血凝試驗影響因素淺析

血凝試驗臨床上常規的檢查項目主要包括凝血酶原時間（PT）測定、活化部分凝血活酶時間（APTT）測定、凝血酶時間（TT）測定、纖維蛋白原（Fg）測定，是一組能反應凝血途徑中各種凝血因子異常的篩查試驗。這些檢查項目已廣泛應用于出血、血栓性疾病診斷、鑒別診斷、療效觀察、抗凝藥物劑量監測和患者手術前的檢查。血凝試驗檢驗是一項比較復雜的過程，且容易出現誤差，通常情況下，在血凝試驗過程中其中的某些因子一旦被某些因素激活，會造成一系列的連鎖反應，造成檢測結果出現很大的偏差[1]。這就要求我們檢驗人員必須了解和掌握與之相關的因素，盡量避免其對試驗結果的影響。本文對影響血凝試驗以下幾個方面因素進行探討。

1 血液標本的采集、運送與處理

1.1標本采集前患者的準備 患者要處于平靜和空腹狀態，以免造成凝血因子、血小板和纖溶成分的激活。采血前1w內不可服用對血凝試驗有影響的藥物，某些藥物本身就具有影響凝血機制的功能或是有協同抗凝作用[2]，如水合氯醛、阿司匹林、保泰松、氯貝丁酯、吲哚美辛等可使口服抗凝藥物在血液中濃度明顯增高。大劑量使用青霉素（血漿濃度達5000U/ml）可使PT、APTT明顯延長，且隨藥物濃度的增加而延長[3]。頭孢哌酮分子中甲硫甲唑環的側鏈與前凝血酶原相仿；羧酶可錯誤地與抗生素結合而導致凝血酶原的形成減少，干擾肝臟中維生素K的代謝，導致低凝血酶血癥[4]。口服避孕藥、雌激素、妊娠、香豆素類藥物、肝素、天冬酰胺酶、納洛酮可影響APTT。

1.2采血用具 采血建議使用真空管收集標本，或選擇使用一次性塑料注射器、硅化玻璃注射器。貯血使用塑料試管或硅化玻璃管，不宜使用普通玻璃器，避免血小板和凝血因子活化。樣本采集后，若不能立即測定，應將樣本加塞保存，因為樣本暴露于空氣中可使pH值升高，引起血漿凝血酶原時間（PT）和活化部分凝血活酶時間（APTT）延長。

1.3標本采集 采血前不要拍打采血部位，采血人員技術熟練，“一針見血”，組織損傷后，組織液中的因子Ⅲ可激活外源性凝血途徑，加速凝血酶原的消耗，造成結果偏低，應避免溶血及組織液污染。止血帶應盡可能扎得松些，時間不超過1min，否側可造成局部血液濃縮和組織型纖溶酶原激活物釋放等，引起血小板、凝血因子和纖溶成分活化[5]。抽血速度要緩慢、均勻，使血液沿管壁緩慢注入注射器，防止氣泡產生。產生的泡沫可使纖維蛋白原和某些凝血因子變性，影響試驗結果。采血量的多少根據檢驗項目需要而定，血量與抗凝劑量比例要合適，采血后迅速將血液與抗凝劑輕輕的顛倒混勻5～8次，但不要用力震蕩，以免凝血蛋白破壞。標本避免出現凝塊和溶血。采血順序也影響實驗結果，朱忠勇報道[6]：PT血樣采集順序第二管、第三管與第一管比較差異有顯著性（P<0.01），APTT的差異則無顯著性（P>0.05）。因此，多管標本采集時，第一管應采集血凝試驗。

1.4標本的運送和保存 標本采集后一般在室溫下運送，及時送檢，嚴防劇烈震蕩、日光直射和污染。因低溫會損傷血小板，并可導致某些凝血因子活化，使PT或APTT縮短。在原血漿管置室溫2h測得的結果與立即測定的PT、APTT結果差異無顯著性（P>0.05），而分離出血漿的試管置室溫2h所測結果與立即測定PT、APTT結果有明顯差異（P<0.01）[7]。凝血試驗應在室溫保存4h內完成，未能完成的應在4℃冰箱保存，必須在24h內完成。-20℃保存標本需1w內完成，否則會對結果產生影響[8]。標本使用前充分融化，避免反復凍融。

1.5標本的分離 一般在室溫下及時離心分離血漿。3000rpm（或2500g）離心15min，收集上層黃色血漿。離心盡可能除去血漿中的血小板，分離乏血小板血漿。

2 抗凝劑的選擇及使用

凝血試驗常用的抗凝劑為109mmol/L枸櫞酸鈉，它能有效地阻止因子Ⅴ、降解Ⅷ，血液與抗凝劑比例為9：1，一定要準確，標本中抗凝劑的含量可改變血漿中鈣離子濃度，而影響試驗結果。如果抗凝劑的量增多或采血量過少，可使PT、APTT時間明顯延長。當被檢者紅細胞壓積（HCT）>0.55或<0.20時，則需調整抗凝劑的比例，抗凝劑用量（ml）-0.00185×被檢血液量（ml）×[1-HCT（%）][9]。血凝試驗不宜使用EDTA·Na2、肝素、草酸鹽作為抗凝劑，EDTA鹽對因子Ⅴ保護性差，因為它能抑制或干擾纖維蛋白形成時纖維蛋白單體聚合，草酸鹽與鈣離子形成不溶性沉淀物，可影響血凝儀凝固終點的檢測，肝素可與AT作用并抑制許多凝血因子反應。

3 試劑的選擇及使用

3.1根據檢測目的選用敏感性和特異性高的試劑，盡可能使用儀器配套試劑、校準品和質控物。對口服抗凝藥物的檢測，為了便于估計抗凝劑療效或指導用藥，最好選擇INR報告方式。因此，選擇試劑應標有ISI值，理論上ISI值越接近1.0越好，ISI值的高低決定INR的精度，也決定試劑的質量[10]。

3.2試劑復溶時使用無Ca2+的未被生物、化學污染的去離子水溶解30min后使用。溶解試劑時不能劇烈振搖，以防產生氣泡。復溶后試劑不能反復凍融，防止試劑中因子失活而影響測定結果。不用時保存溫度為2℃～8℃，并在有效期內使用。

4 其它因素

血凝儀屬于精密儀器，應提供一個良好的檢測環境，檢測環境可影響儀器的運行狀態或光學信號。按照要求對儀器定期進行保養和維護及儀器的校正，使儀器保持良好的工作狀態。使用配套定標質控品，嚴格按照血凝儀說明書上的程序建立標準曲線，或者使用適宜新鮮（混合）血漿，其定值必須直接或間接溯源至國際標準。樣品與試劑的預溫時間要準確，測定溫度為36.5℃～38.5℃，加試劑時防止氣泡產生。因試劑的不同、檢測原理的差異等，臨床實驗室可建立自己的參考值區間。

綜上所述，凝血過程包括一系列的反應，常受到許多測試前因素的影響，因此我們實驗室工作人員要掌握和了解這些因素，盡量避免其對試驗結果的干擾，確保結果準確可靠，為臨床提供一個可靠的診斷依據。

參考文獻：

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[10]程峰，朱忠勇.凝血酶原時間測定標準化及在抗凝治療中應用[J].中華醫學檢驗雜志，1995，18（2）：111.

編輯/成森