肝臟缺血再灌注損傷中硫化氫的作用新進展

摘要：肝臟缺血再灌注（hepatic ischemia reperfusion，HIRI）會對肝功能造成嚴重損傷，尤其是當患有肝硬化時，風險便會加劇。合理劑量的硫化氫（H2S）對大鼠HIRI可起到保護作用。本文通過構建肝硬化大鼠模型，研究了肝硬化大鼠中H2S的作用。

關鍵詞：大鼠；肝臟缺血再灌注；肝硬化

Abstract：Hepatic ischemia reperfusion （hepatic ischemia reperfusion， HIRI） can cause serious damage to the liver function， especially when suffering from cirrhosis of the liver， the risk will aggravate the. The appropriate dose of hydrogen sulfide （H2S） on rat HIRI may play a protective role. This paper builds a model of hepatic cirrhosis rats， to study the role of H2S in cirrhotic rats.

Key words：Rat；Hepatic ischemia reperfusion； Liver cirrhosis

HIRI是肝切除、肝移植手術中一種極為常見的需要肝血流阻斷的過程，目的是為了減少出血量、優化手術時間，但缺血再灌注極易出現鈣超載、過氧化應激、無復流等現象，損傷肝功能及預后[1]。故而，本文對大鼠HIRI損傷中H2S的作用進行了研究。

1 試驗

1.1制備模型 以200g 左右的SPF級大鼠制備肝硬化模型（多因素綜合法），分為誘導期、成模期，該過程時間為9w，當肉眼可見肝臟組織切片、纖維隔與假小葉形成、硬化結節形成時視為成功。誘導期第1w以苯巴比妥鈉0.35g+1L蒸餾水為飲用水。成模期以四氯化碳（40%）+0.5ml/（百克）中性菜籽油溶液皮下注射（2次/w），以乙醇溶液（10%）作為飲用水；第6w后改為四氯化碳（50%）+0.4ml/（百克）中性菜籽油溶液皮下注射（2次/w，使用4w），以乙醇溶液（20%）作為飲用水。

1.2分組、指標檢驗 將模型隨機分為4組：HIRI組、Sham組（假手術組）、NaHS組（NaHS預處理組）與5-HD組（線粒體KATP通道阻斷+NaHS預處理組），每組8只。給予NaHS組55μmol/（kg·d）H2S供體NaHS（硫氫化鈉），采用腹腔注射的方式使其生成H2S，7d后組建HIRI模型，肝中葉與左葉的膽管、靜脈、動脈均用無損傷動脈夾結扎1h，開放后再灌注2h；HIRI組組建肝中葉與左葉缺血再灌注模型；Sham組不結扎，只將肝中葉與左葉的膽管、靜脈、動脈分離；5-HD組于肝臟缺血前10～15min以5.0mg/kg的5-羥葵酸靜脈注射，模型同NaHS組。4組再灌注末取4.0ml血（腔靜脈），離心15min（3000rad/min），行血清抽取，檢測TBIL（總膽紅素）、DBIL（直接膽紅素）、ALT（谷丙轉氨酶）與AST（谷草轉氨酶）的濃度。

2 結果

2.1研究中大鼠數量 本研究中的大鼠數量為38只，6只大鼠因在建模過程中對四氯化碳的耐受性不強出現死亡，因此，納入研究的大鼠實際數量為32只。

2.24組大鼠肝功能測定結果 Sham組TBIL、DBIL、ALT與AST均數分別為（38.6±5.2）μmol/L、（25.5±4.4）μmol/L、（87.6±15.7）U/L、（70.1±12.9）U/L；HIRI組TBIL、DBIL、ALT與AST均數分別為（164.5±26.0）μmol/L、（115.7±13.4）μmol/L、（386.1±22.0）U/L、（352.7±24.9）U/L；NaHS組TBIL、DBIL、ALT與AST均數分別為（81.9±17.6）μmol/L、（63.9±16.9）μmol/L、（185.4±11.4）U/L、（155.9±18.4）U/L；5-HD組TBIL、DBIL、ALT與AST均數分別為（148.1±22.0）μmol/L、（139.9±22.6）μmol/L、（355.2±16.9）U/L、（325.7±21.8）U/L。可見，Sham組的肝功能指標不及HIRI組、NaHS組與5-HD組；5-HD組與HIRI組肝功能指標差別不大；5-HD組與HIRI組肝功能指標均明顯高于NaHS組。

