HPLC法測(cè)定天麻素緩釋片中天麻素的含量

摘要：目的 探究采用高效相色譜含量測(cè)定法（HPLC法）測(cè)量天麻素緩釋片中天麻素的含量。方法 將十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑，應(yīng)用以乙腈-0.05%磷酸溶液作為流動(dòng)相，采用250 mm×4.6 mm，5 μm的Spursil C18色譜柱，對(duì)波長(zhǎng)為220 mm，1.0 ml/min的流速進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定天麻素緩釋片中天麻素的含量。結(jié)果 天麻素平均含量標(biāo)示為93.32%，RSD為0.33%（n=6）；天麻素峰面面積的精密度RSD為0.85%（n=5）；對(duì)于天麻素的平均回收率高達(dá)100.5%，RSD（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差）為0.42%（n=9）。結(jié)論 HPLC發(fā)測(cè)量天麻素緩釋片中的天麻素含量的靈敏度高且速度快、準(zhǔn)確性高，值得臨床上進(jìn)一步研究和推廣。

關(guān)鍵詞：HPLC法；天麻素緩釋片；天麻素含量

天麻是蘭科多年寄生草本植物，干燥塊莖成為天麻，是常用且名貴的藥材，其藥用和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，天麻選取高海拔育種創(chuàng)造了天麻品牌[1]。藥理學(xué)研究證實(shí)，天麻對(duì)于神經(jīng)中樞有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜和安眠等抑制的作用，腦血流量得到了增加，且對(duì)于椎基底的動(dòng)脈改善了其供血不足的問(wèn)題，起到了對(duì)于神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用[2]。臨床上一般選取天麻可以治療頭暈、頭痛、眩暈、神經(jīng)衰弱、小兒驚風(fēng)、破傷風(fēng)、癲癇、肢體麻木及腦外傷性綜合征等臨床癥狀，對(duì)于治療三叉、坐骨神經(jīng)痛有幫助[3]。本文應(yīng)用高效液相色譜法（HPLC法）對(duì)天麻緩釋片中的天麻素含量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)其質(zhì)量做全面的控制，現(xiàn)報(bào)到如下。

1資料與方法

1.1儀器 選擇Agilent HP Chemsatation 工作站的Agilent HP1100高效液相色譜儀器、濟(jì)寧超聲波有限公司的KT-300Y超聲處理機(jī)、METTLER TOlEDO儀器有限公司（上海）的SB204-N電子分析天平。

1.2天麻素緩釋片含量的測(cè)定方法

1.2.1色譜條件 選擇250 mm×4.6 mm，5 μm的Spursil C18色譜柱，乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）作為流動(dòng)相，220 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，1.0 ml/min的流速，25℃的柱子的溫度，20 μl的進(jìn)樣量。依據(jù)天麻素峰計(jì)算出理論塔板數(shù)不應(yīng)該低于3000。

1.2.2制備對(duì)照品溶液 精確的選取20mg的天麻素對(duì)照品，融入流動(dòng)相進(jìn)行溶解，并且稀釋且定容在100 ml，搖晃均勻，配成天麻素對(duì)照品的儲(chǔ)備液0.2 mg/ml。精準(zhǔn)的量取8 ml的儲(chǔ)備液，放置在100 ml的量瓶?jī)?nèi)，添加流動(dòng)相將其容至刻度處，制成每1 ml的天麻素對(duì)照品溶液含有16 μg的天麻素。

1.2.3供試品溶液的制備 選取天麻素緩存片20片，去除衣膜以后進(jìn)行精密的稱重、研細(xì)，準(zhǔn)確的稱取天麻素約160 mg的藥物，放置在100 ml的量瓶中，添加適量的流動(dòng)相，幫助天麻素溶解通過(guò)超聲進(jìn)行30 min中的處理。放置冷卻后，再用流動(dòng)相進(jìn)行溶解稀釋直至刻度處，進(jìn)行搖勻且濾過(guò)。精準(zhǔn)的量取1 ml的溶液，放置在100 ml的量瓶里，再用流動(dòng)相將其稀釋至刻度位置，搖拌均勻，獲得天麻素供試品的溶液。

1.2.4精密度實(shí)驗(yàn) 選取天麻素對(duì)照品溶液，參照色譜條件，連續(xù)5次進(jìn)樣，測(cè)定峰面的面積來(lái)測(cè)量天麻素的含量。

