重癥支氣管哮喘患兒氣道TGF—β與氧化負荷之間的關系

摘要：目的 測定哮喘患兒氣道中TGF-β濃度及其與氧負荷（8-異前列烷及丙二醛）之間的關系。方法 從68例哮喘患兒及45例健康志愿者中收集痰標本（嚴重者28例），測定痰中TGF-β濃度及其與氣道氧化負荷（8-異前列烷及丙二醛）之間的關系。結果 重癥哮喘患兒具有更高的TGF-β濃度，TGF-β濃度與氣道氧負荷（8-異前列烷及丙二醛）明顯相關。結論 重度哮喘患兒氣道中TGF-β濃度升高，后者與氣道氧負荷相關。

關鍵詞：哮喘；氧負荷；轉化生長因子；8-異前列烷；丙二醛

中圖分類號：R681 文獻識別碼：A

重度支氣管哮喘是一種復雜的疾病[1，2]，即使用大劑量的糖皮質激素和支氣管擴張劑癥狀也不易控制。盡管人們對哮喘患者肺功能紊亂的機制知之甚少，但是它肯定與支氣管壁的結構變化相關。轉化生長因子（TGF-β）是與氣道纖維化相關的細胞因子，通常以無活性的前體形式與TGF-β結合蛋白相結合形成復合體，后者一旦遇到活性氧（如8-異前列烷與丙二醛），便從復合體上脫離而被激活，然后活化纖維母細胞并促使活性氧的大量生成，從而引起氣道重塑。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2013年12月～2014年12月在本院呼吸內科住院治療的發作期重癥支氣管哮喘患兒68例（其中重度哮喘28例）作為實驗組，其中男40例，女28例，年齡6～18歲。另選取45例健康志愿者作為正常對照組，本人及家屬無過敏性疾病史，其中男25例，女20例，平均年齡（14.0±10.2）歲。

1.2納入標準 實驗組所有病例對至少一種過敏原敏感，有確診的過敏性鼻炎或者變態反應性皮炎史，第1s用力肺活量（FEV1）最少有12%的可變幅度，沒有肺炎史，至少4w內無上呼吸道感染病史。重癥哮喘診斷符合中華醫學會呼吸學會的重癥支氣管哮喘診斷標準。有免疫功能缺陷的、小于35w的早產患兒均被排除在外。

1.3試劑與儀器 TGFβELISA試劑盒、8-異前列烷ELISA試劑盒及丙二醛ELISA試劑盒均購于上海拜力生物科技有限公司。Kayto RT-6000酶標儀、Kayto RT-3000洗板機、Ketong恒溫箱均借用于本醫院檢驗科。

1.4方法

1.4.1痰液標本采集 對于支氣管哮喘組患兒，分別于哮喘發作時霧化吸入含有0.4mg沙丁胺醇的3%濃鹽水50ml，30min后囑其用力咳痰，收集痰液10ml；然后以1200rpm轉速離心7min，取沉淀物約2ml分裝冷藏保存于-20℃低溫冰箱中；對于對照組志愿者，霧化吸入50ml 0.9%生理鹽水后，囑其用力咳痰，收集痰液10ml，然后離心沉淀，分裝冷凍保存。

1.4.2 TGF-β、8-異前列烷及丙二醛濃度的測定 用TGF-βELISA試劑盒測定痰沉淀標本中的游離TGF-β濃度，在450nm吸收波長處讀數；痰沉淀標本先用鹽酸處理，再以氫氧化鈉中和鹽酸后，再以上述試劑盒測定總TGF-β濃度。以8-異前列烷ELISA試劑盒測定8-異前列烷濃度，該試劑盒的靈敏度是2.7pg/ml，在420nm吸收波長處讀數；用丙二醛ELISA試劑盒丙二醛濃度，該試劑盒的靈敏度為10pg/ml，在580nm吸收波長處讀數。

1.5統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差來表示（x±s），采用t檢驗。相關性分析采用Spearman相關性分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1痰沉淀中TGF-β濃度 重癥哮喘組與輕-中度組的總TGF-β濃度（pg/ml）相比，差異具有顯著性（t=7.654，P<0.01）；中-輕度哮喘組與正常對照組的總TGF-β濃度相比，差異具有顯著性（t=2.223，P<0.05）。重癥哮喘組與輕-中度組的活化TGF-β濃度（pg/ml）相比，差異具有顯著性（t=2.438，P<0.05），輕-中度哮喘組與正常對照組的活化TGF-β濃度（pg/ml）相比，差異具有顯著性（t=3.226，P<0.05），見表1、2。

2.2痰沉淀中8-異前列烷與丙二醛的濃度 重度哮喘組（SA）與輕-中度哮喘組（MA）的8-異前列烷濃度相比，差異具有顯著性（t=2.861，P<0.05），輕-中度哮喘組與正常對照組的8-異前列烷濃度相比，差異具有顯著性（t=3.396，P<0.01）；重度哮喘組與輕-中度哮喘組的丙二醛（MDA）相比，差異具有顯著性（t=3.852，P<0.05），輕-中度丙二醛與正常對照組的丙二醛（MDA）相比，差異具有顯著性（t=2.223，P<0.05），見表3、4。

3 討論

本實驗研究了TGF-β與氧化負荷之間的關系。與正常對照組及輕中度支氣管哮喘組相比，重度哮喘患者支氣管灌洗液中TGF-β的濃度明顯升高，氧化應激產物8-異前列烷與丙二醛濃度更高。總之，本實驗結果顯示，升高的氣道TGF-β濃度與氣道活性氧負荷是重癥哮喘氣道生理改變的主要原因。

重癥哮喘明顯是一種異源性疾病，具有多種臨床表型，肺通氣受限是其共同特征。有人報道了一組重度哮喘患兒的肺通氣受限癥狀隨著年齡增長而快速惡化的病例，這就增加了發生并發癥的風險。我們的實驗結果顯示TGF-β在這一過程中發揮著重要作用。更加重要的是，重癥哮喘患兒TGF-β的表達會達到與成年患者變化相似的水平。本次實驗還發現：盡管控制了其他相關因子的影響，TGF-β濃度改變與支氣管哮喘惡化明顯相關。

總之，本實驗發現重癥患兒氣道中TGF-β蛋白濃度的升高與與脂質過氧化標志物8-異前列烷及丙二醛的濃度正相關，并且TGF-β的活化也與二者相關。雖然對以上變化的機理尚不了解，但是以上發現提示在重癥患兒氣道中的反饋機制導致了氣道氧化應激反應與TGF-β活化之間的惡性循環。

參考文獻：

[1]Bousquet J，Mantzouranis E，Cruz AA，et al.Uniform definition of asthma severity，control，and exacerbations：document presented for the World Health Organization Consultation on Severe Asthma[J].J Allergy Clin Immunol，2010，126：926-938.

[2]谷加麗，馬紅玲，鄭躍杰.2010-2011年深圳市福田區0-14歲兒童哮喘流行病學調查[J].當代中國兒童雜志，2012，14（12）：918-923.

編輯/成森