3 討論

肝切除、肝移植等手術中需要干血流阻斷時，會引入HIRI操作，以控制肝血流，避免術中造成大量出血現象，從而縮短手術時間。但手術過程中常會出現損害肝功能的事件，如炎癥反應、過氧化應激等，不但加重了肝負擔，還影響其預后。隨著科學技術與醫療水平的不斷提高，近年來手術操作技術、麻醉技術以及圍手術期的護理水平均有所提升，大大縮短了肝血流阻斷的時間，且臨床效果較為理想[2]。

肝硬化屬慢性肝病末期階段，并發癥多見，如門脈高壓、肝功能降低（喪失）等，當患者肝功能儲備條件受限后，HIRI無疑加重了術后肝衰竭（或死亡）風險。H2S作為氣體信號分子（內源性），會以低濃度分子的形式存在于患者機體內，且脂溶性較強，在自由擴散的作用下會順利透過細胞膜，促使病理學作用與生理學作用的發揮，如參與代謝、參與炎癥反應、舒張血管、發揮毒性效應等，因此，細胞保護作用越來越受到業界人士的普遍關注；H2S同時也是極為重要的舒血管物質（肝臟微循環中），在舒張平滑肌方面具有一定的優勢，肝硬化進展過程中，其含量變化會與肝功能損害程度二者之間呈現出正比關系，隨著患者病情不斷加重后，患者機體內的H2S含量（內源性）就會出現明顯降低趨勢。

本研究在制備肝硬化模型上選用了多因素綜合法，所需時間短且死亡率較低，較好的模擬了慢性肝炎轉歸情況。研究結果表明，肝硬化大鼠肝左葉與中葉缺血1h且再灌注2h后，肝功能指標急劇上升，NaHS組經提升H2S含量且再灌注后，肝功能指標較之于HIRI組要低的多，給予5-HD后，NaHS保護作用降低。臨床上已有學者發現H2S對大鼠HIRI可起到保護作用，陳氏[3]等在大鼠HIRI中H2S作用進行研究時，當大鼠肝臟缺血達1h、5h后再灌注，觀察組行再灌注5min前施加1.0mg/kg的H2S供體，較之于對照組對AST上升的抑制率為79.3%，ALT上升的抑制率為67.6%，其機制或與抗凋亡能力、抗氧化應激能力增強有關；杜氏等的研究結果表明[4]，NaHS組可有效減輕大鼠HIRI，且后行5-HD與格列苯脲處理后，NaHS保護作用下降，這與本研究結果一致。

綜上所述，H2S在判斷肝硬化病情與預后方面可起到至關重要的作用，下一步還應加大探索力度，以發現更好的H2S供體，并促使H2S給予劑量與時機更具科學化。

參考文獻：

[1]張國倩，王倩.硫化氫在肝缺血再灌注損傷中保護作用的檢驗指標研究進展[J].國際生物制品學雜志，2013，21（03）：1623-1624.

[2]樊海寧，鄧勇，張永健，等.氣體信號分子硫化氫在大鼠肝缺血—再灌注損傷中的作用[J].青海醫學院學報（醫學版），2009，12（14）：1547-1548.

[3]陳文雁，王雯婷，孔高茵，等.硫化氫在肝硬化大鼠肝臟缺血再灌注損傷中的保護作用[J].醫學臨床研究，2013，30（07）：1292-1293.

[4]杜津，王倩，張軍，等.ATP敏感性鉀通道在硫化氫減輕大鼠肝缺血再灌注損傷中的作用[J].中華麻醉學雜志，2012，32（02）：228-231.

編輯/馮焱