zhì)導(dǎo)致的缺血性卒中患者中分布頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明該多態(tài)性與陰虛體質(zhì)導(dǎo)致缺血性腦卒中發(fā)病無(wú)關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1]張心剛，孫兆青，張大義，等.遼寧省阜新地區(qū)蒙、漢兩族農(nóng)村居民缺血性卒中的流行病學(xué)特征及危險(xiǎn)因素比較[J].中國(guó)腦血管病雜志，2006，3(12)：542-546.

[2]Meretoja A，Tatlisumak T.Thrombolytic therapy in acute ischemic stroke-basic concepts[J].Curr Vasc Pharmacol，2006，4(1)：31-44.

[3]魏崗之.腦梗死現(xiàn)代治療的熱點(diǎn)與展望[J].中國(guó)腦血管病雜志，2004，1(5)：193-195.

[4]Flossmann E，Schulz UG，Rothwell PM.Systematic review of methods and results of studies of the genetic epidemiology of ischemic stroke[J].Stroke，2005，35(1)：212-227.

[5]李雪青，馬樹祥，崔建美，等.從《靈樞》論針灸與體質(zhì)[J].中國(guó)針灸，2010，30(5)：434-436.

[6]張?jiān)圃疲瑥埡Ｃ罚卢摚?168例缺血性腦卒中患者體質(zhì)特點(diǎn)研究[J].上海中醫(yī)藥雜志，2008，42(2)：31-34.

[7]王琦.中醫(yī)體質(zhì)學(xué)說(shuō)的研究現(xiàn)狀與展望[J].山東中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1994，8(2)：74-82.

[8]中華神經(jīng)科學(xué)會(huì)，中華神經(jīng)外科學(xué)會(huì).各類腦血管疾病診斷要點(diǎn)[J].中華神經(jīng)科雜志，1996，29(6)：379-380.

[9]Nadaud S，Bonnardeaux A，Lathrop M，et al.Gene structure，polymorphism and mapping of the human endothelial nitric oxide synthase gene[J].Biochem Biophys Res Commun，1994，198(3)：1027-1033.

[10]Marsden PA，Heng HH，Scherer SW，et al.Structure and chromosomal Localization of the human constitutive endothelial nitric oxide synthase gene[J].J Biol Chem，1993，268(23)：17478-17488.

[11]Markus HS，Ruigrok Y，Ali N，et al.Endothelialnitric oxide synthase exon 7 polymorphism，ischemic cerebrovascular disease，and carotid atheroma[J].Stroke，1998，29(9)：1908-1911．

[12]Elbaz A，Poirier O，Moulin T，et al．Association between the Glu298Asp polymorphism in the endothelial constitutive nitric oxide synthase gene and brain infarction[J].Stroke，2000，31(7)：1634-1639．

(本文編輯：曹志娟)

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