1.2.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 選取天麻素對(duì)照品溶液和天麻素供試品溶液，進(jìn)行0、4、8、12、24 h分別放置后，依照色譜條件，對(duì)天麻素峰面面積進(jìn)行測(cè)量，將面積作為考察穩(wěn)定性的標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 精確的稱取天麻素緩釋片約含有160 nm天麻素6份，制備成供試品溶液，依照色譜條件，將溶液注入色譜儀對(duì)峰面進(jìn)行面積的測(cè)定，同樣對(duì)對(duì)照品溶液進(jìn)行測(cè)定，依據(jù)外標(biāo)法進(jìn)行計(jì)算。

1.2.7回收率實(shí)驗(yàn) 依次精確的稱取劑量為16、20、24 mg各3份的天麻素對(duì)照品，各自加入輔助處方量的輔料，分別放置在100 ml的量瓶中，融入適量的流動(dòng)相進(jìn)行溶解通過(guò)超聲處理30 min，再通過(guò)流動(dòng)相進(jìn)行稀釋直至刻度處，搖晃均勻。經(jīng)過(guò)過(guò)濾以后將過(guò)濾液丟棄，精確的測(cè)量8.0 ml的續(xù)濾液，分別放置100 ml的量瓶中，再次用流動(dòng)相稀釋直至刻度位置，攪拌均勻，從中抽取進(jìn)樣的20 μl進(jìn)行測(cè)定。選擇天麻素對(duì)照品溶液，作為對(duì)比進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。

2結(jié)果

2.1樣品含量測(cè)定結(jié)果 3批天麻素緩釋片的樣品，按照天麻素緩釋片的制備提供的試品溶液，依據(jù)色譜的條件，將其注入到液相色譜儀，檢測(cè)并記錄峰面積，同樣選取天麻素對(duì)照品的溶液進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算峰形面積來(lái)測(cè)定天麻素的含量，天麻緩釋片自制批號(hào)為20110801，標(biāo)示的含量為97.22%；批號(hào)為20110812，標(biāo)示的含量為100.65%；批號(hào)為20110824，標(biāo)示含量為99.43%。

2.2穩(wěn)定性、重復(fù)性、精密度、回收率結(jié)果 精確度：通過(guò)計(jì)算天麻素峰面面積的RSD為0.85%（n=5）。穩(wěn)定性：對(duì)照品溶液中天麻素峰面的面積RSD為0.62%（n=5）；供試品溶液中的天麻素峰面面積RS：為0.43%（n=5）。在24 h內(nèi)天麻素的對(duì)照品和供試品穩(wěn)定性均良好。重復(fù)性：樣品藥物中的天麻素平均含量標(biāo)示為93.32%，RSD為0.33%（n=6）；回收率：天麻素的平均回收率為100.5%，RSD=0.42%（n=9）。

3討論

天麻素在水中、甲醇中很容易溶解，選取不同種類和匹配的溶劑促成流動(dòng)相和溶劑，如甲醇、乙腈-0.05%磷酸、甲醇-0.2%磷酸、甲醇-水等溶劑。考察樣品的色譜行為。

通過(guò)對(duì)于200～400 nm的紫外波長(zhǎng)范圍進(jìn)行掃描，經(jīng)檢測(cè)天麻素在220 nm處吸收性最大，因此，將220 nm作為檢測(cè)的波長(zhǎng)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，甲醇影響了峰形的變化，對(duì)流動(dòng)相比例進(jìn)行調(diào)整，可以對(duì)乙腈-0.05%磷酸的濃度進(jìn)行確定（3∶97），對(duì)于提取溶劑以及流動(dòng)相時(shí)，收獲滿意的效果：提供保留的時(shí)間、峰形及分離效果良好。

綜上所述，HPLC法對(duì)于準(zhǔn)確的測(cè)出天麻緩存片中的天麻素的含量準(zhǔn)確率較高，可以成為測(cè)定天麻素含量標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)定方法，值得臨床進(jìn)一步分析和研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]李海松，杜娟.天麻及其提取物在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].光明中國(guó).2012，27（22）：36-39.

[2]范秀鳳，郭澄.天舒膠囊治療偏頭痛的作用機(jī)制與臨床應(yīng)用[J].中國(guó)藥師.2011，14（12）：529-539.

[3]趙輝.天麻素的臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].海峽藥學(xué).2009，20（33）：29-30.

編輯/肖慧